采用HPLC-MS/MS法测定黄冠梨中31种农药残留的研究

段爱莉 郭凤春 张娜杰

摘 要：目的：建立一种同时检测黄冠梨中31种农药残留的高效液相色谱-串联质谱的分析检测方法。方法：采用0.1%甲酸-乙腈为提取液，经C18 150 mg、PSA 200 mg、MgSO4 1 000 mg净化包净化，C18色谱柱分離，乙腈和0.1%甲酸水流动相体系梯度洗脱，在电喷雾正离子化模式下，采用多反应监测（Multi Reaction Monitoring，MRM）检测，外标法定量。结果：31种农药在0.001～0.200 μg/mL线性关系良好（R2>0.991 5），方法检出限为0.000 25～0.025 00 mg/kg，回收率为75.0%～111.5%，相对标准偏差为0.85%～6.70%，并测定了武威市产地黄冠梨样品30批，共检出农药残留8种，其中克百威检出率达67%。结论：该方法处理过程快速、简便、准确及可靠，适用于黄冠梨中31种农药残留的同时检测。

关键词：黄冠梨;高效液相色谱-串联质谱;农药残留

Determination of 31 Pesticide Residues in Huangguan Pear by HPLC-MS/MS

DUAN Aili， GUO Fengchun， ZHANG Najie

（Wuwei Food Inspection and Testing Center， Wuwei 733000， China）

Abstract： Objective： To establish a method for simultaneous determination of 31 pesticide residue in Huangguan pear by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. Method： The samples were extracted with 0.1% formic acid and acetonitrile， purified up with C18 150 mg， PSA 200 mg， MgSO4 1 000 mg purification package， separated by a C18 column with acetonitrile and 0.1% formic acid gradient elution in water mobile phase system， detected by multiple reaction monitoring （MRM） in electrospray ionization mode. External standard method for quantification. Result： The pesticide of 31 kinds was in the range of 0.001～0.200 μg/mL（R2>0.991 5）， and the detection limits were in the range of 0.000 25～0.025 00 mg/mL. The recoveries ranged from 75.0% to 111.5% and RSD in the range of 0.85%～6.70%.Thirty batches of Huangguan pear samples from three producing areas in Wuwei city were detected， and 8 kinds of pesticide residues were detected， among which the detection rate of Carburyl was 67%. Conclusion： The method is rapid， simple， accurate and reliable， and suitable for simultaneous determination of 31 pesticide residues in Huangguan pear.

Keywords： Huangguan pear; high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry; pesticide residues

黄冠梨是梨中的早熟品种，具有抗病性强、早果早产等优点。其营养价值丰富，主要含有多糖、蛋白质、维生素B1和维生素B2等人体必需的营养元素，深受消费者喜爱[1-2]。目前，黄冠梨主要分布在我国甘肃省、陕西省、河北省等地区。由于其营养丰富、含糖量高，受病虫害影响较大。种植户为提高农业产量、增加收入，常采用化学药物进行病虫害防治，不仅对生态环境造成污染，也出现农药残留超标现象[3-6]。因此，本实验通过对武威市常用农药品种调查，确定采用液相色谱-串联质谱法结合QuEChERS净化技术，建立高效液相色谱-串联质谱（High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）法同时测定黄冠梨中31种农药残留，为保障黄冠梨食用安全性提供科学的技术支持。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

样品来自武威市黄冠梨种植基地。

氯唑磷、三唑磷、甲拌磷、毒死蜱、对硫磷、氧乐果、杀扑磷、甲胺磷、哒螨灵、敌敌畏、水胺硫磷、丙溴磷、腈苯唑、甲霜灵、烟碱、灭多威、克百威、敌百虫、硫线磷、啶虫脒、吡虫啉、多菌灵、灭蝇胺、烯酰吗啉、噻虫嗪、速灭威、乙酰甲胺磷、甲基毒死蜱、苯醚甲环唑、苯磺隆和涕灭威标准品，浓度为100 μg/mL，均来自中国农业部;乙腈、甲醇、甲酸均为色谱纯，赛默飞世尔公司;甲酸铵为色谱纯，默克生命科学技术公司;丙酮为色谱纯，天津大茂化学试剂厂;乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（Primary-secondary Amine，PSA）40～60 μm、十八烷基硅烷键合硅胶（C18）40～60 μm，均为Agilent公司。

1.2 仪器与设备

1290-6470 HPLC-MS/MS三重四极杆液质联用仪，美国Agilent公司;3K15台式高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司;A11BC025分析研磨机，德国IKA公司;JEA502电子天平，上海浦春计量仪器有限公司;SQP 10 mg电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司;AutoEVA-08IR全自动定量浓缩仪，睿科仪器有限公司;YMT-2500PULS多管涡旋混匀仪，上海熙扬仪器仪器有限公司;Milli-Q超纯水机，美国Millipore公司。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液配制

准确吸取一定量的浓度为100 μg/mL标准溶液配制成0.001 μg/mL、0.005 μg/mL、0.010 μg/mL、0.020 μg/mL、0.050 μg/mL、0.100 μg/mL和0.200 μg/mL系列的31种混合标准工作溶液，现配现用。

1.3.2 样品制备

准确称取粉碎均匀的样品10 g（精确至0.001 g），置于50 mL具塞离心管中，加入10 mL 0.1%甲酸-乙腈提取液，涡旋混匀5 min，振荡25 min，在4 ℃下5 000 r/min离心10 min。准确移取5.0 mL上清液加入含有C18 150 mg、PSA 200 mg、MgSO4 1 000 mg的15 mL离心管中，涡旋混匀1 min，4 000 r/min离心10 min，吸取上清液过0.22 μm有机滤膜后待测。

1.3.3 仪器条件

（1）液相色谱条件。Agilent technologeies C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）;柱温30 ℃;进样量2 μL;流速0.3 mL/min;后运行时间5 min。梯度洗脱程序见表1。

（2）质谱条件。电喷雾离子源ESI+，雾化气压力0.35 MPa，离子源温度350 ℃，干燥气流速10 L/min，毛细管电压4 000 V。

1.3.4 数据处理

采用Quantitative Analysis（Quant-My-Way）软件处理数据，以MicrosoftExcel 2007和MassHunter Quanlitative Analysis软件分析并绘图。

2 结果与分析

2.1 提取方法的确定

同时检测31种农药残留时，为避免基质中干扰组分被提取，本实验选用0.1%甲酸水-乙腈作为提取剂，采用QuEChERS方法提取，浓缩后用0.1%甲酸水-乙腈定容，目标分析体系中去除色素效果明显，体系溶液透明清澈。

2.2 仪器测定参数优化

2.2.1 流動相梯度洗脱条件的确定

比较方案A（0～3.0 min，90%a;3.1～6.0 min，90%a→55%a;6.1～18.0 min，30%a;18.1～22.0 min，10%a;22.1～25.0 min，90%a）和方案B（见表1）两种梯度条件下用0.1%甲酸水（a）和乙腈（b）为流动相采集的31种农药的色谱图，见图1。根据各个目标化合物的分离效果，确定方案B为本实验梯度洗脱条件。

2.2.2 流动相体系的确定

比较3种流动相乙腈-水、0.1%甲酸水乙腈-0.1%甲酸铵水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液体系下的色谱图，同等测定条件下，考虑色谱峰的分离效果和响应情况，确定乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相体系，见图2。

2.2.3 质谱条件的优化

将31种农药的单个标准溶液（0.050 μg/mL）采用仪器自动优化的方式确定出动态多反应监测模式（Multiple Reaction Monitoring，MRM）条件，使其具有较高的灵敏度和选择性。因此，本文以MRM方式建立了31种农药的质谱条件，见表2。

2.3 线性关系、检出限及定量限

将系列标准工作液按优化后条件进样测定，以浓度为横坐标x，峰面积y为纵坐标，建立线性回归方程，以仪器的3倍和10倍信噪比（S/N）为方法的检出限和定量限。31种农药在0.001～0.200 μg/mL线性关系良好，相关系数R2为0.991 5～0.999 9，检出限为0.000 25～0.025 00 mg/kg，定量限为0.001～0.075 mg/kg，基本满足农药残留检测要求，结果见表3。

2.4 回收率和精密度试验

在黄冠梨空白样品中添加3个水平（0.05 mg/kg、0.10 mg/kg、0.20 mg/kg），每个水平做6个平行实验，其平均回收率为75.0%～111.5%，测定值的相对标准偏差为0.85%～6.70%，表明该方法准确度高、重复性好，能够满足日常检测需求。

2.5 样品的测定

随机采集武威市黄冠梨基地样品共30批，检出农药8种，见表4。其中克百威检出率较高，为67.0%;毒死蜱次之，检出率为33.0%。测定结果显示，7种农药的残留水平值较低，均低于GB 2763—2021规定的最大残留限量值，农药三唑磷有检出，但残留量明显低于定量限。

3 结论

本文建立了高效液相色谱-串联质谱法结合QuEChERS技术测定黄冠梨中31种农药残留的分析检测方法。结果显示，31种农药在0.001～0.200 μg/mL线性关系良好，相关系数为0.991 5～0.999 9，检出限为0.000 25～0.025 00 mg/kg，回收率为75.0%～111.5%，相对标准偏差为0.85%～6.70%。该方法前处理操作简单，净化效果好，准确度和精密度高，适合黄冠梨中多种农药残留的定性和定量测定，可为今后黄冠梨中农药残留的监测和风险评估提供一定的技术支撑。

参考文献

[1]朱大洲，屠振华，史波林，等.武威市凉州区皇冠梨营养品质分析研究[J].食品安全质量检测学报，2016，8（7）：3046-3054.

[2]何近刚，冯云霄，李丽梅，等.黄冠梨果实采收和贮藏品质评价体系的建立[J].河北农业大学学报，2016，42（4）：35-43.

[3]王小龙，杨玲.武威市凉州区三种梨品质分析研究[J].中国食品工业，2017（4）：52-55.

[4]杨志敏，吴福祥，许晓辉，等.基于动态多反应监测模式下的高效液相色谱串联质谱法同时测定枸杞中44种农药残留[J].食品工业科技，2020，41（1）：201-208.

[5]汤丽华，马桂娟，朱捷，等.高效液相色谱-串联质谱法同时测定枸杞中31种农药残留[J].食品工业科技，2017，38（14）：26-45.

[6]黄何何，张缙，徐敦明，等.QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法同时测定水果中21种植物生长调节剂的残留量[J].色谱，2014，32（7）：707-716.