长期冻存对血小板聚集功能的影响

郭路生，李雪冰，张丽娜 (.吉林医药学院附属医院，吉林 吉林 0；.吉林市中心血站，吉林 吉林 00；.吉林医药学院护理学院，吉林 吉林 0)

目前，机采血小板是临床上补充血小板，预防出血和止血最主要的血液制剂。按现行《全血及成分血质量要求》制备的机采血小板，保存期为5 d[1]。由于保存期短，血站和医院均无法大量库存，因此难以保证临床用血需求。近年来，国内多家血液中心开始探索制备可以长期保存的冰冻血小板[2-3]。本研究探讨长期冻存对血小板聚集功能的影响。

1 资料和方法

1.1 研究材料

选择吉林市中心血站2018年随机采集制备的冰冻机采血小板20份，血型“O”型，Rh阳性,冻存于-80 ℃血液保存箱内3年。

1.2 仪器与试剂

血栓弹力图仪(TEG5000，美国血液技术公司)；血球分析仪(SYSMEX XS1000i，日本希森美康株式会社)；凝血分析仪(UP3000，上海太阳生物技术有限公司)；血小板聚集功能检测试剂盒(批号：HMO4702，美国血液技术公司)。

1.3 实验分组

在临床样本中，根据血球分析仪和凝血分析仪检测结果，随机选择20个血小板计数在(150～180)×109/L之间，且凝血常规检验结果均正常的枸橼酸抗凝全血样本。每个样本两等分分别纳入A、B两组。A组为对照组，B组为冰冻血小板输注模型组。

1.4 冰冻血小板输注模型的建立

20份冰冻血小板样本，1200 r/min离心10 min，弃上清，制成压积血小板，备用。B组样本1200 r/min离心10 min，分离上清备用；压积红细胞盐水洗涤3次后，1200 r/min离心10 min，弃上清。用分离的上清重悬压积冰冻血小板，随机配对加入B 样本，调整血小板终浓度为(150～180)×109/L之间。

1.5 显微镜检观察血小板形态变化

取A组样本，120 r/min离心10 min，制成富血小板血浆[4]。取上层血浆，1200 r/min离心10 min，弃上清，取沉淀物制成血涂片。冰冻机采血小板从-80 ℃血液保存箱内取出后，立即放入37 ℃恒温解冻水浴箱内，循环水浴解冻15 min。无菌注射器抽取血小板悬液2 mL，1200 r/min离心10 min，弃上清，取沉淀物制成血涂片。血涂片瑞氏染色后，显微镜检观察比较新鲜血小板与冰冻血小板形态差异。

1.6 血栓弹力图参数测定

严格按照试剂说明书要求，将测试杯上机，每个杯中加入 0.2 mol/L CaCl220 μL。加样器取 1 m L 待检样本，注入高岭土促凝管中，拧紧盖，颠倒混匀5～8次，加样器取混匀样本 340 μL 加入测试杯中，升起杯架，移动 Lever 杆到Test 位置，立即进行测定[5]。

1.7 统计学分析

应用SPSS15.0软件进行数据处理,组间比较采用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 显微镜检结果

健康成人血小板形态较规则，边缘整齐，大小均一，直径较小，散在分布，不聚集。冰冻血小板形态不规则，边缘不整齐，直径明显大于新鲜血小板且大小不均；聚集较多，散在较少(图1：a为新鲜血小板，b为冰冻血小板)。

图 1 新鲜血小板(a)与冰冻血小板(b)镜检结果

2.2 血栓弹力图检测结果

与对照组比较，模型组R值、K值、Ang值差异均无统计学意义(P>0.05)，MA值显著减小，差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表 1 血液样本血栓弹力图检验结果

3 讨 论

冰冻血小板较普通机采血小板具有以下几点优势：①冰冻状态，保存方便；②加入防冻剂后，-80 ℃可以长期保存至数年；③因为保存时间长，所以可以大量保存，使血小板库存充足，有效缓解临床用血小板紧张情况；④低温抑制可能污染的细菌繁殖，避免细菌污染相关输血不良反应发生。另外，有研究显示，冰冻血小板在外科创伤止血中、冰冻单采血小板在临床治疗中与新鲜单采血小板具有同等的有效性和安全性，可广泛用于临床，特别是在外科、产科止血疗效上具有一定的优势[6]。

本研究中，冰冻血小板输注模型组和对照组各样本的R值、K值和Ang值均在正常值范围内，表明样本凝血因子、纤维蛋白原充足，不影响血小板的活化和血块的收缩形成。冰冻血小板输注模型组和对照组比较，R值、K值和Ang值均无显著性差异，表明两组样本从凝血因子活化开始到血块开始形成，凝血功能表现无差异。模型组MA值显著性小于对照组，表明长期深低温冻存，血小板活化聚集功能减弱。这可能与低温导致血小板凋亡增加有关[7]。有研究认为，血小板冰冻保存最佳时限为6个月[8]。因此，目前冻存技术条件下，短期冻存为宜。随着技术的不断进步，临床使用效果的反馈分析，冰冻血小板将逐渐推广应用，血小板紧张态势将得到缓解。