QuEChERS-高效液相色谱串联质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留量

2022-07-04周宏霞姜华军张玉洁

食品安全导刊 2022年17期

周青，周宏霞，姜华军，张玉洁

（威海市食品药品检验检测研究院，山东威海 264209）

氯丙嗪（Chlorpromazine，CPZ）是一种吩噻嗪类药物，具有安眠、镇静等作用。但是一些不法商贩在饲料中添加氯丙嗪，对动物间接催肥或减少运输中的质量损失和死亡率，导致氯丙嗪在畜禽产品中存在残留[1]。氯丙嗪在动物体内的肝脏代谢过程中易引起药物残留，经食物链传递到人体后，能引起白细胞减少等不良反应，甚至导致人体肝肾的病变[2]。目前，《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）明确指出，氯丙嗪允许做治疗用，但在动物性食品中不得检出[3]。

近年来，氯丙嗪的检测方法有气相色谱法[4]、液相色谱法[5]、气质联用法[6]和液质联用法[7]。液相色谱串联质谱法以其高灵敏度和高准确性，在氯丙嗪的检测中具有明显的优势。本研究采用液相色谱质谱联用技术，在现有研究基础上，重点研究了QuEChERS法对猪肝样品的前处理方法优化，建立了乙腈提取、QuEChERS净化、高效液相色谱串联质谱法测定氯丙嗪残留量的分析方法，为猪肝中氯丙嗪的测定提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

Qtrap 6500液相色谱质谱联用仪，美国AB SCIEX公司；SQP电子天平，美国Sartorius公司；GM200刀式研磨仪，德国Retsch公司；超纯水机，法国Millipore公司；移液枪，美国Sartorius公司；超声波清洗器，昆山美美超声仪器有限公司；涡旋混合器，德国IKA公司；高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司；TurboVAP全自动氮吹浓缩仪，瑞典Biotage公司。

1.2 试剂

盐酸氯丙嗪（99%，中国食品药品检定研究院）；乙腈、乙酸乙酯、甲醇（色谱纯、美国FISHER公司）；甲酸（色谱纯，上海麦克林生化科技有限公司）；无水硫酸钠、无水硫酸镁（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；PSA、C18（天津博纳艾杰尔科技有限公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 标准溶液的配制

准确称取氯丙嗪标准品，用甲醇配制成100 μg/mL 的标准储备液，-18 ℃避光储存备用。量取适量标准储备液，用甲醇稀释成1 μg/mL的标准中间液，4 ℃避光保存。分别量取适量标准中间液，用空白基质提取液稀释，配制成0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、 5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL和100.0 ng/mL的系列标准工作溶液。氯丙嗪标准品的离子色谱图见图1。

图1 氯丙嗪标准品多反应监测离子色谱图（1 ng/mL）

1.3.2 样品前处理

将样品粉碎，称取5.00 g样品，置于50 mL聚四氟乙烯离心管中，加入10 mL乙腈，2.0 g无水硫酸钠，涡旋混合1 min，超声提取5 min，4 000 r/min离心10 min，转移上清液，残渣用10 mL乙腈重复提取一次。合并两次提取液。取上清液4 mL于100 mg C18、150 mg PSA、500 mg无水硫酸镁的10 mL离心管中，涡旋混合1 min，8 000 r/min离心5 min。将上清液在40 ℃氮吹至近干，加1 mL初始流动相溶液溶解，过0.22 μm有机滤膜，待测定。

1.3.3 色谱条件

色谱柱：Kinetex C18，100 mm×2.1 mm，2.6 μm；流动相A：0.1%甲酸溶液，流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0～2 min，90% A；2～8 min，90%～ 10% A；8.1～10.0 min，10%～90% A；流速：0.3 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：5 μL。

1.3.4 质谱条件

电离方式：ESI+；监测模式：MRM；离子源温度：500 ℃；喷雾电压：4 500 V；气帘气压力（CUR） 35 psi；雾化器压力（GS1）55 psi；辅助雾化气压力（GS2）55 psi。氯丙嗪的质谱参数见表1。

表1 氯丙嗪的质谱参数

2 结果与分析

2.1 提取溶剂的选择

氯丙嗪是脂溶性化合物，易溶于乙腈、甲醇、乙酸乙酯等，实验分别采用乙腈、甲醇、乙酸乙酯、乙腈∶水溶液（1∶1）（V/V）等溶剂进行提取，净化条件选择QuEChERS法，进行加标回收实验[2,7]。结果表明，采用甲醇、乙酸乙酯作为提取溶剂时会提取出部分脂类等基质干扰物质，影响后续的净化和分析检测；乙腈-水溶液提取时，提取液较为混浊，而乙腈的提取效果好、干扰较小，且具有沉淀蛋白质的作用[8]。因此，本研究采用乙腈进行样品的提取处理。

2.2 前处理条件的优化

在样品净化过程中，本研究比较了HLB固相萃取柱[9]、QuEChERS法等净化方法。由于氯丙嗪属于脂溶性化合物，因此并不适合液液萃取的净化方法[1]。采用HLB固相萃取柱净化时，氯丙嗪的回收率较低，回收率在45.1%～66.7%；采用QuEChERS法进行净化时，PSA对样品中的脂肪、蛋白质类化合物具有较好的吸附作用，C18可以有效吸附色素类物质，此时氯丙嗪的回收率均在80%以上。因此，选择QuEChERS法进行样品提取液的净化。

2.3 方法的线性范围和检出限

本方法采用空白样品基质提取液配制基质标准工作溶液，在0.5～100.0 ng/mL的浓度下，以样品浓度对应的峰面积绘制标准曲线。氯丙嗪标准曲线的回归方程为：y=7 022.970 18x-1 453.511 59，相关系数r为0.997 2，呈现良好的线性关系。以3倍信噪比为检出限，10倍信噪比为定量限，氯丙嗪的检出限为0.5 μg/kg，定量限为1.0 μg/kg。