血清miR-34a与脑卒中患者rt-PA静脉溶栓后神经功能恢复的相关性

杨小静，刘倩

宝鸡市人民医院神经内科，陕西 宝鸡 721000

脑卒中是常见的脑血管疾病，具有较高的发病率、致残率、复发率以及死亡率，其主要是由于脑部血液循环出现障碍，使得脑组织因缺血、缺氧发生坏死或软化，导致患者神经功能受损[1-2]。目前，对于发病时间＜4.5 h的脑卒中患者主要采用重组组织型纤溶酶原激活剂(recombinant tissue plasminogen activator，rt-PA)静脉溶栓治疗[3]。rt-PA静脉溶栓可有效改善脑组织供血情况及神经功能受损情况，但其在治疗过程中脑组织易受缺血再灌注损伤，加重炎症反应，影响患者神经功能恢复[4]。相关研究显示脑卒中的发生发展与动脉粥样硬化、炎症反应等因素密切相关[5]。微小RNA(microRNA，miRNA)的表达水平是影响动脉粥样硬化、炎症反应的重要因素，miRNA可能在脑卒中发展进程中发挥重要作用[6]。微小RNA-34a(microRNA-34a，miR-34a)参与血管内皮细胞的凋亡及炎症反应，其表达失衡是促进动脉粥样硬化及脑水肿形成的重要因素，可能成为脑卒中类疾病治疗的靶标[7]。因此，miR-34a对溶栓效果和神经功能的恢复可能产生重要影响，但miR-34a在脑卒中患者血清中的水平及与神经功能恢复情况的关系研究鲜有报道。基于此，本研究分析了血清miR-34a与脑卒中患者rt-PA静脉溶栓后神经功能恢复的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年12月至2020年12月宝鸡市人民医院神经内科收治且行rt-PA静脉溶栓治疗的98例脑卒中患者作为研究组。纳入标准：(1)所有患者均符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》[8]对脑卒中的诊断标准，并经影像学确诊；(2)首次发病且在本院就诊；(3)发病时间＜4.5 h；(4)均接受rt-PA静脉溶栓治疗；(5)患者或家属知晓研究内容并自愿签署知情同意书。排除标准：(1)合并有恶性肿瘤者；(2)伴有严重心、肝、肺、肾等重要脏器损伤者；(3)不能配合随访者；(4)既往有精神病史者；(5)患者既往有卒中史。研究组患者根据mRS评分[9]进行分组，其中57例mRS在0～1分者定义为神经功能会良好组，41例mRS≥2分者定义为神经功能恢复不良组。同时选取在本院健康体检中心体检的健康志愿者62例作为对照组。研究组中男性55例，女性43例；年龄45～65岁；平均(55.54±5.61)岁。对照组中男性36例，女性26例；年龄45～65岁；平均(54.96±5.42)岁。两组受检者的性别、年龄比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2 临床资料收集 收集研究组患者的临床资料，统计可能影响脑卒中患者神经功能恢复不良的危险因素，包括性别、年龄、体质量指数(body mass index，BMI)、高血压史、糖尿病史、饮酒史、吸烟史、溶栓前NIHSS评分、甘油三酯(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、血清肌酐(serum creatinine，SCr)、miR-34a、同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)、白细胞计数(white blood cell，WBC)、中性粒细胞计数(neutrophil，NEU)、尿酸(uric acid，UA)、胱抑素C(cystatin C，Cys C)、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)、D-二聚体(D-dimer，D-D)。上述指标于受试者行rt-PA静脉溶栓治疗前获得。

1.3 观察指标与检测方法

1.3.1 血清miR-34a水平 采用实时荧光定量-反转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，QRT-PCR)法检测血清miR-34a水平，研究组患者在静脉溶栓前，对照组于晨起空腹，取受试者静脉血5 mL，置于EP管内，在-4℃条件下，以3 500 r/min离心10 min，离心半径10 cm，留取上清液，根据Trizol试剂盒操作说明书提取血清总RNA，通过反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA，按照TaqMan®Universal PCRMaster Mix操作步骤将cDNA扩增，并进行PCR检测。以U6为内参，引物序列(表1)。采用2-△△CT法计算miR-34a相对表达量。

表1 miR-34a、内参U6的引物序列

1.3.2 神经功能情况 研究组患者在rt-PA静脉溶栓治疗前与治疗3个月后，对照组于体检当天，采用Rankin量表(modified Rankin Scale，mRS)评估研究组患者和对照组志愿者神经功能，评分范围0～6分，得分越高表明患者神经功能越差。

1.4 统计学方法 应用SPSS27.0统计软件分析数据。计数资料比较采用χ2检验，计量资料以均数±标准差(±s)表示，两两比较采用t检验，采用Logistic回归分析法明确影响脑卒中患者神经功能恢复的危险因素，采用Pearson相关性分析法分析血清miR-34a水平与脑卒中患者神经功能恢复的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组受检者的血清miR-34a水平和神经功能评分比较 研究组患者的血清miR-34a水平和mRS评分明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 两组受检者的血清miR-34a水平和神经功能评分比较(±s)

表2 两组受检者的血清miR-34a水平和神经功能评分比较(±s)

组别研究组对照组t值P值例数98 62 miR-34a 53.57±10.69 40.12±9.78 8.010 0.001 mRS(分)2.72±0.78 0.00±0.00 27.426 0.001

2.2 影响脑卒中患者神经功能恢复的相关因素 单因素分析结果显示，神经功能恢复不良组和神经功能恢复良好组患者的男性、高血压史、糖尿病史、饮酒史、吸烟史占比、年龄、BMI、TC、LDL、SCr、Hcy、WBC、NEU、Cys C水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；神经功能恢复不良组患者溶栓前NIHSS评分、UA水平明显低于神经功能恢复良好组，TG、miR-34a、hs-CRP、D-D水平明显高于神经功能恢复良好组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 影响脑卒中患者神经功能恢复的相关因素[例(%)，±s]

表3 影响脑卒中患者神经功能恢复的相关因素[例(%)，±s]

可能影响因素性别男女年龄(岁)BMI(kg/m2)高血压史是否糖尿病史是否饮酒史是否吸烟史是否溶栓前NIHSS评分TG(mmol/L)TC(mmol/L)LDL(mmol/L)SCr(mmol/L)miR-34a Hcy(mmol/L)WBC(×106/L)NEU(×106/L)UA(mol/L)Cys C(mg/L)hs-CRP(mg/L)D-D(mg/L)神经功能恢复不良组(n=41)22(53.66)19(46.34)55.11±5.42 23.88±0.46 13(31.71)28(68.29)10(24.39)31(75.61)9(21.95)32(78.05)11(26.83)30(73.17)4.81±1.33 1.78±0.45 4.84±1.02 3.04±0.91 83.11±12.36 61.77±8.96 14.78±3.26 275.46±45.67 75.34±10.58 339.72±45.14 1.13±0.24 10.45±3.06 0.63±0.21神经功能恢复良好组(n=57)33(57.89)24(42.11)55.84±5.82 23.79±0.51 17(29.82)40(70.18)11(19.30)46(80.70)10(17.54)47(82.46)14(24.56)43(75.44)10.19±2.23 1.17±0.33 4.76±0.98 2.89±0.88 85.04±12.69 47.67±7.64 15.01±4.01 271.13±44.87 73.96±11.16 397.56±48.63 1.07±0.22 7.68±2.86 0.51±0.18 χ2/t值0.174 0.630 0.897 0.040 0.367 0.296 0.065 13.774 7.746 0.392 0.821 0.751 8.381 0.302 0.468 0.617 5.983 1.282 4.593 3.035 P值0.677 0.530 0.372 0.842 0.545 0.586 0.799 0.001 0.001 0.696 0.414 0.455 0.001 0.763 0.641 0.539 0.001 0.203 0.001 0.003

2.3 影响脑卒中患者神经功能恢复的危险因素 将脑卒中患者神经功能恢复不良作为因变量(Y)，单因素分析中差异有统计学意义的因素：溶栓前NIHSS评分、TG、miR-34a、UA、hs-CRP、D-D水平作为自变量(X)进行Logistic回归分析赋值，影响脑卒中患者神经功能恢复不良记为1，未影响记为0，见表4。经Logistic回归分析结果显示，溶栓前NIHSS评分、TG、miR-34a、UA水平均是影响脑卒中患者神经功能恢复不良的危险因素(P＜0.05)，见表5。

表4 Logistic回归分析赋值

表5 影响脑卒中患者神经功能恢复不良因素的多因素Logistic回归分析

2.4 血清miR-34a水平与脑卒中患者神经功能评分的相关性 经Pearson相关性分析结果显示，血清miR-34a水平与脑卒中患者mRS评分呈正相关(r=0.581，P＜0.01)。

3 讨论

脑卒中俗称中风，其在导致我国居民死亡原因中排名第一位[10]。脑卒中发生后常出现单侧肢体无力或麻木、单侧面部麻木或口角歪斜、恶心呕吐、视物模糊、言语不清、意识障碍、头痛等症状，严重者甚至导致残疾或死亡，上述症状的严重程度与神经功能恢复情况密切相关[11]。rt-PA静脉溶栓是治疗超早期脑卒中患者的主要手段，亦是改善患者临床结局最有效的方式，但仍有部分患者神经功能恢复情况较差，影响患者预后[12]。故选择安全有效的生化指标预测经rt-PA静脉溶栓治疗的脑卒中患者神经功能恢复情况，有利于临床医生采取针对性治疗，降低神经功能恢复不良的发生率，提高rt-PA静脉溶栓治疗效果。

miRNA是一类不编码蛋白质的小分子核糖核酸，可促进动脉粥样斑块的形成，已逐渐成为心脑血管疾病的潜在生物标志物[13]。miR-34a是一种广泛表达在心、脑组织等中的miRNA，在心脑血管疾病的发生发展中扮演着重要角色[14]。WANG等[15]对脑缺血再灌注大鼠进行miR-34a表达水平干预，结果显示，与脑缺血再灌注大鼠比较，miR-34a低表达的大鼠脑神经元凋亡和脑组织损伤更轻。REN等[16]研究显示发生脑卒中的患者血清miR-34a水平高于未发生者。本研究结果显示研究组血清miR-34a、mRS评分水平均高于对照组。与上述研究观点一致，提示血清miR-34a在脑卒中患者中的表达异常，可能参与脑卒中的发生与发展。单因素分析显示，神经功能恢复不良组溶栓前NIHSS评分、UA水平低于神经功能恢复良好组，神经功能恢复不良组TG、miR-34a、hs-CRP、D-D水平高于神经功能恢复良好组。提示行rt-PA静脉溶栓治疗的脑卒中患者神经功能的恢复受血清miR-34a水平的影响，除此之外还可能受溶栓前NIHSS评分、UA、TG、hs-CRP、D-D等水平的影响。在临床治疗过程中关于上述指标水平的异常应引起足够的重视，以期降低神经功能恢复不良的发生率，延长患者生存期，提高患者生活质量。

为进一步研究影响行rt-PA静脉溶栓治疗脑卒中患者神经功能恢复的危险因素，本研究对单因素中有统计学意义的因素进行Logistic回归分析，结果显示溶栓前NIHSS评分、TG、miR-34a、UA水平均是影响行rt-PA静脉溶栓治疗脑卒中患者神经功能恢复不良的危险因素。血清miR-34a影响行rt-PA静脉溶栓治疗脑卒中患者神经功能原因如下[17-19]：(1)血清miR-34a高表达可抑制血管平滑肌细胞的收缩，增加血管平滑肌细胞的增殖与迁移，参与受损血管的修复，加速动脉粥样硬化的发生发展，增加动脉粥样斑块的破裂风险，造成血管内血栓增多、血栓脱落等，引起血流速度缓慢瘀滞，导致患者微循环障碍，影响患者神经功能恢复。(2)血清miR-34a高表达可促进血管内皮细胞的凋亡，增加血管通透性，易导致脑水肿的发生，引起颅内压升高，从而加重患者神经功能损伤。(3)血清miR-34a可作用于血小板黏附蛋白和受体蛋白相应的mRNA，调节血小板的活化，加速血栓的形成，影响微循环障碍，不利于神经功能的恢复。此外，本研究对血清miR-34a水平与行rt-PA静脉溶栓治疗脑卒中患者神经功能恢复情况的相关性进行观察，结果显示，血清miR-34a水平与脑卒中患者mRS评分呈正相关(P＜0.05)，再次提示血清miR-34a水平可用于判断患者神经功能恢复情况，为临床诊疗提供参考。

综上所述，脑卒中患者rt-PA静脉溶栓治疗前血清miR-34a水平与神经功能恢复情况具有一定的相关性，血清miR-34a低表达有助于患者神经功能恢复。