Prdx1、Prdx3蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及临床意义

李淑红 薛惠英 刘现红

卵巢癌的发生在合并有相关家族史的人群中往往呈现出了明显的高发态势，最新数据显示，现阶段我国卵巢癌的发病率约为223-455/10 万人［1］。卵巢癌的发病病因较为复杂，近年来对于卵巢恶性肿瘤发病过程中相关生物学机制的研究认为，肿瘤相关细胞因子及信号路径蛋白异常表达将通过氧化应激反应引发癌细胞异常增殖，进而加剧癌细胞的分裂、转移风险［2］。过氧化物氧化还原酶蛋白1（peroxiredoxin protein 1，Prdx1）、过氧化物氧化还原酶蛋白3（peroxiredoxin protein 3，Prdx3）等，在肠道黏膜上皮细胞、平滑肌细胞等中具有一定程度的表达，近年来发现其能够通过影响到细胞周期，提高G1/S 期比例，增加细胞的基因错配，进而促进肿瘤的发生［3-4］。浆液性肿瘤是卵巢肿瘤中最常见的亚型，分为浆液性腺癌、交界性浆液性肿瘤和浆液性囊腺瘤，为了进一步揭示Prdx1、Prdx3 蛋白与卵巢癌发生的关系，从而为疾病的诊疗提供理论基础，本实验分析各组患者Prdx1、Prdx3 蛋白表达情况及其与浆液性腺癌临床病理特征的关系，旨在为浆液性腺癌的临床诊疗提供新的参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取安阳市人民医院2018年7月至2021年5月确诊的卵巢浆液性腺癌患者64 例、交界性浆液性肿瘤56 例、浆液性囊腺瘤80 例为研究对象，卵巢浆液性腺癌患者平均年龄（45.5±7.3）岁，交界性卵巢浆液性肿瘤患者的平均年龄（44.6±6.8）岁，浆液性囊腺瘤患者年龄平均（44.8±7.6）岁。三组患者年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。均经患者知情同意，并经医院伦理委员会批准（伦研（批）［2018］11 号）。

1.2 纳入排除标准

纳入标准：①无其他恶性肿瘤；②切除病灶经病理学检查显示为浆液性卵巢癌或良性浆液性囊腺瘤的患者，判断标准参考第七版《妇产科学》中的标准［3］；③均为根治性手术，且患者术后无严重并发症；④患者基础及手术资料完整；⑤术前未进行放化疗；⑥无糖尿病、子宫内膜异位症等疾病。排除标准：①伴其他系统性疾病。②随访未完成；③存在贫血或凝血功能障碍；④存在肝肾或其他免疫系统疾病；⑤存在甲状腺功能障碍；⑥存在远端转移或已接受过放化疗。

1.3 免疫组化染色和蛋白质印迹实验方法

免疫组化染色：对两组样本进行石蜡包埋，随后进行4 mm 连续切片，选用S-P 法进行染色操作，并选用二氨基联苯胺进行显色。

蛋白质印迹法：将两组样本进行剪碎并研磨，与上样缓冲液进行混合，比例为5∶1，随后于80～100℃环境下进行煮沸，时长为5 min。检测样本蛋白分子量水平，并制备12%的分离胶及5%的浓缩胶，上样后进行SDS.PA GE 电泳，转膜后选用BSA蛋白封闭2 h，随后进行一抗及二抗（1∶1 000），一抗二抗结束后各选用磷酸盐缓冲液清洗2 次，将样本进行曝光，并读取胶片弧度。Prdx1、Prdx3 蛋白抗体、PV6000 通用型二抗试剂盒均由北京中杉金桥生物技术开发公司生产。

1.4 免疫组化判定标准

免疫组化结果判定［5］：阳性评估标准为可见清晰棕黄色颗粒，同时根据阳性细胞比例数进行划分：染色强度分为（阴性）、+（弱）、++（中度）、+++（强）；染色范围为-（0%～5%）、+（6%～30%），++（31%～60%）、+++（＞60%）。（-）即为阴性表达，（+）、（++）、（+++）则表示阳性表达。Prdx1、Prdx3蛋白灰度值＞15.0 为阳性。

1.5 统计学方法

采用SPSS17.0 统计软件进行数据分析，计量资料采用（±s）描述，多组间比较采用方差分析及两两比较的LSD-t 检验。计数资料采用n（%）描述，采用χ2检验；P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三组样本的Prdx1、Prdx3 蛋白水平对比分析

卵巢浆液性腺癌的Prdx1、Prdx3 蛋白表达阳性率高于交界性卵巢浆液性肿瘤和浆液性囊腺瘤（P＜0.05），交界性卵巢浆液性肿瘤的Prdx1、Prdx3蛋白表达阳性率高于浆液性囊腺瘤，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1～2，图1～2。

图1 卵巢浆液性肿瘤组织标本中Prdx1 蛋白表达Figure 1 Prdx1 protein expression in serous ovarian tumor tissue specimens

表1 组织标本中Prdx1 蛋白表达情况比较Table 1 Comparison of Prdx1 protein expression in tissue samples

2.2 Prdx1、Prdx3 蛋白印迹检测结果

交界性卵巢浆液性肿瘤、卵巢浆液性腺癌Prdx1 蛋白、Prdx3 蛋白相对表达量高于浆液性囊腺瘤（P＜0.05）；卵巢浆液性腺癌Prdx1 蛋白、Prdx3蛋白相对表达量高于交界性卵巢浆液性肿瘤，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 Prdx1、Prdx3 蛋白相对表达量比较（±s）Table 3 Comparison of Prdx1 and Prdx3 protein relative expression levels（±s）

表3 Prdx1、Prdx3 蛋白相对表达量比较（±s）Table 3 Comparison of Prdx1 and Prdx3 protein relative expression levels（±s）

注：与浆液性囊腺瘤比较，aP＜0.05，与交界性卵巢浆液性肿瘤比较，bP＜0.05。

Prdx3 蛋白表达量15.11±0.30 25.31±3.41a 31.42±2.90ab 821.290 0.000组别浆液性囊腺瘤浆液性囊腺瘤交界性卵巢浆液性肿瘤卵巢浆液性腺癌F 值P 值n 80 56 64 Prdx1 蛋白相对表达量15.24±0.40 23.64±2.48a 35.28±4.08ab 1005.632 0.000

表2 组织标本中Prdx3 蛋白表达情况比较Table 2 Comparison of Prdx3 protein expression in tissue samples

2.3 卵巢浆液性腺癌组织标本中的Prdx1、Prdx3蛋白表达与患者临床病理学特征的关系

图2 卵巢浆液性肿瘤组织标本中Prdx3 蛋白表达Figure 2 Prdx3 protein expression in serous ovarian tumor tissue specimens

不同的年龄、组织学分级、有无腹水的浆液性腺癌患者Prdx1、Prdx3 蛋白阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05），而不同临床分期及有无淋巴结转移的浆液性腺癌患者Prdx1、Prdx3 蛋白阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 浆液性腺癌患者Prdx1、Prdx3 蛋白表达与临床病理因素的关系Table 4 The relationship between Prdx1 and Prdx3 protein expression and clinicopathological factors in ovarian cancer

3 讨论

卵巢癌病机复杂，多数学者认为基因或激素异常变化与本病的发生、发展密切相关。临床业已证明，雌激素敏感性变化，尤其是卵巢上皮细胞膜上的雄激素受体的异常表达是卵巢癌发生与进展的重要危险因素。而近些年的研究也表明，肿瘤基因调控因子或信号路径蛋白的异常变化同样是卵巢癌发生的影响因素［6-7］。细胞因子的异常变化将影响癌细胞的生物学征象，影响癌细胞的周期，并促使其免疫T 淋巴细胞的免疫反应，进而增强癌细胞的生物学活性，引发浸润、转移等严重后果［8-9］。

Prdx1 蛋白是重要的过氧化酶抗过氧化酶相关因子，其对于体内过氧化物及氧化自由基的氧化及修饰作用，可活化人体内的氧化反应，并增强机体的炎症水平，促使多种炎性细胞因子在卵巢上皮细胞内浸润。Prdx1 蛋白还可引发局部低氧环境，并增强卵巢癌细胞持续性DNA 的辅助能力，促进卵巢癌细胞分裂。已有研究显示［10］，甲状腺癌、肝癌等肿瘤疾病中也可见Prdx1 蛋白异常表达情况，并且Prdx1 蛋白上可见多个巯基结构，这些巯基结构具有促癌细胞膜表面糖蛋白活化功能，并诱导AKT 等肿瘤相关信号通路的活化，引发癌细胞分化凋亡障碍；Prdx3蛋白近年来发现其主要位于血管内皮、平滑肌及中胚层组织中，其表达阳性率的变化能够导致卵巢交界性上皮、生发上皮的恶性病变的发生［11］。

本次研究结果显示在卵巢浆液性腺癌组织中Prdx1、Prdx3 蛋白表达阳性率及相对表达量均高于交界性卵巢浆液性肿瘤和浆液性囊腺瘤，而交界性卵巢浆液性肿瘤组织上述指标高于浆液性囊腺瘤，表明Prdx1、Prdx3 蛋白在卵巢良性肿瘤组织中呈现低表达，而从交界性卵巢浆液性肿瘤到卵巢浆液性腺癌则呈现逐渐升高趋势，并提示Prdx1、Prdx3 蛋白表达水平升高可能作为卵巢浆液性肿瘤向恶性转化的标志，分析原因可能与Prdx1、Prdx3 蛋白高表达所导致的卵巢浆液性腺体细胞分泌功能异常、腺体的异型性、细胞核分裂障碍等过程［12］，以及通过影响细胞信号通路传导进而影响癌细胞的生物学特征等有关［13-14］。Prdx1 蛋白可对卵巢癌细胞内的NOTCH 信号通路进行活化，并激活癌细胞转录调控因子上游启动子，抑制癌细胞的分化，并促进癌细胞增殖；而Prdx3 蛋白对于肿瘤干细胞活性的维持作用，能够通过影响到上皮间质转化过程，促进卵巢癌上皮细胞的浸润能力，促进其对于基底膜组织的突破作用［13-14］。Aiken 等［15］探讨了不同临床分期的卵巢癌患者病理组织中Prdx1、Prdx3 蛋白的表达情况，发现在治疗效果较差、综合性治疗措施敏感性不足的患者中，Prdx1、Prdx3 蛋白的表达水平均明显上升，特别是在预后较差及死亡人群中，Prdx1、Prdx3 蛋白阳性表达率进一步升高。而本研究结果显示，临床分期为Ⅲ期、Ⅳ期及有淋巴结转移的卵巢浆液性腺癌患者，Prdx1、Prdx3 蛋白阳性表达率更高，则提示Prdx1、Prdx3 蛋白阳性表达与卵巢浆液性腺癌的临床进展密切相关。

综上所述，Prdx1、Prdx3 蛋白在卵巢浆液性腺癌中呈现高表达，并且与其发生及进展密切相关，对于卵巢浆液性腺癌的诊疗具有一定的临床价值。