乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2表达的临床价值与预后

黄风琴 余洁 郭智俊 梁景星

乳腺癌的发生发展受遗传学因素影响，伴随多种基因与蛋白表达异常，乳腺癌相关分子标志物Ki-67［1］、CerbB-2［2］、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）［3］在乳腺癌的诊断、预后评估中具有重要的临床价值。近年来发现，血脂代谢异常与恶性肿瘤有一定关联，乳腺癌患者由于雌激素水平变化、内分泌治疗等因素影响，也可能伴随脂蛋白类型与血脂水平改变［4］。本研究分析乳腺癌患者EGFR、Ki-67、CerbB-2表达与临床分期、血脂代谢、预后的关系，报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2016年1月至2021年7月广东省人民医院南海医院收治的357 例乳腺癌患者为研究对象。纳入标准：①符合乳腺癌的诊断标准［5］；②年龄≥18 岁；③接受乳腺癌根治术；④术前未接受放化疗及内分泌治疗；⑤术前3 个月内未应用调血脂药物。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②合并心、脑、肝、肾疾病；③原发性高脂血症；④其他影响血脂代谢的疾病。另选取同期本院就诊的111 例乳腺良性肿瘤患者为对照组。乳腺癌组年龄27～73 岁，平均年龄（51.22±8.76）岁。对照组年龄24～75 岁，平均年龄（49.72±9.13）岁。两组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究符合《赫尔辛基宣言》原则［6］，研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 EGFR、Ki-67、CerbB-2表达检测

取患者手术切除的乳腺病理组织，脱水、石蜡包埋、制作石蜡切片。EGFR、Ki-67、CerbB-2试剂盒均购自上海研谨生物科技有限公司。按照免疫组化技术流程，脱水、透明、孵育、抗原修复、磷酸盐缓冲液冲洗后，加入一抗工作液，室温下孵育60 min。再加入二抗工作液，室温下孵育15 min。加入二氨基联苯胺显色剂，室温孵育3 min，在显微镜下观察染色结果。判定标准［7］：细胞染色为棕黄色为阳性细胞，阳性细胞数＜10%为阴性，≥10%为阳性。

1.2.2 血脂检测

在患者入院第二天清晨，采集空腹静脉血5 mL，采用酶法检测血浆总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C），试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。检测仪器为MR-96A 全自动生化分析仪，购自深圳迈瑞医疗公司。

1.3 资料收集与随访

查阅医院电子病历系统，记录患者病情资料，包括年龄、是否绝经、病理类型、组织学分级、临床分期。乳腺癌根治术后，对所有患者开展随访，随访截止至2021年10月，记录患者的总生存期。

1.4 统计学方法

使用SPSS 22.0 进行统计分析；满足正态分布的计量资料以（±s）表示，采用独立样本t检验；计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；采用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，生存分析进行Log rank 检验；影响乳腺癌预后的多因素分析采用COX 回归分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组与对照组EGFR、Ki-67、CerbB-2 表达比较

乳腺癌组EGFR、Ki-67、CerbB-2阳性表达率均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 乳腺癌组与对照组EGFR、Ki-67、CerbB-2 表达比较［n（%）］Table 1 Comparison of expressions of EGFR，Ki-67 and CerbB-2 between breast cancer group and control group［n（%）］

2.2 乳腺癌组与对照组血脂水平比较

乳腺癌组的血浆TG、TC、LDL-C 水平高于对照组，血浆HDL-C 水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 乳腺癌组与对照组血脂水平比较（±s）Table 2 Comparison of blood lipid level between breast cancer group and control group（±s）

表2 乳腺癌组与对照组血脂水平比较（±s）Table 2 Comparison of blood lipid level between breast cancer group and control group（±s）

组别乳腺癌组对照组χ2值P 值n 357 111 TG（mmol/L）1.25±0.37 1.14±0.33 2.804 0.005 TC（mmol/L）4.71±1.34 4.26±1.23 3.149 0.002 LDL-C（mmol/L）2.69±0.77 2.34±0.65 4.332＜0.001 HDL-C（mmol/L）1.30±0.37 1.45±0.42 3.610＜0.001

2.3 乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2 不同表达患者的临床分期及病理特征比较

乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2阳性患者与阴性患者的年龄、绝经状态、病理类型、组织学分级比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2阳性患者中Ⅱ～Ⅲ期的比例高于阴性患者，0～Ⅰ期的比例低于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2 不同表达患者的临床分期及病理特征比较［n（%）］Table 3 Clinical stages and pathological characteristics of breast cancer patients with different expression of EGFR，Ki-67 and CerbB-2［n（%）］

2.4 乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2 不同表达患者的血脂水平比较

乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2阳性患者与阴性患者的血浆TG、TC、LDL-C、HDL-C 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表4 乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2 不同表达患者的血脂水平比较（±s）Table 4 Comparison of blood lipid levels in patients with different EGFR，Ki-67 and CerbB-2 expression of breast cancer（±s）

表4 乳腺癌EGFR、Ki-67、CerbB-2 不同表达患者的血脂水平比较（±s）Table 4 Comparison of blood lipid levels in patients with different EGFR，Ki-67 and CerbB-2 expression of breast cancer（±s）

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2.5 生存分析

COX 回归分析显示，临床分期、EGFR、Ki-67、CerbB-2是乳腺癌预后的影响因素（P＜0.05），见表5。在临床分期上，0期、Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者的5年累积生存率分别为100%、98.00%、91.52%、75.83%（Log rank=12.307，P=0.006），见图1。EGFR 阳性、EGFR阴性患者的5年累积生存率分别为74.97%、96.02%（Log rank=17.681，P＜0.001）。Ki-67阳性、Ki-67阴性患者的5年累积生存率分别为89.31%、100%，差异有统计学意义（Log rank=5.006，P=0.025）。CerbB-2阳性、CerbB-2阴性患者的5年累积生存率分别为83.72%、97.17%，（Log rank=7.369，P=0.007），见图2。

表5 影响乳腺癌预后的COX 回归分析Table 5 COX regression analysis of prognosis of breast cancer

图1 生存曲线Figure 1 Survival curves

图2 生存曲线Figure 2 Survival curves

3 讨论

EGFR 是原癌基因CerbB-1编码的蛋白表达产物，本研究发现，在乳腺癌组患者的病理组织中EGFR 阳性表达率为24.09%，而乳腺良性肿瘤EGFR 均为阴性。刘岩岩等［8］研究表示乳腺癌组织中EGFR 表达相比癌旁组织更高，与临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移有关。推测其机制，原癌基因CerbB-1异常激活、EGFR 过表达，可促进正常乳腺导管上皮细胞分化为恶性增殖的癌细胞。本研究发现EGFR 阳性表达越高临床分期也越高。居红格等［9］研究也表示，EGFR 在非三阴性乳腺癌中的阳性表达率为37%，EGFR 与年龄无关而与临床分期有关。EGFR 阳性患者的5年累积生存率为74.97%低于EGFR 阴性患者的96.02%，说明EGFR 阳性患者的预后较差。

Ki-67 反映乳腺癌细胞的增殖活性，Ki-67 与细胞核分裂周期有关，在有丝分裂期Ki-67 达到最高水平。本研究发现，在乳腺癌组患者的病理组织中Ki-67 阳性表达率为82.91%，而乳腺良性肿瘤Ki-67 均为阴性。国外研究［10］也表示，乳腺癌患者中Ki-67 阳性率约60%～90%，Ki-67 表达程度与临床分期呈正相关，Ki-67 表达程度越高乳腺癌越容易发生转移，预后也越差。本研究发现Ki-67 与乳腺癌临床分期有关，Ki-67 阳性患者的5年累积生存率89.31%也低于Ki-67阴性患者，这与吕德明等［11］研究观点一致。

CerbB-2基因是一种原癌基因，CerbB-2过度表达导致乳腺癌患者细胞分裂增加和细胞恶性增殖。本研究发现，在乳腺癌组患者的病理组织中CerbB-2阳性表达率为60.78%，CerbB-2阳性表达越高临床分期也越高。曹利娟等［12］研究表示，CerbB-2直接参与了乳腺癌细胞的分化、增殖和侵袭，CerbB-2高表达患者无进展生存期较短。本研究也发现，CerbB-2阳性患者的5年累积生存率83.72%低于CerbB-2阴性的97.17%，说明CerbB-2阳性患者的预后较差。

国外研究［13］发现血脂与乳腺癌的患病风险存在相关性，高胆固醇血症是绝经后女性患乳腺癌的独立危险因素。动物实验［14］也证实三阴性乳腺癌小鼠模型经高脂饮食喂养后肿瘤患病率增加。本研究也发现，乳腺癌组的血浆TG、TC、LDL-C 水平高于对照组，血浆HDL-C 水平低于对照组。赵怡欣等［15］研究发现，TG、TC 高水平与乳腺癌的病理分期和淋巴结转移相关，高脂血症与乳腺癌具有相关性。

综上所述，EGFR、Ki-67、CerbB-2表达与乳腺癌发生发展有关，临床分期越高EGFR、Ki-67、CerbB-2阳性表达越高，患者预后越差；乳腺癌可能影响血脂代谢。