HPLC法测定马来酸氟伏沙明片中马来酸氟伏沙明含量

＊邵广晴 方庆

（1.万博科技职业学院 安徽 230031 2.安徽中医药大学 安徽 230031）

马来酸氟伏沙明片为薄膜衣划痕片，除去包衣后显白色或类白色，其主要成分马来酸氟伏沙明（Fluvoxamine Maleate，FML）（C15H21F3N2O2·C4H4O4），化学名为（E）-5-甲氧基-1-（4-三氟甲苯基）-O-（2-胺乙肟基）-1-戊酮马来酸盐，在甲醇或乙醇中易溶，在水中略溶。它是一种选择性作用于脑神经细胞的5-羟色胺再摄取抑制剂，对非肾上腺素过程影响很小，对α-肾上腺素能、β-肾上腺素能、组胺、M-胆碱能、多巴胺能或6-羟色胺受体几乎不具有亲和性。作用谱广，能对焦虑、激动、失眠和精神病产生有利的作用，能有效治疗各种类型的抑郁症和强迫症，并能有效用于社交焦虑症、惊恐性障碍、身体变形障碍等。副作用小，不会出现性功能障碍、视力模糊等症状。临床上用于抑郁症及相关症状的治疗，强迫症症状治疗。在美国药典USP43-NF38中，马来酸氟伏沙明片含量测定使用的是高效液相色谱法，其流动相为乙腈-缓冲液（8g的1-戊烷磺酸钠盐和1.0g磷酸二氢钾，加1000ml水溶解，用磷酸调节pH值为3.00±0.05）=38:62。在中国药典2020版中，马来酸氟伏沙明片含量测定同样使用高效液相色谱法，但流动相为磷酸盐缓冲液（含1.25%磷酸氢二铵与0.275%庚烷磺酸钠的水溶液，用磷酸调pH值至3.0）-甲醇=45:55。两种方法中均使用了离子对试剂，且使用了较大浓度的缓冲盐浓度，从降低实验成本并减少离子对试剂对环境污染及色谱系统使用寿命等方面考虑，本文参照USP43中有关物质测试2方法，调整流动相中盐浓度及有机相比例，以0.01mol/L的醋酸钠溶液-乙腈-甲醇=40:40:20为流动相，每升流动相中加入2ml三乙胺，用冰醋酸调pH至4.5，并验证此方法是否能准确可靠地进行马来酸氟伏沙明片中马来酸氟伏沙明含量的测定。结果表明，此方法稳定性好，实验结果准确可靠，灵敏度高。

1.材料

(1)仪器

高效液相色谱仪（Waters 2695）：美国Waters公司；FE28 pH计：梅特勒-托利多有限公司；超声波清洗机：昆山超声仪器有限公司；MS105分析天平：日本岛津。

(2)试剂

甲醇（HPLC级）：TEDIA公司；乙腈（HPLC级）：TEDIA公司；醋酸钠（AR级）：天津永大试剂有限公司；冰醋酸（AR级）：国药集团；三乙胺：西陇化学试剂有限公司；纯化水：娃哈哈纯净水。马来酸氟伏沙明对照品：批号：100792- 201902；含量：99.9%；中国药品生物制品检定研究院。

2.方法

(1)色谱条件

Welch XB-C8色谱柱（4.6×250mm，5µm），流动相：0.01mol/L的醋酸钠溶液-乙腈-甲醇=40:40:20为流动相，每升流动相中加入2ml三乙胺，用冰醋酸调pH至4.5；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样体积：10µl。

(2)样品配制

①对照品溶液配制：精密称取马来酸氟伏沙明对照品约10mg置100ml量瓶中，加甲醇-水（60:40）溶解并稀释至刻度。②供试品溶液配制：取马来酸氟伏沙明片20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于马来酸氟伏沙明0.1g），置100ml量瓶中，加甲醇-水（60:40）适量，超声溶解15min后，用甲醇-水（60:40）稀释至刻度，用0.22µm滤膜滤过，取续滤液5ml置50ml量瓶中，用甲醇-水（60:40）稀释至刻度。

3.结果

(1)专属性实验

分别量取空白溶剂甲醇-水=60:40，对照品溶液及供试品溶液各10µl注入液相色谱仪，记录色谱图(图1）。在此色谱条件下，空白溶剂无干扰，理论板数以氟伏沙明峰计，不低于2000，氟伏沙明与相邻峰分离度大于1.5。

图1 空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液图谱

(2)线性关系

取马来酸氟伏沙明对照品100.37mg置100ml量瓶中，加甲醇-水（60:40）溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液。再用甲醇-水（60:40）稀释制成每1ml含0.05mg、0.08mg、0.1mg、0.12mg、0.15mg、0.20mg的溶液。量取各浓度对照品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。浓度与峰面积关系见表1。

表1 马来酸氟伏沙明线性关系

以峰面积为横坐标，对照品浓度为纵坐标，作线性回归方程。得回归方程为：Y=17398771x-7984，r=0.9999。

结果表明：在0.05mg/ml～0.20mg/ml范围内，马来酸氟伏沙明浓度与峰面积呈良好的线性关系。

(3)精密度试验

取同一标准浓度对照品溶液，连续进样6针，记录色谱图，数据见表2。

表2 马来酸氟伏沙明进样精密度试验

结果：6针对照品溶液峰面积均值为1737455，RSD为0.23%，说明仪器精密度良好。

(4)检测限定量限试验

取标准浓度对照品溶液，用甲醇-水（60:40）逐级稀释制成氟伏沙明峰信噪比S/N约为10的溶液，作为定量限测试溶液；用甲醇-水（60:40）逐级稀释制成氟伏沙明峰信噪比S/N约为3的溶液，作为检测限测试溶液。

结果：马来酸氟伏沙明定量限浓度约为0.025µg/ml；检测限浓度约为0.013µg/ml。

(5)稳定性试验

取新配制的供试品溶液及对照品溶液，室温放置，分别于0h、2h、4h、8h、12h进样，记录色谱图。数据见表3。

表3 马来酸氟伏沙明溶液稳定性试验

结果：供试品溶液室温放置12h，峰面积RSD为5.53%；对照品溶液室温放置12h，峰面积RSD为3.85%。溶液不稳定。

(6)重复性试验

取马来酸氟伏沙明片适量，按供试品溶液配制法平行配制6份供试品溶液，进样，记录色谱图。数据见表4。

表4 马来酸氟伏沙明重复性试验

结果：6份供试品溶液平均含量为99.8%，RSD为0.38%，重复性良好。

(7)回收率试验

取马来酸氟伏沙明对照品适量，按马来酸氟伏沙明片处方加入各辅料，按供试品溶液制备方法分别制成每1ml含马来酸氟伏沙明0.08mg、0.10mg、0.12mg的溶液各3份。量取各测试溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率。数据见表5。

表5 马来酸氟伏沙明回收率试验

续表

结果：9份测试溶液平均回收率为100.43%，RSD为0.84%。

4.讨论

（1）中国药典2020年版及USP43中，马来酸氟伏沙明片含量测定采用的方法均为高效液相色谱法，在色谱法中均使用了离子对试剂，且使用了较大浓度的缓冲盐浓度。尽管离子对试剂可以增加样品在色谱柱上的保留时间、改善分离性质。但是离子对试剂对仪器伤害很大，会对色谱柱造成不可逆的损伤，另外离子对试剂也很难从色谱柱上冲洗干净，色谱柱的使用寿命也会大大缩短。并且离子对试剂的价格较为昂贵，又污染环境。本方法使用的试剂均为常规试剂，大大降低了检测成本，对环境的污染也较小。

（2）本品供试品溶液及对照品溶液不稳定，室温放置12h，供试品溶液峰面积RSD为5.53%，对照品溶液峰面积RSD为3.85%，均大于2.0%。故应临用前新制。