唾液相关因子与口腔微生态pH平衡的关系及临床意义

黄 岩，边玉婷，王明丽，王 芳，刘元元

我国儿童龋病严重，若未得到及时诊治，严重影响儿童口腔及全身健康[1]。目前已证实，口腔微生态pH偏酸性在儿童龋病发生进展中起主要促进作用。碳酸酐酶Ⅵ(CA-Ⅵ)在唾液中广泛存在，系细胞分泌型碳酸酐酶，具有调控细胞凋亡、维持pH平衡等作用，对维持口腔生理功能起重要作用[2]。据既往研究，CA-Ⅵ基因多态性可影响口腔微生物群组成和龋齿风险[3]。基质金属蛋白酶-2(MMP-2)是降解变性胶原纤维的金属蛋白酶，其含量升高是影响龋齿发生的重要因素[4]。CC趋化因子配体28(CCL28)对致龋菌白色念珠菌具有抗菌活性，通过调节细菌影响口腔微生态平衡[5]。而目前关于唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28与口腔微生态pH平衡的关系及临床意义报道较少，本文对此展开研究。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年12月—2021年8月我院收治的287例儿童口腔健康检查者，其中34例有龋病(龋病组)，253例无龋病(无龋病组)。纳入标准：儿童龋病及龋源性牙髓炎诊断参考《龋病学》；配合本研究；入组前6个月无抗龋治疗史；年龄3～15岁。排除标准：其他原因引起的牙髓炎者；不能配合完成牙科检查者；未能成功收集唾液标本者；合并自身免疫性疾病者。

1.2研究方法

1.2.1龋病严重程度评估：龋坏程度[6]：浅龋：龋坏局限于釉质，无自觉症状，探诊也无反应；中龋：龋坏达牙本质浅层，有龋洞，可有探痛，对冷、食物嵌入、酸、热等刺激出现疼痛反应，刺激源去除后疼痛立即消失；深龋：表现为大而深的龋洞，或入口小而深层有较为广泛的破坏，龋坏已达牙本质深层，对外界刺激反应较中龋重，刺激源去除后疼痛立即消失。龋失补指数(DMFT)[6]：<3为低龋，3～5为中龋，≥5为高龋。

1.2.2唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值检测：于入院时清晨空腹状态下采集受检者唾液标本2 ml置入EP管中，离心10 min，取上清应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28水平，采用pH计标定的pH试纸检测唾液pH值。

1.3观察指标 比较2组唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28与pH值的相关性；分析儿童龋病易感性的影响因素；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28与龋病病情进展的关系；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28单一及联合预测儿童龋病易感性的价值。

2 结果

2.1唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值比较 龋病组唾液CA-Ⅵ、pH值低于无龋病组，MMP-2、CCL28高于无龋病组(P<0.01)。见表1。

表1 2组行口腔健康检查儿童唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值比较

2.2唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28与pH值的相关性 唾液CA-Ⅵ与pH值呈正相关(r=0.859，P<0.01)，MMP-2、CCL28与pH值呈负相关(r=-0.782、-0.707，P<0.01)。

2.3儿童龋病易感性影响因素分析 唾液CA-Ⅵ是儿童龋病易感性保护因素，MMP-2、CCL28是儿童龋病易感性危险因素(P<0.01)。见表2。

表2 儿童龋病易感性多因素Logistic回归分析

2.4唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28与龋病病情进展的关系 龋病组浅龋0例，中龋8例，深龋26例；低龋0例，中龋15例，高龋19例。相关性分析显示，唾液CA-Ⅵ与龋坏程度、DMFT情况呈负相关(r=-0.722、-0.763，P<0.01)；MMP-2、CCL28与龋坏程度呈正相关(r=0.700、0.766，P<0.01)，与DMFT情况呈正相关(r=0.723、0.720，P<0.01)。

2.5唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28单一及联合预测儿童龋病易感性的ROC曲线分析 唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28预测儿童龋病易感性的曲线下面积(AUC)分别为0.763、0.738、0.794，三者联合预测的AUC为0.894。

3 讨论

CA-Ⅵ可催化生物体内二氧化碳和碳酸氢根离子的相互转化，维持口腔pH平衡。本研究发现，龋病组唾液CA-Ⅵ低于无龋病组，提示唾液CA-Ⅵ与儿童龋病易感性有关。唾液pH值与儿童龋病发生密切相关。本研究结果显示，唾液CA-Ⅵ与pH值呈正相关，唾液CA-Ⅵ越低，pH值越低。唾液CA-Ⅵ可调节酸碱平衡，维持牙齿矿物质过饱和，降低釉质溶解速度，保护牙齿，故唾液CA-Ⅵ降低会增加儿童龋病风险[7]。本研究还显示，唾液CA-Ⅵ与龋坏程度、DMFT情况呈负相关，表明唾液CA-Ⅵ越低患儿龋病越严重。入院时唾液CA-Ⅵ预测龋病易感性的AUC为0.763，呈现出一定的预测价值。

MMP-2生理状态下，以无活性酶原形式存在于牙本质中，唾液中含量较少。本研究显示，龋病患儿唾液MMP-2高于无龋病者，提示MMP-2与儿童龋病易感性有关，多因素Logistic回归分析证实其是儿童龋病易感性的危险因素。BARBOSA-RIBEIRO等[8]报道，MMP-2较高者具有更高水平的致病菌，从而影响牙周健康。牙齿龋坏脱矿后，牙本质暴露在酸性环境中，刺激MMP-2合成与分泌，对有机胶原基质起到降解作用，促进龋病进展[9]。本研究相关性分析显示，儿童龋病龋坏程度与DMFT情况越严重，MMP-2越高。MMP-2升高时，口腔有害菌群处于生长优势，有益菌生长受抑制，口腔微生态环境破坏，pH值降低，可通过影响婴幼儿口腔微生物菌群参与龋病的发生与进展[10]。本研究唾液MMP-2预测儿童龋病易感性的AUC为0.738，提示单纯依赖MMP-2预测价值有限。

CCL28是一种趋化因子，可诱导细胞膜通透性改变及穿孔的形成。本研究显示，龋病组唾液CCL28高于无龋病组，还是儿童龋病易感性的危险因素，且儿童龋病越严重CCL28水平越高。JIANG等[11]报道，CCL28能在体外强烈抑制生活在生物膜中的变形链球菌，将重组CCL28质粒递送至大鼠腮腺诱导唾液中CCL28水平升高，显著减少大鼠牙菌斑中变形链球菌生长，提示CCL28具有预防龋齿作用。既往报道，CCL28具有双向功能，除以上作用外，还可介导免疫球蛋白分泌嗜酸粒细胞等，并能趋化这些细胞至病变部位，使黏膜表面发生疏水性改变、牙体与黏膜表面聚集炎性介质，诱导菌斑形成[12]。本研究CCL28预测儿童龋病易感性的AUC为0.794，在单一指标中最高，但仍低于唾液CA-Ⅵ、MMP-2联合CCL28预测的AUC。

综上，唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28与口腔微生态pH平衡有关，CA-Ⅵ降低及MMP-2、CCL28升高引起的口腔酸性环境为儿童龋病易感性和病情进展提供了病理基础，能为防治儿童龋病提供新思路。