黑龙江省规模化牧场饲料原料中霉菌毒素污染情况调查

刘彩娟，任 亮，付文国，王永信

原生态牧业公司，黑龙江齐齐哈尔 161000

0 引言

霉菌毒素（Mycotoxins）是由曲霉属、链格孢属、青霉属、麦角属和镰刀菌属等丝状真菌在生长过程中产生的有毒次级代谢产物[1]，可造成饲料品质降低，严重影响反刍动物生产。尤其是黄曲霉毒素会损害奶牛肝脏功能，其代谢产物黄曲霉毒素M1会影响乳品质；玉米赤霉烯酮会造成奶牛繁殖障碍；呕吐毒素会造成奶牛胃肠道出血，采食量下降，体细胞数上升，提高乳房炎发病率，增加围产期奶牛代谢疾病的风险。而食用含有霉菌毒素污染的奶、肉等会影响人的健康[2]。因此，实时动态了解饲料中主要霉菌毒素的污染状况，进行有针对性的防控，已经成为牧场重要的工作之一。因此，本文使用酶联免疫吸附法（ELISA）对黑龙江省5 家规模化牧场饲料原料进行了6 种常见霉菌毒素的检测，分析不同饲料原料的霉菌毒素污染情况，并为饲料原料中霉菌毒素污染的防控提出建议，为奶牛养殖业持续健康发展提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2021年1—12月黑龙江省5 家规模化牧场采购的饲料原料及库存饲料。

1.2 样品采集

不同饲料原料根据其饲料运输和存贮状态对应采样量，采集方式及采样点，见表1。

表1 饲料原料采样量、采集方式及采样点

1.3 试样的制备

将采集的样品，用“四分法”混合后，均分为两份：一份为留存样品（水分大的饲料需要进行烘干后留存）；一份为检测样品，粉碎后全部通过40目筛，装于密封塑料袋中，待称量用。

1.4 试剂及仪器

黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、赭曲霉毒素A、伏马毒素（B1+B2）、T-2毒素ELISA检测试剂盒，拜发分析系统销售（北京）有限公司；甲醇（分析纯），天津科密欧化学试剂有限公司；微量移液器，赛默飞世尔科技（中国）有限公司，ML204T/02十万分之一电子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司；FW-100高速万能粉碎机，天津泰斯特；Bio-Tek ELX808酶标仪，美国宝特公司。

1.5 统计分析

试验数据采用Excel软件进行统计整理，根据霉菌毒素试剂盒检出限为参考，通过霉菌毒素分析软件进行数据分析统计，黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、赭曲霉毒素A、伏马毒素（B1+B2）、T-2毒素检测限分别为1 μg/kg、222 μg/kg、222 μg/kg、5 μg/kg、222 μg/kg、50 μg/kg，高于检出限值视为阳性。根据《GB13078—2017饲料卫生标准》，黄曲霉毒素B1允许量≤30 μg/kg，泌乳期精料补充料黄曲霉毒素B1允许量≤10 μg/kg；玉米赤霉烯酮允许量≤500 μg/kg；呕吐毒素允许量≤3 000 μg/kg，泌乳期精料补充料呕吐毒素允许量≤1 000 μg/kg，赭曲霉毒素A允许量≤100 μg/kg；伏马毒素（B1+B2）允许量≤60 000 μg/kg；T-2毒素允许量≤500 μg/kg。

2 结果

2.1 2021年规模化牧场饲料原料霉菌毒素污染情况

从表2可以看出，规模化牧场的饲料原料霉菌毒素检出率较高的主要是呕吐毒素和伏马毒素，阳性检出率分别为35%、14%。其中呕吐毒素污染最高值超过6 000 μg/kg，伏马毒素（B1+B2）污染最高值达2 390 μg/kg。值得注意的是，玉米赤霉烯酮虽检出率为2%，但其污染最高值超过800 μg/kg。黄曲霉毒素B1、T-2毒素均有检出，但相对值较低，分别为3%和2%。赭曲霉毒素A的检出率最低，为0%。

表2 2021年规模化牧场饲料原料霉菌毒素污染情况

2.2 2021年不同规模化牧场饲料原料霉菌毒素污染情况

由表3可以得出，不同规模化牧场霉菌毒素污染情况，除赭曲霉毒素A均未检出外，其余霉菌毒素均有检出，但不同牧场呈现不同规律性。A牧场黄曲霉毒素B1阳性检出率为5.62%，污染最高值为6.45 μg/kg；玉米赤霉烯酮阳性检出率1.35%，污染最高值为659.20 μg/kg；呕吐毒素阳性检出率最高为44.66%，阳性平均值为1 983 μg/kg，污染最高值为2 199 μg/kg；伏马毒素（B1+B2）阳性检出率分别为16.33%，阳性平均值984μg/kg，污染最高值1 043.55 μg/kg；T-2毒素检出率为1.32%，阳性平均值102.02 μg/kg，污染最高值为137.68 μg/kg。B牧场黄曲霉毒素B1阳性检出率为0.96%，污染最高值为5.59 μg/kg；玉米赤霉烯酮阳性检出率4.15%，污染最高值为572.40 μg/kg；呕吐毒素阳性检出率为35.07%，阳性平均值为1 415 μg/kg，污染最高值为6 000 μg/kg以上；伏马毒素（B1+B2）阳性检出率为19.72%，阳性平均值1 103.10 μg/kg，污染最高值2 390 μg/kg；T-2毒素检出率为0.80%，污染最高值为128.60 μg/kg。C牧场黄曲霉毒素B1阳性检出率为0%；玉米赤霉烯酮阳性检出率0.83%，污染最高值为790 μg/kg；呕吐毒素阳性检出率为22.30%，阳性平均值为1 532.42 μg/kg，污染最高值为6 000 μg/kg以上；伏马毒素（B1+B2）阳性检出率为16.20%，污染最高值1 120 μg/kg；T-2毒素检出率为6.30%，污染最高值为125.45 μg/kg。D牧场黄曲霉毒素B1阳性检出率为4.72%，污染最高值为5.92 μg/kg；玉米赤霉烯酮阳性检出率0%；呕吐毒素阳性检出率为28.78%，阳性平均值为1 700 μg/kg，污染最高值为3 999 μg/kg；伏马毒素（B1+B2）阳性检出率为3.48%，阳性平均值600 μg/kg，污染最高值714 μg/kg；T-2毒素检出率为0%。E牧场黄曲霉毒素B1阳性检出率为0.1%，污染最高值为1.23 μg/kg；玉米赤霉烯酮阳性检出率2.2%，阳性平均值753 μg/kg，污染最高值为800 μg/kg以上；呕吐毒素阳性检出率为30.1%，阳性平均值为1 861 μg/kg，污染最高值为4280 μg/kg；伏马毒素（B1+B2）阳性检出率为6.2%，污染最高值733 μg/kg；T-2毒素阳性检出率为3.1%，污染最高值为124.56 μg/kg。

表3 2021年不同规模化牧场饲料原料霉菌毒素污染情况

从整体来看，五个牧场的呕吐毒素风险均较高，其中A牧场、B牧场阳性检出率较高，但B牧场、C牧场污染最高值相对较高，高于《GB13078—2017 饲料卫生标准》上限3 000 μg/kg，A牧场、B牧场、C牧场、D牧场、E牧场整体均值低于《GB13078—2017 饲料卫生标准》上限3 000 μg/kg，但在泌乳牛使用中，需要特别注意呕吐毒素的限量，不能使用检测值高的饲料原料。玉米赤霉烯酮虽阳性检出率较低，但C牧场、E牧场阳性平均值和污染最高限高于《 GB13078—2017 饲料卫生标准》上限值500 μg/kg，尤其是E牧场，污染最高限较高。黄曲霉毒素B1、伏马毒素（B1+B2）、T-2各牧场阳性检出率相对较低，风险性相对较低。五个牧场虽同在黑龙江省，但A牧场、B牧场、C牧场处于相同气候环境，温湿度相对D牧场较高，且采购货物来源地不相同，这可能是导致差异较大的原因。

2.3 不同饲料原料霉菌毒素污染情况

由表4可知，24 种不同的饲料原料检出霉菌毒素种类不同，有19 种饲料原料呕吐毒素均有检出，17 种饲料原料伏马毒素均有检出，规模化牧场奶牛饲养常用的饲料原料青贮，精补料，全棉籽，玉米面根据品种不同呈现出不同的规律性。可以根据检出规律性进行针对性的筛查。

表4 不同饲料原料霉菌毒素污染情况

3 讨论

霉菌毒素会破坏动物肠道形态结构的完整性，损伤其免疫和抗氧化系统，使肠道菌群和营养物质代谢发生紊乱，进而影响动物机体健康[3]。饲料中常见且危害较大的霉菌毒素有黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素等。这三种霉菌毒素能够降低动物免疫力，具有致癌性、基因毒性和生殖毒性等[4～7]，而且叠加毒性远大于单一毒素的作用[8]，因为不同的霉菌毒素都有特定的作用靶点，且霉菌毒素间的协同作用会加重免疫损伤。Luongo等[9]的研究证明了上述观点，指出玉米赤霉烯酮（α-ZEN）和伏马毒素B1（FB1）存在协同作用，会损害动物的抗病毒能力。

黑龙江省规模化牧场2021年的黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素整体阳性检出率（3%、2%、35%），比王倩等[10]2020年调查主要来自山东、河南、江苏、湖南、四川等地的原料饲料污染黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素（87.69%、92.49%、94.59%）检出率低，有可能与所收集的饲料原料来源地区有关，也可能和不同年份的季节气候变化有关。黑龙江省规模化牧场目前存在风险较高的霉菌毒素是呕吐毒素，同时应注意呕吐毒素、玉米赤霉烯酮污染最高值较高的饲料原料，对该种饲料原料进行重点防控；赭曲霉毒素A均未检出，说明该地区赭曲霉毒素A风险性较小，可以放宽该种霉菌毒素饲料原料的筛查。国内关于伏马毒素（B1+B2）和T-2毒素相关的数据和研究报道相对较少，但因其与其他毒素具有协同作用，也应引起重视，对全棉籽、泰瑞嘉、糖蜜、燕麦青贮、羊草等饲料原料进行重点筛查。

根据5 个规模化牧场的饲料原料霉菌毒素检出情况不同，以及不同饲料原料检出霉菌毒素种类不同，因此针对霉菌毒素的防控要根据不同地区，不同牧场的饲料原料使用类型制定相应的防控方案，做好饲料原料入场，存贮和饲喂管理，最好做到“一场一策”。具体建议如下：一是抓好源头控制，原料采购选择时避开污染严重的原料产区，优先选择和采购气候环境好的地区所生产的原料，原料采购时选择质量稳定的供应商，可要求供应商提供相关检测报告；原料入场验收时，要根据不同饲料原料，设立内控预警机制，进行霉菌毒素的重点筛查，加大检测频次，及时识别风险较高的饲料原料，杜绝进入牧场。二是做好库存管理，对于水分较高容易滋生霉菌的的饲料原料要注意存贮环境，防潮、防雨，加强通风，建议相对湿度低于50%，温度控制在30 ℃以下；根据牧场的饲料用量、存贮能力和储存环境等确定购买饲料原料数量，尽量缩短饲料原料的储存时间，同时做到“先进先出”。对库存饲料原料加大监控检测频次，尤其是青贮等饲料，在使用前要重新检测毒素指标，处于低风险时才能安排饲喂。三是加强饲喂环境卫生和消毒管理。重视奶牛舍内的环境卫生，包括饲喂道、饮水槽、粪道、卧床等；对于饲料存贮区、饲喂道等防止漏水等出现淋湿，坚持每天巡查，对被水淋湿、发霉和结块的饲料原料及时清理；根据外界气温，合理安排带牛舍内消毒的频率和时间。