老年急性冠脉综合征患者中miR-122-5p的表达及与主要不良心血管事件的关系分析*

刘晶晶，崔璐璐△，万 莉，程 珍

1.湖北省黄石市第五医院心血管内科，湖北黄石 435005；2.湖北省黄石市中医医院急诊科，湖北黄石 435000

急性冠脉综合征(ACS)是常见的心血管疾病，主要病理基础为动脉粥样硬化，具有发病率高、并发症多及病死率高的特点[1]。研究表明，经皮冠脉介入术(PCI)在ACS治疗中具有一定价值，能利用植入支架解除冠状动脉堵塞状态，但即便如此，患者术后仍可能出现再发心肌梗死、严重心律失常、血运重建等不良事件[2]。尽早评估ACS患者主要不良心血管事件(MACE)的发生风险对改善患者预后至关重要。既往临床主要通过影像学技术结合N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)等指标对ACS病情进行评估，虽有一定价值，但对MACE发生的预测作用非常有限[3]。近年来，研究发现微小核糖核酸(miRNA)与ACS患者的动脉粥样硬化斑块形成及脂质代谢紊乱存在关联，部分miRNA在这类患者中呈特异性表达[4]。动物实验提示缺血再灌注心律失常大鼠的心肌组织内miR-122-5p表达上调，表明其可能参与了心肌损伤[5]。施冰等[6]发现miR-122-5p与NT-proBNP存在相关性，而既往研究显示ACS患者的血浆NT-proBNP水平升高[7]，但关于miR-122-5p与ACS之间的关系尚未完全阐释清楚，且未能明确其与老年ACS患者MACE发生的相关性。基于此，本研究拟分析ACS患者miR-122-5p的表达水平及其与MACE的关系，旨在辅助ACS的诊疗及发生MACE风险的预测。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年4月至2020年12月于黄石市第五医院收治的老年ACS患者101例作为ACS组，包括不稳定型心绞痛(UA)患者46例、急性心肌梗死(AMI)患者55例；选取同期收治的稳定型冠心病(SCAD)患者86例作为SCAD组，体检健康者80例作为对照组。本研究经该院医学伦理委员会批准，3组基线资料比较，差异无统计学意义，具有可比性(P>0.05)，见表1。

表1 三组基线资料比较

1.2纳入与排除标准 纳入标准：(1)ACS组，符合《非ST段抬高型急性冠状动脉综合征诊断和治疗指南(2016)》[8]中的相关诊断标准，经冠状动脉造影确诊为ACS者；年龄≥60岁者；就诊前2周内未使用过影响心功能的药物者。(2)SCAD组，符合《稳定性冠心病诊断与治疗指南》[9]中的诊断标准者；年龄≥60岁者；就诊前1周内未使用过影响心功能的药物者。(3)对照组：同期体检的体检健康者；年龄≥65岁者；体检前2周内未使用过影响心功能的药物者；自愿签署同意书者。排除标准：近2周内有类固醇、阿片类等治疗史者；近1个月内有重大手术史者；恶性肿瘤者；就诊时存在扩张性心肌病、充血性心衰、病毒性心肌炎、心源性休克等疾病者；患自身免疫性疾病者；有急或慢性肝肾损伤者。

1.3仪器与试剂 反转录试剂盒、PCR试剂盒、Trizol试剂均购自美国赛默飞世尔科技公司；冷冻离心机(ST16R型)、超低温冰箱(906-ULTS型)均购自美国赛默飞世尔科技公司；PCR仪(9700型)购自美国应用生物系统公司。

1.4方法

1.4.1血清miR-122-5p检测 ACS与SCAD患者在就诊时采集空腹肘静脉血3 mL，体检健康者在体检当日采血，离心20 min(3 500 r/min)，分离血清，置于-80 ℃冰箱待测。利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测血清miR-122-5p相对表达水平。首先经Trizol试剂提取总RNA，检测其纯度及浓度，行反转录反应，合成cDNA，然后行qPCR扩增。引物序列：miR-122-5p上、下游序列分别为5′-ACACTCCAGCTGGGTGGAGTGTGACAATGG-3′、5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′；以U6为内参引物，上、下游序列分别为5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′、5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。PCR反应条件：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性15 s、60 ℃退火1 min、72 ℃延伸30 s，40个循环。以2-ΔΔCT计算血清miR-122-5p相对表达水平。

1.4.2临床指标检测 ACS患者就诊时另外采集3 mL空腹外周静脉血，离心20 min(3 500 r/min)，分离血浆，置于-80 ℃冰箱待测。经酶联免疫吸附试验测定血浆NT-proBNP、cTnI水平，试剂盒购自江西江蓝纯生物试剂有限公司，根据说明书操作。

1.4.3随访分析 随访时间为6个月，随访方式包括上门随访、门诊随访、微信随访等，根据患者需求进行，记录患者行PCI术后6个月MACE的发生情况，包括心源性死亡、再次血运重建、非致死性心肌梗死、心绞痛复发、充血性心衰。将发生MACE者纳入预后不良组，将没有发生MACE者纳入预后良好组。

1.5评分标准 Gensini评分[10]：(1)病变部位评分，小分支计0.5分，右冠状动脉、左前降支远段、左回旋支中/远段均计1.0分，左前降支/回旋支近段计2.5分，左主干计5.0分，左前降支中段计1.5分。(2)狭窄程度评分，1%～<26%、26%～<51%、51%～<76%、76%～<91%、91%～<100%、100%分别计1、2、4、8、16、32分。每个冠状动脉狭窄评分系数与该病变分支评分系数之间的乘积即为最终该病变血管的具体评分，总分为各病变血管的分值之和，分值越高提示病变越重。

2 结 果

2.13组血清miR-122-5p表达水平比较 ACS组血清miR-122-5p相对表达水平为0.34±0.11，SCAD组为0.20±0.07，对照组为0.12±0.05，其中ACS组高于SCAD组、对照组，SCAD组高于对照组，组间比较差异有统计学意义(F=164.076，P<0.001)。

2.2血清miR-122-5p表达水平对ACS、SCAD的鉴别价值分析 血清miR-122-5p表达鉴别ACS、SCAD的曲线下面积(AUC)为0.797(SE为0.034，P<0.001，95%CI0.729～0.864)，最佳界值为0.307，灵敏度为79.40%，特异度为80.00%，见图1。

图1 血清miR-122-5p表达水平鉴别ACS、SCAD的ROC曲线

2.3ACS患者血清miR-122-5p的表达水平与临床特征的关系 根据ACS患者的血清miR-122-5p相对表达水平平均值进行分组，其相对表达水平≥均值者纳入高表达组(59例)，相对表达水平<均值者纳入低表达组(42例)。结果提示高表达组多支病变、AMI占比分别为27.12%(16/59)、66.10%(39/59)，高于低表达组的4.76%(2/42)、38.10%(16/42)，且高表达组入院时Gensini评分及NT-proBNP、cTnI水平高于低表达组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 ACS患者血清miR-122-5p的表达水平与临床特征的关系(n或

续表2 ACS患者血清miR-122-5p的表达与临床特征的关系(n或

2.4ACS患者的预后分析及血清miR-122-5p表达水平、疾病特征比较 在101例患者中，有77例预后良好，有24例预后不良，其中心源性死亡3例，再次血运重建5例，非致死性心肌梗死5例，心绞痛复发8例，充血性心力衰竭3例。预后不良组血清miR-122-5p相对表达水平、Gensini评分及NT-proBNP、cTnI水平高于预后良好组，预后不良组多支病变、AMI占比分别为41.67%(10/24)、79.17%(19/24)，高于预后良好组的10.39%(8/77)、46.75%(36/77)，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 不同预后ACS患者血清miR-122-5p表达水平、疾病特征比较或n)

2.5ACS患者MACE发生的多因素Logistic回归分析 采用多因素Logistic回归模型对相关变量行量化赋值，以miR-122-5p(赋值0为<0.34，1为≥0.34)、Gensini评分(赋值0为<57.69分，1为≥57.69分)、NT-proBNP(赋值0为<102.24 ng/L，1为≥102.24 ng/L)、cTnI(赋值0为<1.75 ng/mL，1为≥1.75 ng/mL)、疾病类型(赋值0为UA，1为AMI)为自变量，以有无MACE为因变量Y(0为无，1为有)，结果提示miR-122-5p相对表达水平、Gensini评分、NT-proBNP水平、cTnI水平升高，以及多支病变、AMI是MACE发生的独立危险因素(P<0.05)，见表4。

表4 ACS患者MACE发生的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

ACS是一种动脉硬化血栓性疾病，以老年患者居多，初期可见血管内膜、内皮细胞功能损伤，可引起血小板聚集，进一步损伤血管内膜，增加血管壁通透性，促进血管收缩，致内皮下聚集大量胆固醇，引起炎症细胞浸润，将胆固醇吞噬并形成泡沫细胞，促使动脉粥样硬化斑块形成[11]。ACS病死率较高，MACE的发生是导致预后欠佳的重要因素，对患者生活质量影响非常大，临床需寻求可靠标志物对冠心病进行筛查，并预测预后，为提高患者生活质量提供依据。研究表明，miRNA在心血管疾病中发挥了重要作用，它能对动脉粥样硬化后血管生成、炎症及血栓形成有调节作用，可与靶基因形成非常复杂的调控网络，精细化调控血小板活化、斑块破裂等病理过程[12]。LIN等[13]发现通过抑制miR-122-5p的表达，能对心肌细胞抗凋亡机制进行诱导，miR-122-5p过表达则能降低丹酚酸酯对心肌梗死的疗效，这表明miR-122-5p可能与心肌梗死的药物治疗预后有关。然而，现阶段临床尚未明确miR-122-5p与ACS患者MACE之间的关系，仍需进一步探讨。

本研究通过分析发现，ACS组血清miR-122-5p表达水平高于SCAD组与对照组，且其表达水平对ACS、SCAD具有一定鉴别价值。miR-122-5p是组织特异性较强的miRNA，有学者发现miR-122-5p与脑缺血性疾病发生有关，其过表达可导致预后不良的风险增加[14]。HNNINEN等[15]研究提示miR-122-5p与心源性休克患者3个月的病死率有关，过表达的miR-122-5p能增加死亡风险，并且其表达与低灌注标志物密切相关。POFI等[16]发现miR-122-5p过表达与糖尿病患者心肌病的发生有关，它可能通过调节基质金属蛋白酶2影响细胞外基质，增加心肌病的发生风险。miR-122-5p能通过对核转录因子kB的调节，在细胞凋亡、血栓形成、动脉粥样斑块形成等过程中发挥作用，其表达上调能促进心血管疾病进展，这可能是其在这类疾病中的作用机制[17]。这进一步提示miR-122-5p过表达可能引起心功能损伤，在心血管疾病中具有重要作用。本研究结果显示，老年ACS患者miR-122-5p表达水平与血管病变支数、疾病类型及Gensini评分、NT-proBNP水平、cTnI水平有关。多支病变、AMI及Gensini评分、NT-proBNP水平、cTnI水平越高的ACS患者冠状动脉病变程度、心功能损伤程度更重，在ACS的冠状动脉病变进展过程中可能有miR-122-5p的参与，过表达的miR-122-5p可能通过某种途径加重心功能损伤，促进心血管疾病进展。

ACS患者经PCI术治疗后可能引起MACE的发生，对预后影响较大[18]。本研究结果提示预后不良组的血清miR-122-5p相对表达水平更高，且其相对表达水平升高是预后的危险因素之一，表明miR-122-5p可能与ACS预后有关。LING等[19]研究发现UA、AMI患者的miR-122-5p表达水平较健康者均升高，且其表达水平越高，患者的冠状动脉病变狭窄程度越重。据此推测过表达的miR-122-5p可能会加重冠状动脉病变狭窄程度，促进ACS进展，从而影响预后。但也有研究提示ACS患者的miR-122-5p相对表达水平降低[20]，与本研究结论相悖，这可能与研究过程中涉及较多的混杂因素及纳入病例参考对象不同有关，但该研究经COX多因素分析，最终未提示miR-122-5p与心血管疾病风险存在关联，表明其在该研究中可能仅为混杂因素。而本研究则发现miR-122-5p在ACS患者血清中表达上调，且进一步分析了其与ACS特征、预后的关系，能为临床诊疗及预后预测提供参考价值。本研究还提示血管病变支数、疾病类型及Gensini评分、NT-proBNP水平、cTnI水平也与ACS预后有关，这些均为常规因素，与既往结论基本符合[21-22]。

综上所述，ACS患者的血清miR-122-5p相对表达水平升高，其表达水平升高会增加MACE的发生风险。本研究局限性为随访观察时间较短，未来还需延长观察时间，分析miR-122-5p与ACS患者远期MACE发生的关系。