电子交叉配血技术在红细胞不规则抗体阳性患者交叉配血中的应用研究*

刘学军，刘金莲，马婷婷，黄宝甲，莫秋红，李丽兰

南宁输血医学研究所/南宁中心血站，广西南宁 530007

电子交叉配血是指在血型鉴定和抗体筛查的基础上，直接用计算机系统为患者选择血型相容的血液[1]。电子交叉配血技术最早应用于瑞典的一家医院，他们从1983年开始采用该技术为ABO/RhD血型抗原确认且红细胞不规则抗体阴性的患者实施ABO/RhD相容的交叉配血，所发放血液超过25万U[2]。目前该技术在国外的一些较发达的地区已广泛应用[3]。在我国，香港CHAN等[4]于1996年报道了ABO/RhD相容的电子交叉配血在外科输血的实施和应用，使香港成为亚洲最早实施电子交叉配血的地区。2008年，广东省东莞市中心血站何子毅等[5]率先在我国大陆开展电子交叉配血的研究和临床应用工作。目前，红细胞相关电子交叉配血的报道主要集中在针对红细胞不规则抗体阴性的患者实施ABO/RhD相容的电子交叉配血的应用中，而针对红细胞不规则抗体阳性患者实施的电子交叉配血的相关报道还较少见。本研究主要针对红细胞不规则抗体阳性且特异性明确的患者，在本实验室已建立的红细胞血型抗原/抗原基因型已知献血者数据库的基础上，开展电子交叉配血的应用研究。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2020年1月至2021年4月南宁市各医院送检的不规则抗体筛查阳性和(或)交叉配血不相合的137例患者的137份血液标本。137例患者中男68例，女69例，年龄2 d至99岁(新生儿溶血病案例4例，中位年龄为5.5 d，其余案例133例，中位年龄为51.5 岁) ，分别采集不抗凝静脉血和乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血各5 mL，用于血清学检测。

1.2仪器与试剂 Eppendorf离心机(德国Eppendorf)；久保田KA-2200离心机(日本KUBOTA)；ID-Incubator 37SI(美国BIO-RAD)；ID-Centrifuge 12SⅡ离心机(美国BIO-RAD)；恒温水槽DK-8B(上海精宏实验设备有限公司)；抗球蛋白检测卡(瑞士DiaMed，批号：50531.60.17)；抗-A、抗-B(上海血液生物，批号：20200202)；抗-D单克隆试剂(上海血液生物，批号：20201802)；抗球蛋白试剂(上海血液生物，批号：20195002)；聚凝胺介质试剂(珠海贝索,批号：A201203)；抗体鉴定谱细胞(上海血液生物，批号：20201113)；抗体筛查细胞(上海血液生物,批号：20210130)；抗体筛查细胞(江苏力博，批号：202008013)；Makropanel16(荷兰Sanquin，批号：8000452938)；各种抗血清试剂等。

1.3血型和不规则抗体鉴定方法 按照《全国临床检验操作规程》中血型血清学检查方法操作，应用盐水法进行ABO、RhD血型和其他血型系统红细胞抗原检测，应用盐水法、聚凝胺法、抗球蛋白法和(或)微柱凝胶卡法、酶法、吸收放散法等进行红细胞不规则抗体的检测和鉴定。

1.4电子交叉配血 针对不规则抗体检测阳性且特异性明确的患者，应用已建立的免疫血液学实验室临床检测综合管理系统实施电子交叉配血。电子交叉配血基本条件：(1)患者ABO和RhD血型确定；(2)患者标本不规则抗体阳性且特异性明确；(3)实验室建立的红细胞血型抗原/抗原基因已知型献血者数据库包含有患者不规则抗体所对应抗原的血型系统及该抗原为阴性的供者数据。电子交叉配血的原则：为患者找寻其体内不规则抗体所对应抗原阴性，且ABO和RhD血型相容的血液产品或献血者。

1.5血清学实验验证 应用盐水法、聚凝胺法和抗球蛋白法对电子交叉配血相容血液进行血型血清学交叉配血。

2 结 果

2.1不规则抗体分布情况 纳入本研究的137份标本中，红细胞不规则抗体特异性分布情况见表1。主要涉及Rh、MNS、Lewis、Kidd和Duffy等5个血型系统。

表1 137份标本红细胞不规则抗体特异性分布情况

2.2电子交叉配血和血型血清学交叉配血验证结果 应用电子交叉配血成功为本研究的137例红细胞不规则抗体阳性的患者找到相合的供者或血液制品，血型血清学交叉配血验证结果与电子交叉配血结果一致，均为相容137例，不相容0例。

3 讨 论

对于红细胞不规则抗体阳性的患者，当需要输血治疗时，为其找到与之体内抗体所对应的抗原为阴性的供者，是为患者提供相配合的血液和实施有效输血治疗的关键。电子交叉配血在红细胞不规则抗体阳性且特异性明确患者中的成功实施，其先决条件是实验室已建立适应当地临床输血的红细胞血型抗原/抗原基因型已知的献血者数据库，且所建立的数据库包含与患者红细胞不规则抗体所对应的红细胞抗原阴性的供者。在前期工作中，本课题组针对刘金莲等[6]报道的南宁地区疑难输血患者红细胞不规则抗体分布情况初步建立了南宁红细胞血型抗原/抗原基因型已知的献血者数据库，目前该数据库主要涵盖Rh、MNS、Lewis、Kidd和Duffy 等5个血型系统，以固定献血者为主要对象，在血站常规检测ABO和RhD血型的基础上，采用血清学方法和(或)分子生物学检测方法对所涵盖的5个血型系统进行血型检测。目前本血站已建立的献血者数据库中，包含Rh血型系统DCcEe已知型供者23 754人，其中RhD阴性供者1 781人，ccdee供者934人，CCDee供者2 444人，ccDEE供者576人；包含MNS系统供者482人，其中NN供者210人，MM供者62人，ss供者19人，Mur阴性供者191人；包含Lewis系统供者335人，其中Lea-b+供者179人，Lea+b-供者90人，Lea-b-供者66人；包含Kidd系统供者304人，其中Jka-b+供者215人，Jka+b-供者89人；包含Duffy系统供者80人，均为Fya+b-供者。在本研究的137份红细胞不规则抗体特异性明确的标本中，Rh系统抗体占比最高，为56.93%(78/137)，其次为MNS系统抗体，占18.25%(25/137)。以目前本实验室已建立的南宁市红细胞血型抗原/抗原基因型已知的献血者数据库为基础，通过电子交叉配血，均成功为这些患者找到其抗体所对应抗原阴性的相配合的血液，血清学交叉配血验证结果与电子交叉配血结果完全一致，血液输注后，对患者进行电话回访，无患者发生溶血性输血反应，显示了其安全性和可靠性。

应用电子交叉配血为红细胞不规则抗体阳性患者成功实施交叉配血的另一必要条件是患者的抗体特异性鉴定明确且无临床有意义抗体的漏检。由于血型抗原具有人群多态性，不同地区人群红细胞血型系统不规则抗体的分布亦有所差异。例如，Dia抗原表达几乎限制在蒙古族人群中，土著美洲人、南美印第安人的表达频率约为36%，日本人的表达频率约为12%，中国人的表达频率约为5%，高加索人和黑种人表达频率约为0.01%[7]。因此，实验室应根据当地抗原的人群多态性特征和输血患者抗体分布情况制订相应检测策略，以确保抗体鉴定准确，避免临床有意义抗体的漏检情况发生。随着检测技术和实验室管理水平的不断提高，抗体漏检率越来越低。英国NEQAS的室间质量评价数据中，抗体漏检率从1984-1985年的6.65%下降到1996-1997年的0.07%[8]。据GARRATTY等[9]估算，具有潜在临床意义抗体的漏检率约为1∶17 000。英国BCSH 《输血实验室血液相容性检测程序编制指南》根据具有临床意义抗体的相关数据，对抗体筛检细胞所应涵盖的抗原及抗原组合标准作出详细规定，如遵照该指南操作，抗体筛检的敏感性高于交叉配血试验[10]。

电子交叉配血能为血型抗原确认和(或)抗体特异性明确的患者，特别是针对稀有血型抗原或具有稀有血型抗体的患者能够快速找到相匹配的供者，使患者能够得到及时有效的治疗。相较于传统的血清学交叉配血，电子交叉配血已被证实具有很多优点[11]，其最大的优势是检测时间比血型血清学交叉配血缩短[12-13]。电子交叉配血或将是输血事业未来发展的趋势，电子交叉配血的实施和应用有望为输血的安全有效提供保障。