芦荟复配茶多酚和维C 对小鼠免疫力的影响

申开泽，万庆家，熊 宇，张应龙，刘 莎

（1. 昭通学院农学与生命科学学院，云南昭通 657000；2. 云南万绿生物股份有限公司，云南玉溪 653300）

免疫是机体至关重要的保护性生理功能，可有效识别危险信号，抵御外来病原微生物的入侵并清除体内有害物质，最终维持自身内环境的稳定状态。免疫力下降，机体的抵抗能力也将随之降低，从而引发疾病[1-2]。药食两用中药具有多靶点、多途径、多层次免疫增强作用的优势[3]，因此是开发增强免疫功能产品的重要原料。库拉索芦荟（Aloe veraL.），主要含多糖、蒽醌、有机酸、蛋白质、氨基酸和微量元素等成分，经大量动物功能试验研究证明具有较好的增强免疫力作用，有效用量折算为人体用量基本为每天1.2~3.0 g（以干物质计，折算多糖含量约为0.12~0.30 g）[4-8]。绿茶中富含的茶多酚也具有明显的增强免疫力作用[9-11]。维C 的增强免疫力功能也已得到动物试验[12-13]和临床试验[14-16]证实，同时维C 还是可根据生产需要适量添加的抗氧化食品添加剂。库拉索芦荟与茶多酚联合使用能预防小鼠酒精性肝损伤[17]，库拉索芦荟还能促进维C 在人体内的吸收[18]，茶多酚与维C 有较好的协同作用[19]。基于此，试验以库拉索芦荟提取物、茶多酚和维C 为主要功能原料，以结晶果糖和罗汉果甜苷为辅料制成复配物，并探究其对小鼠免疫力的影响，以期为后续的开发利用提供基础的药效学资料。

1 材料和方法

1.1 试验样品

库拉索芦荟提取物（200∶1），云南万绿生物股份有限公司提供；茶多酚（98%），江苏德和生物科技有限公司提供；维C，东北制药有限公司提供。3种功能原料复配结晶果糖和甜菊糖苷制成芦荟茶多酚维C 复配物，口服推荐量为每日1 次，每次8 g（含芦荟多糖0.15 g，茶多酚0.3 g，维C 0.1 g），折合体重剂量为0.133 g/kg·bw，（按60 kg 成人计）。

1.2 试验小鼠

采用体重为18~22 g 的SPF 级ICR 雌性小鼠，共200 只，湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。试验期间的动物生存环境温度为20~25 ℃，相对湿度为54%~58%。

1.3 主要仪器与试剂

MS-TS 型分析天平、722S 型分光光度计，梅特勒-托利多国际有限公司产品；BBS-SDC 型洁净工作台，山东博科科学仪器有限公司产品；离心机、二氧化碳培养箱、Multiskan FC 酶标仪，赛默飞世尔公司产品；显微镜，上海点应光学仪器有限公司产品。

绵羊红细胞（SRBC），北京博尔西科技有限公司提供；生理盐水，上海百特医疗用品有限公司提供；Hank's 液，武汉卡诺斯科技有限公司提供；RPMI1640 培养液，武汉普诺赛公司提供；青链霉素，赛默飞世尔公司提供；刀豆球蛋白A（ConA）、Giemsa 染液，美国Sigma 公司提供；小牛血清，北京百奥莱博公司提供；1%冰醋酸、1 mol/L 的HCl 溶液、0.1%的碳酸钠、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS 缓冲液） （pH 值7.2~7.4），0.2 mol/L 的Tris-HCl 缓冲液，实验室配制；SA 缓冲液、鸡红细胞、补体（豚鼠血清）、MTT、 YAC-1 细胞、都氏试剂、琼脂糖、2.5% Triton，上海源叶生物科技有限公司提供；酸性异丙醇、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、甲醇（分析纯），广东光华科技股份有限公司提供；印度墨汁，上海哈灵生物科技有限公司提供。

1.4 样品剂量选择和前处理

分别按人体推荐量的5 倍，10 倍和30 倍设0.67，1.33，4.00 g/kg·bw 3 个剂量组（低、中、高）。分别取复配物6.70，13.30，40.00 g，用蒸馏水配制至200 mL，即得。

1.5 试验方法

参照《保健食品检验与评价技术规范（2003 版）》[20]，将小鼠平均分为A~E 5 个大组，A 组开展碳廓清试验；B 组采用MTT 法开展ConA 诱导的小鼠淋巴细胞转化实验，进行NK 细胞的活性测试；C 组开展脏/体比值、半数溶血值（HC50） 和抗体生成细胞数测定；D 组采用足跖肿胀法进行迟发型变态反应（Delayed type hypersensitivity，DTH） 试验；E 组开展小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。每个大组随机分为4 个小组（每组10 只），即3 个剂量组和1 个对照组。各小组按20 mL/kg·bw 对小鼠进行灌胃，对照组用等量的蒸馏水，每日1 次，持续30 d。数据转化和统计分析采用Excel，SPSS 软件进行。

2 结果与分析

2.1 复配物对试验小鼠体重的影响

与对照组相比，5 个大组中的低中高各剂量组在试验初期、中期和末期的小鼠体重及试验期间体重增长，均无显著性差异（p＞0.05），说明复配物对试验动物体重及增长无明显影响。

2.2 复配物对试验小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

复配物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响见表1。

表1 复配物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响（±s）/%

表1 复配物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响（±s）/%

?

由表1 可知，与对照组相比，各剂量对小鼠胸腺/ 体重比值和脾脏/ 体重比值无显著性差异（p＞0.05），说明受试物对试验小鼠的免疫器官脏器/体重比值无明显影响。

2.3 复配物对试验小鼠细胞免疫功能的影响

复配物对小鼠淋巴细胞增殖能力和迟发型变态反应能力的影响见表2。

表2 复配物对小鼠淋巴细胞增殖能力和迟发型变态反应能力的影晌（±s）

表2 复配物对小鼠淋巴细胞增殖能力和迟发型变态反应能力的影晌（±s）

?

由表2 可知，以足跖肿胀法进行的小鼠迟发型变态反应能力试验结果表明，l.33 g/kg·bw 和4.00 g/kg·bw剂量组的小鼠足跖肿胀度与对照组相比具有显著性差异（p＜0.05），表明复配物具有增强小鼠细胞免疫的功能。但复配物各剂量组的OD（optical density）差值与对照组相比无显著性差异（p＞0.05），说明复配物不能明显改善小鼠淋巴细胞增殖能力。

2.4 复配物对小鼠体液免疫的影响

复配物对小鼠抗体生成细胞数和HC50的影响见表3。

由表3 可知，采用Jerne 玻片改良法进行小鼠抗体生成细胞数检测，结果表明，高剂量组的溶血空斑数与对照组相比具有显著性差异（p＜0.05）。该剂量组的小鼠半数溶血值（HC50） 与对照组比较也显著提高（p＜0.05）。2 项试验结果综合说明复配物能显著增强试验小鼠的体液免疫。

表3 复配物对小鼠抗体生成细胞数和HC50 的影响（±s）

表3 复配物对小鼠抗体生成细胞数和HC50 的影响（±s）

?

2.5 复配物对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

复配物对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清和对鸡红细胞吞噬率的影响见表4。

表4 复配物对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清和对鸡红细胞吞噬率的影响（±s）

表4 复配物对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清和对鸡红细胞吞噬率的影响（±s）

?

由表4 可知，小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能影响试验以吞噬指数（a） 来表示复配物对碳廓清能力，与对照组比较，复配物各剂量组吞噬指数统计均无显著性差异（p＞0.05）。同样，小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验也显示，各剂量组的吞噬率和吞噬指数与对照组相比也无显著性差异（p＞0.05）。结果表明，复配物不能明显增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

2.6 复配物对小鼠NK 细胞活性的影响

复配物对小鼠NK 细胞活性的影响见表5。

表5 复配物对小鼠NK 细胞活性的影响（±s）

表5 复配物对小鼠NK 细胞活性的影响（±s）

?

由表5 可知，各剂量组NK 细胞活性均高于对照组，并随剂量增高呈一定的递增关系，中、高剂量组与对照组比较有显著性差异（p＜0.05），表明复配物有显著提高小鼠NK 细胞活性的作用。

3 结论

以小鼠为对象全面开展芦荟茶多酚维C 复配物的增强免疫力功能动物试验。结果表明，与对照组比较，连续30 d 每天一次经口灌胃给予小鼠0.67，1.33，4.00 g/kg·bw 剂量的复配物，各剂量对小鼠体重增长、胸腺/ 体重比值、脾脏/ 体重比值无显著影响，说明样品对小鼠体重和免疫器官无明显影响；同时，1.33，4.00 g/kg·bw 剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应能力和NK 细胞活性（p＜0.05），4.00 g/kg·bw 剂量能显著提高抗体生成细胞数和小鼠半数溶血值（p＜0.05）。体液免疫功能和NK 细胞活性呈阳性，根据判断标准[20]，可以判定库拉索芦荟提取物复配茶多酚和维C 具有增强免疫力功能。为以库拉索芦荟、茶多酚和维C 为功能原料进行增强免疫力功能保健食品的开发提供了理论和试验基础。为了进行相关产品的开发，后续开展体外机制研究、体内药理学十分必要，还应开展多中心、大样本的随机对照人体试食研究，以进一步确证其功能。