慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期患者血浆DOA与肠道菌群相关性

郑果果

河南科技大学第一附属医院(河南 洛阳 471000)

目前,我国有经1亿人口患有慢性乙型肝炎,而每年有近30%的患者会出现自发的肝炎急性加重,进而发展为肝硬化或肝衰竭等终末期肝病[1]。慢加急性乙型肝炎肝衰竭是在以往确诊或隐匿性慢性肝病的基础上,由病毒感染、过量饮酒、手术入侵、肝毒性药物等原因导致的急性肝功能受损,常表现为肝功能失代偿和凝血功能障碍[2]。具有病情不稳定、发展快及致死率高等特征,其发病原因复杂,临床治疗难度较高[3]。近年来,多数学者发现,在肝衰竭未出现前对肝炎患者进行有效治疗及预测具有重要意义,能有效降低发病率。血浆二胺氧化酶(diamine oxidase,DOA)水平是存在于小肠黏膜或纤毛上皮细胞中的催化二胺细胞内酶,能反映肠道屏障功能、肠壁通透性和疾病的进展[4]。肝衰竭患者存在肠道菌结构和功能的紊乱。有学者表示,肠道菌群是维持肠道微生态系统稳定性的重要组成部分,而慢性肝病患者由于肠道微生态改变,易加重肝脏损伤。因此,本研究主要对慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期患者血浆DOA与肠道菌群进行探讨,并分析其相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1月至2020年2月收入我院的慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期患者72例作观察组;男51例,女21例;年龄43.21～58.72岁,平均年龄(50.81±3.56)岁;病程1～13年,平均病程(6.28±2.82)年;纳入标准:(1)符合“2019年亚太肝病学会共识建议:慢加急性肝衰竭管理”[5]中慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期的相关诊断标准;(2)血清乙型肝炎表面抗原≥6个月;(3)总胆红素≥85μmol/L;排除标准:(1)合并其他嗜肝病毒感染;(2)存在肝脏疾病史;(3)女性患者处于妊娠或哺乳期;(4)合并血液系统疾病或免疫功能减退。选取同期体检的健康人64例作对照组;男46例,女18例;年龄43.64～58.81岁,平均年龄(50.94±3.64)岁;纳入标准:(1)甲肝、乙肝及丙肝等肝病毒标志物均为阴性;(2)肝功能正常;排除标准:(1)合并心肾等重要脏器器质性病变;(2)伴有恶性肿瘤;(3)存在胃肠道疾病。两组患者上述一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院医学伦理会审核并通过,患者知情并签订同意书。

1.2研究方法及观察指标 标本采集:血浆DOA:于第二天清晨抽取观察组及对照组空腹静脉血5ml,送至检验科离心分层,取血清,保存备用。根据酶联免疫法检测血浆DOA。方法:准备试剂,样品和标准品,加入准备好的样品和标准品,37℃反应30min,洗板5次,加入酶标试剂,37℃反应30min,洗板5次,加入显色液A、B,37℃反应10min,加入终止液,15min内读取吸光度值并计算样品浓度。

肠道菌群:嘱所有研究对象留取2份新鲜粪便标本。将新鲜粪便放入培养基,在37℃环境中增值24h后,可观察细菌种类及总数。根据生物分类学分别在门和属[6]的水平上绘制菌群组成表,了解样本中含有何种微生物及各微生物的相对丰度[7]。生物分类学中门隶于界,属隶于科,近缘的种归合为属,相对丰度指群落内物种数目的多少。

2 结果

2.1血浆DOA水平比较 观察组血浆DOA水平高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 血浆DOA水平比较

2.2门属水平上肠道菌群的相对丰度 在门水平上,两组患者最大丰度菌种分别为厚璧菌、放线菌、拟杆菌及变型杆菌。观察组较对照组相比厚壁菌相对丰度降低,拟杆菌及放线菌相对丰度增加;在属水平上,发现不明肠杆菌科、韦荣球菌、链球菌、肠球菌及乳酸菌丰度显著增加。见表2。

表2 门属水平上肠道菌群的相对丰度

2.3肠道菌群丰度血浆DOA相关性分析 本研究将门、属水平肠道差异菌群与血浆DOA水平进行相关分析,得到血浆DOA水平与链球菌(r=0.642,P<0.001)、韦荣球菌(r=0.412,P<0.001)相对丰度呈正相关。见图1、图2。

3 讨论

慢性急性肝衰竭是慢性肝病基础上出现的急性肝功能失代偿[8]。肝衰竭是疾病进展较为严重的情况,肝衰竭前期是指慢性乙肝患者中,高胆红素血症和凝血功能障碍未达到肝衰竭诊断标准[9]。慢性疾病肝衰竭前期是指慢性乙肝已进展至肝衰竭过程中的前期阶段。近年来,有研究表明肠道微生物在慢性乙肝及某些肝病中发挥重要作用,能参与疾病的发展与转归[10]。肠道吸收物质的某些物质可影响肝功能,且转运物质在毛细血管中极易扩散,直接影响肠壁通透性和肠道屏障功能。

血浆DOA可通过抑制细胞膜脂质过氧化反应从而对肠道粘膜的增值进行调控,故可作为直接反应肠道屏障功能的敏感指标[11]。而有学者认为,血浆DOA水平能直接反应慢性急性乙型肝炎肝衰竭前期患者的病情严重程度[12]。本研究结果示,观察组血浆DOA水平高于对照组,说明慢性急性乙型肝炎肝衰竭前期患者存在肠道粘膜屏障功能受损,肠壁通透性增加情况,提示血浆DOA水平与患者病情严重程度有关。肠道微生物是一个多样化生态系统,肠道菌群变化可直接影响机体代谢,增加患病率。而肠道粘膜屏障功能及肠壁通透性改变易导致肠道内微生物及其代谢产物产生易位入血,引起肝损伤[13]。本研究结果示,在门水平上,观察组较对照组相比厚壁菌相对丰度降低,拟杆菌及放线菌相对丰度增加;在属水平上,不明肠杆菌科、韦荣球菌、链球菌、肠球菌及乳酸菌丰度显著增加,说明慢性急性乙型肝炎肝衰竭前期患者肠道菌群构成与物种发生改变。肠道屏障功能是肠道所具有的特定功能,能阻止肠道内细菌及其分解产物经肠壁逸至体内[14]。有研究表示,正常情况下,肠道内优势菌群能增强肠道屏障,但慢性急性乙型肝炎肝衰竭前期患者由于肠道菌群结构和功能的紊乱,导致肠道内菌群丰都比例倒置,以至某些菌群富集,而某些菌群缺失[15]。本研究将门、属水平肠道差异菌群与血浆DOA水平进行相关分析,得到血浆DOA水平与链球菌、韦荣球菌相对丰度呈正相关。提示慢加急性乙型肝炎肝衰竭常富集的韦荣球菌和链球菌可能导致了肠壁通透性的增加。且血浆DOA能反映肠道屏障功能的受损程度,而肠道功能的改变可影响肝病患者病情,故推测血浆DOA可能参与了疾病的进展,可作为临床评估该病的潜在生物标志物,但其具体机制目前尚不明确,还需大量研究进一步证实。

综上所述,慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期患者血浆DOA水平与病情严重程度有关,且肠道菌群构成与物种均发生改变,其中异常富集的链球菌、韦荣球菌与血浆DOA水平紧密相关。