育龄女性叶酸代谢相关基因位点多态性研究

陈延冰 梁杰 张艳霞

(广东省妇幼保健院， 广东 广州 511440)

《中国出生缺陷防治报告(2012)》中提到，我国出生缺陷发生率高达5.6%，叶酸在出生缺陷的防护起到关键作用。科学合理的叶酸增补，可降低出生缺陷发生率(例如神经管畸形、唐氏综合征、先天性心脏病等)、孕妇贫血、妊娠高血压、早期流产、复发性流产、早产等[1,2]。因此，建议育龄妇女自孕前3个月开始持续增补叶酸。

叶酸匮乏的其一普遍原因是孕妇机体叶酸的利用能力低下。叶酸的利用能力与叶酸相关代谢基因有密切关联[2-6]。具体而言，亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶(methionine synthase reductase，MTRR)在叶酸代谢过程中起到关键作用。MTHFR基因和MTRR基因存在多种基因多态性位点，其基因的多态性会导致酶的生物活性发生改变，进而影响叶酸水平及同型半胱氨酸水平等[3]。本研究旨在利用基因检测技术，通过分析育龄期妇女MTHFR基因的典型突变位点C677T A1298C的多态性分布，筛查出异常的叶酸相关代谢基因，并且进一步筛查出机体叶酸利用障碍的高风险育龄妇女，为其合理增补叶酸提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2020年1 月至 2020年 8 月在广东省妇幼保健院门诊自愿进行叶酸利用能力基因检测的育龄妇女作为研究对象，共计85 998 例，年龄范围19～45 岁，均获得受检者知情同意。

1.2 实验方法

1.2.1 DNA提取 采用乙二胺四乙酸盐(ethyl-enediaminetetraacetic acidm，EDTA)抗凝管抽取受试者3 ml静脉血， 用厦门致善公司基因组DNA试剂盒提取DNA， TE ( Tris- EDTA)缓冲液溶解，调节DNA浓度100 gl。

1.2.2 四色荧光探针(见表1)荧光定量PCR检测MTHFRC677T、A1298C的位点多态性。相关仪器购于美国AB公司，试剂购买于北京六合华大基因科技有限公司。反应结束后在AB ViiA7型荧光定量PCR仪上读取样品孔中的终点荧光。根据荧光信号分析C677T、A1298C基因多态性，利用分析软件(Quant StudioTM Real-Time PCR Software)确定各个样本的基因分型结果。

表1 四色荧光探针

2 结果

MTHFRC677T A1298C基因多态性分布，统计5386例正常育龄妇女MTHFR基因C677T A1298C位点的基因型分布发现，MTHFR基因C677T位点在育龄妇女中的多态性，CC、CT、TT基因型频率分别为53.5%、 37.4%、9.1%(见表1)；MTHFR基因A1298C位点在育龄妇女中的多态性，AA、AC、CC基因型的频率分别为59.7%、35.1%、5.2%(见表2)。

表2 育龄妇女中MTHFR基因C677T位点基因型分布

表3 育龄妇女中MTHFR基因A1298C位点基因型分布

表4 广东地区育龄女性与其他地区育龄女性MTHFR基因型频率比较[例(%)]

位点基因型频率与其他地区女性比较，具有明显的地域差异。其中χ2检验结果显示，8个地区的MTHFR(C677T)基因型分布有统计学差异(P<0.05)，其中CC型琼海地区最高，占61.9%；CT型遵义地区最高，占50.5%；TT型淄博地区最高，占43.6%。8个地区的MTHFR(A1298C)基因型分布有统计学差异(P<0.05)，其中AA型淄博地区最高，占79.0%；AC型南宁地区最高，占37.9%；CC型阳江地区最高，占7.9%，见表3。

3 讨论

MTHFR酶在叶酸代谢过程中起到关键作用。MTHFR基因位点的突变可导致机体叶酸水平的降低及同型半胱氨酸的升高，进而导致出生缺陷、孕妇贫血、妊娠高血压、早期流产、复发性流产、早产等[4-7]。

本研究通过分析育龄妇女MTHFR基因，发现MTHFRC677T位点CC、CT、TT基因型频率分别为53.5%、37.4%、9.1%。TT型所占比例与已知的南宁地区 TT 基因型频率(7.7%)接近[11]， 低于延边、淄博、廊坊地区TT基因型频率(分别为31.1%、43.6%、33.9%)[12-17]。笔者认为，采样人群不同研究地区不同都可能造成研究结果的差异。研究结果与我国神经管畸形患病率北高南低的分布特征基本一致[18]。有研究发现，携带677TT纯合子基因型时其体内MTHFR酶活性仅为45%， 1298AC杂合子基因型其体内MTHFR酶活性为 68%，而(677CT1298AC)复合杂合子基因型个体MTHFR酶活性为41% ，677CT和677TT变异基因型发生较高人群的血清叶酸浓度会显著降低， 同型半胱氨酸水平会升高， 这些改变与巨幼细胞性贫血密切相关[19-23]。

研究结果表明，叶酸代谢相关基因多态性检测可用于直接筛选叶酸利用能力有缺陷的个体，为制定个性化叶酸增补方案， 降低出生缺陷率及实现优生提供科学量化的指导依据。