妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表达水平及其与母婴不良结局的关系

马玉着，陈素玉，刘昱婕

妊娠期糖尿病是孕期女性常见并发症之一，据统计，其发病率为1%～5%，并有逐年增高的趋势[1]。该病以糖脂代谢紊乱等为主要特点，可对孕妇、胎儿及新生儿造成严重危害，已成为威胁母婴健康的社会公共卫生问题[2]。目前，临床上多采用控制饮食、科学运动，必要时配合胰岛素等药物治疗，但仍有部分患者出现不良妊娠结局。因此，探索影响妊娠期糖尿病母婴不良结局的相关风险因素以指导临床早期干预对改善妊娠结局具有非常重要的意义。微小核糖核酸(microRNA，miR)属于小分子非编码RNA，在多种生物学过程中发挥重要作用，已有研究指出[3]，miR表达水平的异常与妊娠期糖尿病的发生密切相关。miR-15a是新发现的与血管生成相关的miR家族成员，有研究[4]表明，miR-15a表达水平变化在2型糖尿病病情发展中起重要作用。但目前关于miR-15a表达水平在妊娠期糖尿病的变化情况及其是否与不良母婴结局相关尚未完全清楚。鉴于此，该研究拟通过检测妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表达水平，并分析其与不良妊娠结局的关系，以为临床诊治提供参考。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取2018年8月～2020年8月中国科学技术大学附属第一医院妇产科收治的妊娠期糖尿病患者143例为实验组，另选取同期孕检健康的124例正常孕妇为对照组。纳入标准：实验组均符合妇产科学(第9版)[5]妊娠期糖尿病的诊断标准，且入院后给予常规治疗(胰岛素控制血糖、科学饮食及运动锻炼等)；对照组均为孕检正常孕妇；两组均自然受孕，孕周≥24周，单胎；均知情同意，自愿参与；患者依从性良好，能配合完成随访。排除标准：伴妊娠期高血压、子痫前期等其他妊娠期合并症者；心肺肝肾等重要脏器功能不全者；妊娠前已存在糖尿病、甲状腺疾病、肾上腺疾病等内分泌系统疾病者；恶性肿瘤者；血液系统疾病、自身免疫性疾病者；精神疾病患者；近期感染性疾病、子宫畸形者；瘢痕子宫；胎盘早剥、前置胎盘、胎位不正者；不良生活习惯如嗜酒、吸烟等。两组受试者年龄、孕周等一般资料见表1，实验组与对照组在孕妇年龄、孕周、孕前体质量指数、生产史方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 一般资料比较

1.2 方法

1.2.1血清miR-15a表达水平检测 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清miR-15a表达水平。实验组于治疗前、对照组于体检时，抽取受试者空腹静脉血5 ml，3 000 r/min离心10 min，分离血清；按照TRIzol试剂盒(美国Invitrogen公司)说明书提取血清总RNA，以紫外分光光度计测量提取RNA的浓度与纯度；参照逆转录试剂盒(TapMan Reverse Transcription Kit试剂盒，北京金福赛生物科技有限公司)将RNA逆转录为cDNA；扩增cDNA，使用荧光定量试剂盒(SYBR Premix Ex Taq，杭州科联美讯生物医药科技有限公司)、实时荧光定量PCR测试仪检测，其中miR-15a引物由上海信帆生物科技有限公司设计，正向引物5′-TAGCAGCACATAATGGTTTGTG-3′，反向引物5′-GCCTCTAACATTGAGACAGC-3′，均设置3复孔，反应体系为50 μl，反应条件为95 ℃10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，共40个循环，以U6作为内参，以2-ΔΔct法计算血清中miR-15a表达水平，见图1A、1B。对比实验组、对照组血清miR-15a表达水平。

图1 RT-PCR检测miR-15a、U6表达水平A: RT-PCR检测miR-15a表达水平；B：RT-PCR检测U6表达水平

1.2.2母婴不良结局判断 两组均随访至分娩结束，观察母婴结局，其中母体不良结局包括流产、胎膜早破、羊水过多、产后出血、产后感染等；围生儿不良结局包括早产儿、巨大儿、胎儿窘迫、死胎、新生儿窒息、新生儿呼吸窘迫综合征、新生儿低血糖等。对比实验组、对照组母婴不良结局发生情况。

1.2.3关系分析 整理可能影响妊娠期糖尿病患者母婴不良结局的相关因素，如年龄、孕前体质量指数、不良孕产史(既往妊娠胎儿畸形、停育、死胎、死产及产后大出血等)、生产史、血糖控制情况(血糖控制在正常范围为控制良好，否则为控制不良)、血清miR-15a表达水平等，将以上指标设为自变量，另将母婴不良结局设为因变量，赋值(表2)，进行多因素Logistic回归性分析。分析miR-15a表达水平与妊娠期糖尿病患者母体不良结局、围生儿不良结局的关系：比值比(OR值)、95%可信区间(95%CI)。

表2 指标赋值情况

1.3 统计学处理数据分析采用SPSS 24.0软件，计量资料以表示，采用t检验进行比较；计数资料采用χ2检验，若理论频数为1～5，则校正卡方值，理论频数<1则用Fisher精确检验；血清miR-15a表达水平与妊娠期糖尿病患者母婴不良结局的关系分析采用多因素Logistic回归性分析法，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清miR-15a表达水平比较实验组血清miR-15a表达水平(3.78±0.71)高于对照组(1.69±0.32)，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 两组母婴不良结局发生情况比较实验组流产、胎膜早破、羊水过多、产后出血、产后感染、早产儿、巨大儿、胎儿窘迫、新生儿窒息、新生儿呼吸窘迫综合征、新生儿低血糖发生率及母体、围生儿不良结局总发生率均高于对照组(P<0.05)，实验组死胎发生率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表3、4。

表3 两组母体不良结局发生情况[n(%)]

表4 两组围生儿不良结局发生情况[n(%)]

2.3 血清miR-15a表达水平与妊娠期糖尿病患者母体不良结局的关系母体结局不良组年龄>35岁、孕前体质量指数≥24.0 kg/m2、不良孕产史、血糖控制不良占比及血清miR-15a表达水平与母体结局良好组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，以上均是妊娠期糖尿病患者母体不良结局的危险因素(P<0.05)，见表5、6。

表5 可能影响妊娠期糖尿病患者母体不良结局的因素分析[n(%)]

表6 妊娠期糖尿病患者母体不良结局的危险因素分析

2.4 血清miR-15a表达水平与妊娠期糖尿病患者围生儿不良结局的关系围生儿结局不良组年龄>35岁、孕前体质量指数≥24.0 kg/m2、不良孕产史、血糖控制不良占比及血清miR-15a表达水平与围生儿结局良好组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，以上均是妊娠期糖尿病患者围生儿不良结局的危险因素(P<0.05)，见表7、8。

表7 可能影响妊娠期糖尿病患者围生儿不良结局的因素分析[n(%)]

表8 妊娠期糖尿病患者围生儿不良结局的危险因素分析

3 讨论

妊娠期糖尿病是威胁孕妇及围生产儿健康的主要妊娠合并症，经饮食、运动及药物积极干预后，多数患者血糖水平能够得到有效控制，可获得良好的母儿结局，但有部分患者即使经治疗后血糖控制良好，其发生不良妊娠结局的风险仍较高。本研究中，实验组母体与围生儿不良结局发生率均较对照组高，此与Kim et al[6]研究结果基本符合，证实了妊娠期糖尿病患者母婴不良结局发生风险显著增加。因此，寻找能够有效评估妊娠期糖尿病母婴结局的相关生物学指标以指导临床工作对减少母婴不良结局的发生很有必要。

本研究结果显示，实验组血清miR-15a表达水平较对照组高，提示妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表达水平异常升高。miR-15a位于人染色体13q14，为miR重要类型，已有研究[7-8]表明，miR-15a在2型糖尿病、糖尿病性视网膜病变中表达异常。另有研究[9]表明，在高糖环境下，可刺激苗勒细胞过表达miR-15a，参与糖尿病发生、发展进程。刘林平 等[10]研究显示，单纯白内障患者血清中miR-15a表达水平低于2型糖尿病伴白内障者、非增生性糖尿病视网膜病变者、增生性糖尿病视网膜病变者，进一步说明miR-15a可能与糖尿病及其相关并发症的发生有关。此外，有研究[11]显示，miR-15a表达可对胰岛素的分泌与敏感性产生一定的影响。miR-15a表达水平异常与糖尿病的发生存在一定的相关性，结合本研究结果，表明血清miR-15a表达水平可能参与了妊娠期糖尿病的发病进程。

另本研究结果表明，母体结局不良组与围生儿结局不良组血清miR-15a表达水平分别高于母体结局良好组、围生儿结局良好组，且多因素分析显示血清miR-15a表达水平是妊娠期糖尿病母婴不良结局的影响因素，提示血清miR-15a表达水平与妊娠期糖尿病母婴不良结局的发生关系密切。相关研究[12]报道，部分miR与妊娠丢失密切相关；另有研究[13]指出，miR-222表达水平升高可引起妊娠期糖尿病患者新生儿早产、病理性黄疸，以上进一步说明miR可能与新生儿不良结局存在一定的关系。有研究[14]表明，miR-15a与糖尿病的发生相关，可影响血糖代谢与胰岛素抵抗等。妊娠期糖尿病患者miR-15a表达水平升高，可影响母体血糖调节，促进妊娠期糖尿病进展，加重母体糖代谢紊乱，则可增加母婴不良结局发生风险。此外，本研究中孕妇年龄、孕前体质量指数、不良孕产史、血糖控制情况亦是妊娠期糖尿病患者母婴不良结局的影响因素，此可能是因高龄产妇生育能力下降，而孕前体质量指数过高易引起肥胖，加重糖脂代谢紊乱，另既往不良孕产史可增加其精神与心理压力，此外，若患者血糖控制不佳，则母体长期高血糖环境可诱发不良妊娠结局。

综上，妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表达水平高于正常孕妇，母婴不良妊娠结局发生率明显增加，且血清miR-15a表达水平变化与妊娠期糖尿病母婴不良妊娠结局的发生密切相关，可增加其发生风险。