结核抗体对活动性肺结核患者的诊断实验研究

魏君，项倩

（赤壁市人民医院，湖北 咸宁 437300）

0 引言

肺结核是肺部感染结核分枝杆菌的一种慢性传染性疾病，全球发病率和死亡率都比较高[1]。根据临床特点可以将肺结核分为原发性肺结核、血行播散性肺结核和继发性肺结核[2]。不同类型的肺结核具有共同的临床表现即：咳嗽、咯血、低热、全身倦怠乏力，浑身酸痛等。一直以来，寻找快速准确的诊断方法是临床工作的难点，常用的肺结核检测方法是痰涂片，操作简单，但结核分枝杆菌培养周期长且对于一些少痰或无痰的患者容易出现漏诊的现象，加上无法辨别活菌或死菌，导致特异性差且假阴性率比较高[3]。基因诊断技术PCR由于实验操作条件要求高，对于实验技术条件并不发达的基层来讲不适合此种方法[4]，故寻找敏感、特异、快速、简单的诊断方法对肺结核的诊治具有十分重要的意义。目前临床检测肺结核的方法还包括结核菌素试验（PPD）、血结核多种抗原IgG/LgM抗体蛋白芯片检测技术。本研究对两组患者均行血清结核抗体检测（结核抗体LgG/LgM检测）和结核菌素试验通过检测并计算两种检测方法各自的菌阳肺结核灵敏度、菌阴肺结核灵敏度、假阳性、假阴性、总灵敏度、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值进而比较两种方法对活动性肺结核诊断的价值。现将报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年5月-2016年12月在我院接受治疗肺结核的68例患者作为观察组，男36例，女32例；年龄21～78岁，平均（40.26±13.64）岁。另选取同期在我院接受治疗的其他肺部疾病患者55例作为对照组，男26例，女29例；年龄22～76岁，平均（41.36±12.67）岁；其中慢性支气管炎21例，急性上呼吸道感染16例，支气管肺炎11例，尘肺4例，肺癌3例。观察组患者均经细菌学或组织病理学确诊为活动性肺结核，并且临床抗结核治疗有效。对照组患者影像学检查和实验室检查均不支持肺结核诊断。入选条件包括：所有患者均进行胸部X线摄片，并按《肺结核诊断和治疗指南》中的肺结核诊断标准进行诊断。所有患者排除合并全身严重感染者、严重心血管和脑疾病者、自身免疫缺陷性疾病、正在接受放化疗治疗者、精神异常、恶性肿瘤、妊娠及哺乳期者。所有患者知情同意并签署知情同意书，患者依从性较好，患者病历资料完整。本研究通过医院伦理会批准。两组患者年龄性别等基线资料经过比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 检测方法

所有患者均进行PPD试验及结核抗体LgG/LgM检测。PPD试剂选取成都生物制品研究所生产的结核菌素纯蛋白衍生物（TB-PPD），取0.5mL的PPD试剂进行左侧臂掌侧皮内注射，每1mL含有5 IU PPD，经注射72h后检查注射部位变化情况并测量硬结大小，无皮肤硬结出现或硬结平均直径小于5mm则为PPD皮试阴性，若硬结直径为5～9mm评定为一般阳性，硬结直径为10～19mm评定为中度阳性，20mm或以上以及任何局部出现水泡、出血、坏死、溃破或淋巴管炎等则评定为强阳性。

结核抗体LgG/LgM试剂选取北京蓝谱生物技术开发有限公司，批号为（国械注进）20143405184操作步骤：①使用前将样品放置在室温条件下；②打开密封的铝箔袋儿，将检测卡取出平放在水平桌面上；③在检测卡上标记患者样本；④用加样器取60μl血清滴入样本孔，再滴加一滴样本稀释液，保证操作的整个过程中无气泡的产生；⑤10min之后判读结果；⑥结果判读，在质控线c出现的条件下，当仅有一条T1反应线出现时，说明结核抗体LgG呈现阳性，只有T2反应线出现时说明结核抗体LgM为阳性，当T1、T2反应线均出现时说明结核抗体LgG、LgM均呈现阳性。如果只有一条质控线c出现时，说明没有检测到结核分枝杆菌其为阴性。

痰涂片抗酸染色培养基购自广州市西塔生物科技有限公司，操作步骤严格参照《结核病诊断实验室检测规范》。

1.3 统计学方法

数据统计分析采用SPSS 19.0进行处理，所有计量指标均采用均数±标准差（）进行统计描述，灵敏度和特异度等计数资料比较采用两组独立样本的χ2检验，年龄等计量资料比较采用两组独立样本的t检验，当P＜0.05：表示具有统计学差异。

2 结果

2.1 两种方法检测结果、灵敏度和特异度比较

结核抗体LgG/LgM检测菌阳肺结核灵敏度为77.42%，菌阴肺结核灵敏度为59.46%。诊断活动性肺结核中假阳性22例，假阴性7例，总灵敏度为67.64%，特异性为96.36%准确性为57.35%，阳性预测值为35.29%，阴性预测值为22.06%。结核菌素检测菌阳肺结核灵敏度为50.00%，菌阴肺结核灵敏度为52.94%。诊断活动性肺结核中假阳性18例，假阴性17例，总灵敏度为51.47%，特异性为89.09%，准确性为48.53%（33/68），阳性预测值为25.00%，阴性预测值为23.53%。结核抗体LgG/LgM检测的灵敏度和特异度高于结核抗体检测，差异有统计学意义（P＜0.05），详见表1、表2。

表1 两种方法检测结果

表2 两种检测方法的灵敏度和特异度比较

3 讨论

结核是感染结核分枝杆菌所致的全球传染性最高、历史最悠久、后果最严重的一种慢性疾病，具有较高的致死率，严重威胁着患者的生命安全。肺结核指患者肺部感染结核分枝杆菌，该病菌经过呼吸道传播，严重情况下可引起全身各脏器病变，传染性和致死性都比较高。早期诊断对于控制病情减低死亡率具有非常重要的意义，目前诊断肺结核常用的办法主要有分子生物学检测法、细胞学检测法、免疫学检测法[5]。痰涂片及培养因其操作比较简单是一种常用的检测方法，但是结核分枝杆菌培养周期比较长，浪费时间，且诊断敏感性不高，加上受到取痰效果的影响，一些患者少痰甚至无痰会容易漏诊。因此，肺结核诊断方式探索改进成为结核病诊治重点。

结核菌素试验（PPD）相对价廉且操作简单，可通过皮肤局部反应检测是否感染过结核杆菌，检测灵敏度比痰涂片高。凡是感染结核分枝杆菌的患者机体就会刺激致敏淋巴细胞再次识别抗原。结核菌素试验提供相同的抗原刺激致敏淋巴细胞，其在48～72h会发生局部炎性反应，根据硬结大小判断阳性率[6]。本研究结果显示结核菌素检测菌阳肺结核灵敏度为50%，菌阴肺结核灵敏度为52.94%，诊断活动性肺结核中假阳性18例，假阴性17例，总敏感度为51.47%，特异性为89.09%，准确性为48.53%，阳性预测值为25%，阴性预测值为23.53%。结果表明经PPD试验检测在敏感度、特异性等方面较低，易出现假阳性或假阴性的情况，由于PPD试验受较多因素影响，例如重症结核、机体免疫功能水平等，患者免疫力在受到功能损害以后会削弱PPD试验的反应，导致皮试结果无反应或反应弱，因此本实验结果中出现假阴性的原因可能是由于小儿老年人免疫功能低下或者是免疫功能缺陷所致。另外，本研究中出现较多假阳性，由于非结核分枝杆菌抗原或卡介苗与PPD试剂含有的蛋白衍生物抗原具有相同成分，若之前有过结核菌感染史或接种过卡介苗的非结核患者人群，在试验过程中也容易出现交叉反应，故出现假阳性其原因是可能患者进行过卡介苗接种或曾经患过结核病的治愈者。

血清结核抗体检测（TB-Ab）具有特异性和灵敏度高的特点，可直接反应机体相应抗体水平。该检测分为双抗体夹心酶联免疫吸附法、免疫色谱法（DIGFA）、免疫胶体层析法，其主要区别在于抗原表位的选择以及抗原的纯化水平。一般选取的结核菌为细胞壁多糖结核菌LAM、基因工程表达结核分枝杆菌抗原、38kDa、16kDa蛋白。抗体主要包括结核抗体LgG/LgM。一般情况下只检测LgG而本研究也检测了LgM能够提高其阳性检出率。结核杆菌的发生发展转归与免疫活动有密切的关系。当机体再次感染结核分枝杆菌时会刺激浆细胞产生B淋巴细胞，B淋巴细胞立刻分泌免疫球蛋白LgG/LgM，进而能够反映患者体内结核的活动情况。本实验结果显示结核抗体LgG/LgM检测菌阳肺结核灵敏度为77.42%，显著高于PPD实验中菌阳肺结核灵敏度50%（P＜0.05）菌阴肺结核灵敏度为59.46%同样显著高于PPD检测结果52.29%（P＜0.05）活动性肺结核中假阳性22例，假阴性7例，总灵敏度为67.64%，特异度为96.36%明显高于PPD实验中总灵敏度51.47%和特异度89.09%（P＜0.05）且准确性为57.35%（39/68），阳性预测值为35.29%（24/68），阴性预测值为22.06%（15/68）。结果可看出相对于PPD检测，结核抗体LgG/LgM检测具有更高的总灵敏度和特异性，具有更高的临床诊断价值。其原因可能是当患者感染肺结核后，机体体液免疫增强，细胞免疫降低。而PPD试验检测的是机体细胞免疫，受患者病程长短、机体免疫程度等方面影响较大，病程长则检出率较高，而结核抗体LgG/LgM检测机体体液免疫，人为因素干扰少，与非结核分枝杆菌不会有交叉反应，能相对客观的反应机体抗体水平，特异性及准确率较高。

综上所述，结核抗体LgG/LgM检测灵敏度和特异度高于结核菌素检测试验。本研究的创新之处在于结合肺结核检测的灵敏度、特异度、假阳性、假阴性、阳性预测值以及阴性预测值等多项观察指标对比分析了结核菌素试验以及结核抗体检测试验对肺结核检测的灵敏度以及特异度使实验结果更加客观。为肺结核的诊断提供了更加简单、快速、敏感、科学的方法和依据。