miR-106a、miR-124表达水平与分化型甲状腺癌发生发展及远期生存率的关系

何巧灵　刘德伟　何美男　张佳露　龙娟　邹梦晨

【摘要】 目的：分析miR-106a、miR-124表達水平与分化型甲状腺癌发生发展及远期生存率的关系。方法：选取2016年1-6月广州市增城区中心医院收治的62例分化型甲状腺癌患者，行颈淋巴结穿刺和甲状腺癌根治手术，检测癌组织及癌旁组织的miR-106a、miR-124表达水平，分析miR-106a、miR-124表达水平与临床病理特征的相关性和临床预后的关系。结果：癌组织中miR-106a表达量高于癌旁正常组织，miR-124表达量显著低于癌旁正常组织（P<0.05）;miR-106a在TNM分期Ⅲ期、淋巴转移、肿瘤直径>1 cm及被膜侵犯患者中呈较高表达，而miR-124在TNM分期Ⅲ期、淋巴转移、肿瘤直径>1 cm及被膜侵犯患者中呈较低表达（P<0.05）;miR-106a高表达患者5年生存率显著低于低表达者，miR-124高表达患者5年生存率显著高于高表达者（P<0.05）。结论：miR-106a、miR-124表达水平与分化型甲状腺癌患者临床分期和淋巴转移有关，其水平表达与患者5年内生存率密切相关。

【关键词】 miR-106a miR-124 甲状腺癌

The Relationship between the Expression Levels of miR-106a and miR-124 and the Development and Long-term Survival Rate of Differentiated Thyroid Cancer/HE Qiaoling， LIU Dewei， HE Meinan， ZHANG Jialu， LONG Juan， ZOU Mengchen. //Medical Innovation of China， 2022， 19（11）： -116

[Abstract] Objective： To analyze the relationship between the expression levels of miR-106a and miR-124 and the occurrence， development and long-term survival rate of differentiated thyroid cancer. Method： Selected 62 patients with differentiated thyroid cancer admitted to Central Hospital of Zengcheng District from January 2016 to June 2016， underwent cervical lymph node puncture and radical thyroid cancer surgery to detect the expression levels of miR-106a and miR-124 in cancerous tissues and adjacent tissues， the correlation between the expression levels of miR-106a and miR-124 and clinicopathological characteristics， and the relationship between their expression and clinical prognosis were analyzed. Result： The expression level of miR-106a in cancer tissues was higher than that in adjacent normal tissues， and the expression level of miR-124 was significantly lower than that in adjacent normal tissues （P<0.05）; miR-106a was highly expressed in patients with TNM stage Ⅲ， lymphatic metastasis， tumor diameter >1 cm and membranous invasion， while miR-124 was low expressed in patients with TNM stage Ⅲ， lymphatic metastasis， tumor diameter >1 cm and membranous invasion （P<0.05）. The 5-year survival rate of patients with high expression of miR-106a was significantly lower than that of patients with low expression of miR-124， and the 5-year survival rate of patients with high expression of miR-124 was significantly higher than that of patients with high expression of miR-124 （P<0.05）. Conclusion： The expression levels of miR-106a and miR-124 are related to clinical stage and lymphatic metastasis in patients with differentiated thyroid cancer， and the level of miR-106A and miR-124 is closely related to 5-year survival rate of patients.

[Key words] miR-106a miR-124 Thyroid cancer

First-author’s address： Central Hospital of Zengcheng District， Guangzhou City， Guangzhou 511300， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.11.028

分化型甲状腺癌是主要的甲状腺癌类类型，患者在确诊时多伴淋巴结转移，是影响患者术后复发和预后的重要原因，因此，了解分化型甲状腺癌淋巴结组织病理特征，对于早期诊断具有重要意义[1-2]。以往研究表明，微RNA（micro RNA，miR）是一类小分子RNA，能够调控肿瘤的发生与发展，在多种恶性肿瘤的发生、发展过程中起到原癌基因或抑癌基因的作用。微小RNA-106a（miR-106a）和微小RNA-124（miR-124）可通过调节肿瘤细胞促凋亡基因或凋亡抑制基因的活性，参与肿瘤细胞的生物学过程，在乳腺癌、肝癌等多种恶性肿瘤中表达异常，但在分化型甲状腺癌患者预后中的相关机制尚不清楚[3-4]。基于此，本次研究通过检测miR-106a和miR-124表达与分化型甲状腺癌临床分期、淋巴结转移、肿瘤大小、被膜浸润等临床病理特征，分析其在分化型甲状腺癌发生与发展的作用，及预后的关系，旨在为临床分化型甲状腺癌早期诊断提供指导依据，以期改善患者预后。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取广州市增城区中心医院2016年1-6月收治62例分化型甲状腺癌患者，其中乳头状甲状腺癌35例、滤泡状甲状腺癌25例、乳头状甲状腺癌合并滤泡状癌2例，取患者癌组织标本62份和癌旁组织标本62份。其中男38例，女24例;年龄25～72岁，平均（39.47±5.26）岁。（1）纳入标准：①符合WHO甲状腺肿瘤分类及诊断标准[5];②术前未进行相关治疗;③患者临床资料完整。（2）排除标准：①合并炎症肝肾功能障碍者;②合并内分泌系统、血液系统或代谢性相关疾病者;③合并其他恶性肿瘤者;④拒绝或不配合研究患者。患者或家属知情且签署知情同意书。本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 miR-106a检测 取甲状腺癌组织、癌旁组织常规切片组织15 μm两张，置于离心管中，以二甲苯脱蜡、无水乙醇洗涤、干燥、蛋白酶K进行消化，按照EASYspin1131试剂盒说明书进行操作提取RNA。mircoRNA提取后使用50 μL DEPC水进行稀释，于-80 ℃冻存待用。以0.15 μL 100 mm dNTPs，1 μL LMultiscribeTM逆转录酶，1.5 μL×10逆转录Buffer，0.19 μL RNase抑制剂，3 μL反转录引物5 μL RNA模板，4.16 μL无RNA酶水逆转录体系将RNA逆转录为cDNA。反应条件为16 ℃，30 min;42 ℃，30 min;85 ℃，5 min，反应产物cDNA置于-20 ℃冻存待用。然后采用qRT-PCR检测miR-106a，使用miR-106a的探针采用Taqman MicroRNA assays，检测仪器为ABI实时定量PCR仪7500，以6B作为内参。PCR条件为：50 ℃，2 min;95 ℃，10 min;95 ℃，15 min;60 ℃，1 min;35个循环。做3个复孔，取平均值作为Ct值。miR-106a的表达采用2-ΔΔCt表示，Ct=CtmiR-106a-CtU6B。

1.2.2 miR-124检测 取甲状腺癌组织、癌旁组织及转染后细胞，按体积比1︰5加入RIPA裂解液，按照miRNA分離提取试剂盒所提供的步骤提取miRNA，测定所提取RNA的浓度及纯度，使用PCR仪将其反转录为cDNA，反应条件为：25 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。以cDNA为模板，采用RT-qPCR检测miR-124，根据Bi-Rad公司RT-qPCR试剂盒操作说明书加入相关试剂及引物，以U6为内参，在ABI-7300实时荧光定量仪上进行PCR扩增。反应条件为：95 ℃ 3 min，变性95 ℃ 12 s，退火62 ℃ 40 s，共40个循环。实验结果采用2-ΔΔCt法进行表达量相对定量分析。

1.3 观察指标 （1）检测癌组织及癌旁组织中miR-106a、miR-124表达情况;（2）以癌组织中平均表达量为分界值，将miR-106a、miR-124分为高表达和低表达，比较不同病理分期和淋巴转移患者miR-106a、miR-124表达分布情况，探究其表达水平与临床病理分期和淋巴结转移的关系;（3）随访5年内分化型甲状腺癌患者生存情况，比较不同miR-106a、miR-124表达患者生存率情况。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0分析数据，计数资料采用字2检验，以率（%）来表示;计量资料采取t检验，以（x±s）表示;绘制Kaplan-Meier生存曲线评估预后。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同病理组织中miR-106a、miR-124表达水平比较 分化型甲状腺癌组织中miR-106a表达量高于癌旁正常组织，miR-124表达量显著低于癌旁正常组织，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 miR-106a、miR-124表达与临床病理分期和淋巴结转移的关系 癌组织中miR-106a<0.73为正常表达，0.73～1.15为低表达，>1.15为高表达;miR-124

>3.21为正常表达，1.95～3.21为高表达，<1.95为低表达。miR-106a在TNM分期Ⅲ期、淋巴转移、肿瘤直径>1 cm及被膜侵犯患者中呈较高表达，而miR-124在TNM分期Ⅲ期、淋巴转移、肿瘤直径>1 cm及被膜侵犯患者中呈较低表达（P<0.05），见表2。

2.3 miR-106a、miR-124高表達和低表达患者5年生存率的比较 miR-106a高表达患者5年生存率显著低于低表达，miR-124高表达患者5年生存率显著高于高表达（P<0.05），见表3。

3 讨论

近年来，随着基因检测技术在各疾病领域应用的发展，miRNAs在恶性肿瘤诊断中的价值被逐渐关注。mircoRNA是一类内源性非编码RNA，可通过与其目的mRNA结合，降解mRNA，还可抑制mRNA转录、翻译，从而抑制靶基因的表达[6-7]。miRNAs与多种原癌基因的激活或抑癌基因的抑制有关，在细胞的增殖、分化、凋亡和肿瘤发生过程中起着重要的作用。另外，组织中miRNAs结构稳定、易获取，其作为恶性肿瘤潜在生物标志物应用于临床诊断和治疗的想法应运而生[8-9]。本次研究发现miR-106a和miR-124在分化型甲状腺癌不同病理组织中呈差异性表达，且其水平表达与临床分期、淋巴转移密切相关，是影响预后生存的重要影响因素。

在甲状腺癌相关机制研究中miRNA所发挥的作用的研究发现，甲状腺癌的发生与多个基因的异常突变或重排有关，可通过激活不同的信号通路从而促进癌症的发生发展及侵袭转移[10-11]。miR-106a具有典型的原癌基因活性，可抑制很多下游靶基因的转录和翻译，进而促进肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移等恶性生物学行为，可通过抑制转换生长因子受β-1和抗转移因子TGF-BR2的表达，从而促进癌细胞的转移和浸润，上调的miR-106a可促进甲状腺癌细胞的增殖[12]。本研究结果显示，miR-106a与淋巴结的转移相关，发生淋巴结转移患者miR-106a的表达较高，其临床分期越高，miR-106a的表达也越高，这提示miR-106a与分化型甲状腺癌发病和转移有关，因此，认为miR-106a可能影响肿瘤的预后[13-14]。因此，miR-106a水平表达与分化型甲状腺癌患者发生、发展密切相关。随访5年结果显示，miR-106a高表达组患者5年生存率显著低于低表达者，说明其水平表达对于分化型甲状腺癌患者预后具有重要参考意义。

miR-124是最新发现的抑癌基因，在哺乳动物的神经系统发育过程中，其碱基序列具有重要的生物学功能。进一步深入研究发现，其在多种肿瘤组织中（肝癌、乳腺癌、宫颈癌）存在不同程度的表达降低，但当抑癌基因功能，可见miR-124作为一种肿瘤抑制性miRNA，在肿瘤发生、发展及侵袭转移中发挥重要作用[15-16]。研究通过检测miR-124在甲状腺癌组织及癌旁组织的表达情况，结果发现，甲状腺癌组织中miR-124表达水平明显低于癌旁组织，且随着临床分期、肿瘤直径增加及淋巴结转移患者miR-124表达下调，miR-124在甲状腺癌不同病理中呈差异性表达，且随访5年发现，miR-124高表达组患者5年生存率显著高于低表达者，这提示下调的miR-124可能参与甲状腺瘤变、侵袭转移的过程，与分化型甲状腺癌的发生、发展密切相关[17-18]。以往文献[19-20]研究也证实，miR-124作为抑癌基因可参与抑制乳头状甲状腺癌的恶性生物学活性，上调的miR-124可以抑制K1细胞的增殖、侵袭转移，并可通过与靶基因作用，抑制靶基因mRNA的翻译表达，降低蛋白产物，参与恶性肿瘤病变过程。由此可知，miRNA基因改变导致MAPK、Wnt/J3.Catenin等信号通路被异常激活，从而导致抑癌基因的表达下调，进而促肿瘤形成、侵袭、转移及复发。这与相关研究中分化型甲状腺癌分化与Wnt/p-Catenin信号通路的激活有关的报道一致[21-22]。但由于本次研究样本量较小，且仅统计了5年内分化型甲状腺癌患者生存情况，对于其远期生存的影响方面的作用存在一定缺陷，需扩大样本进行更深入、更长远的研究，但miRNAs在检验医学方面具有巨大的潜力值得肯定。

综上所述，组织中miR-106a、miR-124表达水平与分化型甲状腺癌发生发展密切相关，miR-106a、miR-124表达水平与患者5年内生存率密切相关，可通过检测其水平指导临床治疗，对临床分化型甲状腺癌患者预后改善具有重要意义。

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（收稿日期：2021-10-27） （本文编辑：张爽）