养阴祛湿化瘀方对高尿酸性肾病大鼠肾功能的影响*

胡苗青，周珂，梁恩军，欧阳美萍

1.湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙 410005； 2.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208

高尿酸血症是由于人体内嘌呤代谢异常，引起血尿酸生成过多或排泄减少所致。血中尿酸盐呈过度饱和状态时可沉积于肾脏，使肾脏产生一系列的炎症反应，引起肾间质损害，形成高尿酸性肾病[1]。近些年，高尿酸血症的发病率逐年上升，且日趋年轻化，是目前居于糖尿病之后的代谢性疾病。本研究拟通过观察不同剂量养阴祛湿化瘀方对高尿酸性肾病大鼠肾功能及肾脏病理形态学影响，为中药治疗高尿酸性肾病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物SPF级SD雄性大鼠54只，体质量220～250 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物质量合格证编号：ZS-202006160011，饲养于湖南中医药大学动物屏障环境内。本实验通过湖南中医药大学医学实验动物伦理委员会审查，伦理审批号：LLBH-202006140003。

1.2 实验药物养阴祛湿化瘀方，药物组成：墨旱莲15 g，山茱萸15 g，土茯苓30 g，蚕砂10 g，白术 15 g，薏苡仁30 g，丹参15 g，当归10 g，大黄5 g，地龙10 g，川牛膝15 g，黄芪30 g。购于湖南中医药大学第一附属医院中药房。别嘌醇片(合肥久联制药有限公司，批号：H34021248，每片100 mg)；腺嘌呤(批号：A108805)，氧嗪酸钾(批号：P137112)，羟甲基纤维素钠(批号：C104985)，均购于阿拉丁试剂有限公司。

1.3 仪器与试剂尿蛋白检测试剂盒、尿酸检测试剂盒、肌酐检测试剂盒、尿素检测试剂均购自于宁波瑞源生物科技有限公司；苏木素-伊红染液购自于武汉谷歌生物科技有限公司；无水乙醇、二甲苯、氨水、中性树胶购自于国药集团化学试剂有限公司。

离心机(湖南迈克尔实验仪器有限公司，型号：KC-600B)，血生化检测仪(东芝医疗系统株式会社，型号：TBA-FX8)，病理切片机(上海徕卡仪器有限公司，型号：RM2016)，组织摊片(浙江省金华市科迪仪器设备有限公司，型号：KD-P)，光学显微镜(日本尼康，型号：Nikon Eclipse E100)，脱水机、包埋机、冻台均购于武汉俊杰电子有限公司。

1.4 造模与分组将54只SD大鼠随机选取11只为空白组，其余43只为造模组，大鼠适应性喂养1周后开始造模。所有大鼠均给予标准饲料喂养，造模组大鼠予以腺嘌呤100 mg·kg-1联合氧嗪酸钾 1 500 mg·kg-1(溶于1.25%羧甲基纤维素钠悬浮液中)灌胃造模，每天1次，空白组予以等量1.25%羧甲基纤维素钠悬浮液灌胃[2]。连续灌胃2周，随机在空白组与造模组各选取3只，收集24 h尿液，并在最后1次造模灌胃后2 h称体质量后麻醉，下腔静脉采血检测肾功能，造模组大鼠尿蛋白定量与肾功能指标高于空白组，差异具有统计学意义(P<0.05)，表示模型成功。随后将造模成功的40只大鼠按照随机数字表法分为模型组、养阴祛湿化瘀方高剂量组、养阴祛湿化瘀方中剂量组、养阴祛湿化瘀方低剂量组、别嘌醇组，每组各8只。

1.5 给药方法各给药组根据人与大鼠体表面积等效剂量换算法算出相应剂量[3]，养阴祛湿化瘀方高剂量组、养阴祛湿化瘀方中剂量组、养阴祛湿化瘀方低剂量组分别予以养阴祛湿化瘀方37.2 g·kg-1·d-1，18.6 g·kg-1·d-1，9.3 g·kg-1·d-1灌胃，别嘌醇组予以别嘌醇片9.3 mg·kg-1·d-1灌胃，空白组及模型组予以等量生理盐水灌胃，每天1次，每次2 mL，连续灌胃3周。

1.6 观察指标给药最后1次灌胃结束2 h后称体质量，用体积分数10%水合氯醛溶液3.5 mL·kg-1对大鼠进行腹腔麻醉，待其疼痛反射消失后，固定大鼠，打开腹腔，从下腔静脉收集血液，每只大鼠采集血4 mL，用离心机1 500 r·min-1，离心半径 13.5 cm，离心5 min，取上清液即血清，用全自动生化分析仪检测肾功能[尿酸(uric acid，UA)、血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、肌酐(creatinine，Cr)]水平。各组大鼠采血后，立即取出大鼠肾脏，予 9 ng·L-1氯化钠溶液漂洗，滤纸吸干，称重后将其放置于装有 40 ng·L-1多聚甲醛50 mL离心管中固定，24 h后依次将切片逐级酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，切成4 μm的薄片，以HE染色肾组织病理片检查。

2 结果

2.1 各组大鼠一般情况空白组大鼠一般情况可，反应灵敏，精神佳，皮毛浓密，毛色有光泽，摄食饮水正常，大小便正常。模型组大鼠精神萎靡，活动减少，大鼠皮毛干枯无光泽，竖毛，尿量明显增多，大便稀软，抓持抵抗力减弱。经过药物干预后，养阴祛湿化瘀方高剂量组、养阴祛湿化瘀方中剂量组、养阴祛湿化瘀方低剂量组及别嘌醇组大鼠整体一般情况较模型组有所改善。养阴祛湿化瘀方中剂量组在实验结束前1 d死亡1只，未采集标本。

2.2 各组大鼠肾功能变化情况比较模型组大鼠UA、Cr、BUN水平高于空白组，差异具有统计学意义(P<0.05)。各给药组UA水平低于模型组，养阴祛湿化瘀方高剂量组、养阴祛湿化瘀方中剂量组及别嘌醇组Cr水平低于模型组，养阴祛湿化瘀方中剂量组、养阴祛湿化瘀方低剂量组及别嘌醇组BUN水平低于模型组，差异均有统计学意义(P<0.05)；别嘌醇组UA水平低于中药各剂量组，养阴祛湿化瘀方中剂量组UA水平低于养阴祛湿化瘀方高剂量组、养阴祛湿化瘀方低剂量组，养阴祛湿化瘀方中剂量组Cr水平低于养阴祛湿化瘀方高剂量组、养阴祛湿化瘀方低剂量组，养阴祛湿化瘀方中剂量组BUN水平低于养阴祛湿化瘀方高剂量组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠肾功能变化情况比较

2.3 各组大鼠肾脏外观情况通过观察肾脏外观发现，空白组大鼠形态呈红褐色的蚕豆状，大小正常，表面光滑，未见明显异常。模型组较空白组大鼠肾脏外观稍有增大，表面有散在分布的白色小点，切开后可见肾皮质变薄，肾髓质及椎体有少许放射状白线。与模型组比较，养阴祛湿化瘀方中剂量组、养阴祛湿化瘀方高剂量组及别嘌醇组表面散在分布的白色小点减少，养阴祛湿化瘀方中剂量组从外观上看与空白组最接近，而养阴祛湿化瘀方低剂量组与模型组最相似，见图1。

注：A：正常组；B：模型组；C：养阴祛湿化瘀方高剂量组；D：养阴祛湿化瘀方中剂量组；E：养阴祛湿化瘀方低剂量组；F：别嘌醇组

2.4 各组大鼠肾脏组织病理变化情况通过HE染色观察各组大鼠肾脏组织病理学变化可见，空白组大鼠肾脏组织形态结构正常，无尿酸盐结晶，肾小管上皮细胞排列紧密，未见明显炎症。模型组大鼠肾脏组织中可见大量肾小管萎缩，管腔扩张，肾小管内可见尿酸盐晶体沉积，部分管腔内可见坏死组织碎片；间质中可见结缔组织增生，伴有较多炎性细胞浸润，局部形成肉芽肿，可见多核巨细胞。与模型组比较，养阴祛湿化瘀方中剂量组、养阴祛湿化瘀方高剂量组及别嘌醇组在肾小管损伤、尿酸盐晶体沉积、炎性细胞浸润等方面均有不同程度减轻，而养阴祛湿化瘀方低剂量组改善不明显。结果表明，高尿酸性肾病大鼠主要表现为肾小管损伤，养阴祛湿化瘀方可以显著改善肾小管损伤，尤以养阴祛湿化瘀方中剂量组、高剂量组改善最为明显，见图2。

注：A：空白组；B：模型组；C：养阴祛湿化瘀方高剂量组；D：养阴祛湿化瘀方中剂量组；E：养阴祛湿化瘀方低剂量组；F：别嘌醇组

3 讨论

高尿酸性肾病是由于血尿酸生成过多或排泄减少，使血液中尿酸盐呈过饱和状态，尿酸盐结晶沉积于肾脏而引起肾脏损伤类疾病，严重时可发展为肾功能衰竭。高尿酸性肾病的具体发病机制尚未明确，一般认为与尿酸盐阻塞肾小管密切相关。尿酸盐晶体可通过阻塞远端肾小管、肾间质和髓质，引起肾间质炎症及肾脏小血管的损伤，同时肾脏局部产生的氧化应激、炎症反应等，可通过损伤血管内皮功能，使肾脏纤维化加重，甚至走向终末期肾病[4-5]。目前，西医治疗高尿酸性肾病主要通过抑制肝脏黄嘌呤氧化酶的活性以减少尿酸生成，或通过调控肾脏尿酸盐转运体增加尿酸排泄。别嘌呤醇、非布司他、丙磺舒、苯溴马隆等药物是西医治疗高尿酸性肾病的常用药物，前两种药物虽降尿酸作用较强，但长期服用有加重肾脏负担的风险，可导致肾功能不全，而使患者使用受限，同时使用别嘌醇时易发生过敏反应[6]。

高尿酸性肾病属中医学“痛风”“历节”“痹证”“虚劳”等范畴，病因为先天禀赋薄弱，肾元不充，导致蒸化无权；或因饮食不节，嗜食肥甘厚味；或因喜饮酒而少动，使脾胃运化失常，气机不能伸展，湿热内蕴；或因劳倦过度、情志内伤，使肝失疏泄，全身气机不利，影响脾的升清和胃的降浊，导致体内湿浊内生。若迁延日久，使气血津液运行受阻，痰瘀互结，痹阻于肾脏、关节与筋肉，瘀、浊停留日久，郁而化热，进一步耗竭真阴，而产生多种变证[7-8]。程晓霞教授认为，本病常因痰浊、湿热、瘀血等痹阻关节，出现关节红肿热痛的表现[9]。久病损伤肾络，肾气失于气化，湿热下注，化火伤阴，煎熬尿液而出现瘀滞之证；湿热、痰湿日久痹阻肾络，致肾气封藏失职，精微物质下泄而出现蛋白尿、血尿。高彦彬教授认为，湿热瘀毒，损伤关节、筋肉之络脉，可出现关节畸形、肿胀；瘀结肾络，积久致肾劳，失于封藏，精气下泄，而出现尿浊多泡沫；肝肾同源，肾不藏精，肝阴不足，虚风上扰，可出现头目眩晕等；肾开阖失司，小便不利，水湿泛溢，出现水肿[10]。祛湿化瘀养阴方为本院常用经验方，可祛湿化瘀、兼顾滋养肝肾，由土茯苓、薏苡仁、黄芪、白术、蚕砂、丹参、地龙、川牛膝、当归、墨旱莲、山茱萸、大黄等药物组成。方中重用土茯苓、薏苡仁为君药，两药相合能增强祛湿泄浊、除痹之功。臣以黄芪补脾益气，白术健脾、燥湿利水，既补脾气之不足，又祛脾脏之湿邪，蚕砂和胃化湿，三者合用以助君药祛湿泄浊，使湿邪祛而不伤正；鉴于“血行则湿不易留、浊不易滞”理论，方中加丹参、地龙、川牛膝化瘀通络；湿热之邪日久易伤阴，故配合当归、山茱萸、墨旱莲养阴润燥、滋补肝肾；佐以大黄增强化瘀泄浊之力，使得浊邪得清，肾络得通。全方合用，标本兼顾，使祛邪而不伤正。

现代药理研究表明，土茯苓中的黄酮类能通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性，使尿酸排泄增加；落新妇苷能通过减少机体内的活性氧含量，使炎症因子生成减少，从而改善高尿酸性肾病引起的肾损伤[10]。薏苡仁能够促进尿酸排泄，通过增加肾脏血流量改善肾功能，还能调节免疫系统功能，其脂肪油能抗凝、改善糖脂肪代谢及调节血压[11]。黄芪具有抗氧化、抑制免疫及炎症反应、改善肾小球滤过等作用[12]。当归能通过抑制肾小球系膜细胞增殖，改善肾小球硬化，减轻炎症反应[13]。山茱萸可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路，减轻糖尿病肾病引起的病理损伤，改善肾组织纤维化，保护肾脏[14]。丹参能通过抑制肾脏成纤维细胞的增殖，减少脂质过氧化产物丙二醛的产生，从而减少肾间质纤维化的形成[15]。地龙能通过抑制肾小球系膜细胞增殖，从而抑制细胞外基质的集聚，改善炎症反应，改善肾小球硬化[16]。川牛膝提取物能有效改善肾脏纤维化，而且能通过使肾素释放减少，引起肾小球周围血管扩张，使血压下降[17-18]。大黄能减少尿素氮的合成，促成肠道代谢产物的排出，也可通过阻碍机体氮化磷酸化，改善慢性肾功能衰竭导致的低钙血症及高磷血症，从而更好地改善肾功能，且大黄中的大黄酸能抑制细胞凋亡及降低炎症反应，从而保护肾脏[19]。

本实验研究结果显示，祛湿化瘀养阴方能改善高尿酸性肾病大鼠的肾功能、降低血尿酸，改善肾脏组织病理损害，减少尿酸盐在肾小管中的沉积，对高尿酸性肾病大鼠肾脏具有明显的保护作用。