不同酶联免疫吸附法检测丙肝抗体的效果

吴菲菲

深圳市罗湖区疾病预防控制中心微检科，深圳 518020

现阶段较常见的传染性疾病为丙型肝炎（简称丙肝），患者因感染丙型肝炎病毒（HCV）患病，具体涉及2 种类型，免疫介导损害、HCV 损害，其中病毒复制能力、病毒基因型为病毒因素，宿主因素涉及细胞免疫、体液免疫及先天性免疫等，传播途径以吸毒、针刺及输血等方式为主［1］，其中最常见的传播途径为输血，患者多因血液制品、输血传播而患病。经流行病学显示，此病在全球范围中的感染率约为3%。近年来其患病率逐年升高，也呈年轻化发展，已成为严重的社会、公共卫生问题。近年来研究表明，丙肝与乙肝的病理机制具有相似性，以肝细胞坏死、淋巴细胞浸润为主，患者患病后汇管区有纤维组织增生现象，若疾病持续进展，则肝硬化风险增加，甚至对其生命安全造成直接威胁［2-3］。因此，尽早检测丙肝抗体，对明确疾病、改善患者预后有积极作用。鉴于此，本研究选取深圳市罗湖区辖区医院2019年6月至2021年6月收治的80 例丙肝患者为研究对象，分析丙肝抗体经不同酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测丙肝抗体的价值。

资料与方法

1、基线资料

选取深圳市罗湖区辖区医院2019年6月至2021年6月收治的80例20～65岁男性丙肝患者，根据检测方式分为常规组（间接ELISA 法，40 例）和试验组（双抗原夹心ELISA法，40 例）。两组基线资料差异均无统计学意义（均P＞0.05）。患者及亲属知情，并签署知情同意书。

纳入标准：⑴与“丙肝防治指南（2004年版）”诊断标准相符；⑵呈食欲减退、腹胀及易疲劳等症状表现；⑶病程＞1年，年龄20～65岁；⑷教育水平在小学及以上；⑸有完整性资料。排除标准：⑴伴有其他传染性疾病；⑵重要脏器功能衰竭；⑶正处怀孕或者哺乳期；⑷检查禁忌证；⑸精神病史或者患有精神病；⑹中途退出研究。

2、方法

入院后所有对象均在同一实验室内检验血清标本，同一组检验人员、同一检验仪器完成所有对象的检测流程。

表1 两组丙肝患者基线资料比较

两组患者均行ELISA 法检测。先采集空腹、晨间肘部静脉血3 ml，3000 r∕min 离心10 min，完成离心后分离血清，等待检测，具体检测流程：室温下平衡30 min，将板条从试剂中取出，各板阳性对照有2孔、阴性对照3孔，按照编号进行不同加样量，编号从低到高编为1、2、3、4、5 号，1 号标本中取样6 μl，2 号标本中取样8 μl，3 号标本中取样10 μl，4 号标本中取样12 μl，5 号标本中取样14 μl，各个孔内放置100 μl 稀释液，阴阳对照10 μl 待测血清标本，将温度调节为37 ℃，温育处理1 h、洗板机进行洗板5 min，最后扣干即可，阳性标准为OD值≥临界值，阴性标准为OD值＜临界值。

常规组（间接ELISA 法）：间接ELISA 法试剂盒由北京万泰生物药业股份有限公司提供，严格按试剂盒说明书操作。

试验组（双抗原夹心ELISA 法）：双抗原夹心ELISA 法试剂盒由北京万泰生物药业股份有限公司提供，严格按照试剂盒说明书操作。

3、观察指标

检测结果：记录抗-HCV阳性、抗-HCV阴性的例数。

诊断效能：统计灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值［4］。灵敏度=真阳性例数∕（真阳性例数+假阴性例数）×100%，特异度=真阴性例数∕（真阴性例数+假阳性例数）×100%，阳性预测值=真阳性例数∕（真阳性例数+假阳性例数）×100%，阴性预测值=真阴性例数∕（真阴性例数+假阴性例数）×100%，阳性检出率=真阳性例数∕总例数×100%。

4、统计学方法

Excel 整理，SPSS22.0 软件分析，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用独立样本t检验。计数资料构成比以例（%）表示，采用χ2检验。检验水准α=0.05。

结果

1、检测结果

经检测发现，抗-HCV 阳性标本有8 份，试验组阳性检出率为87.50%（7∕8）；常规组阳性检出率为25.00%（2∕8）；抗-HCV 阴性标本有72 份，试验组阴性检出率为97.22%（70∕72）；常规组阴性检出率为83.33%（60∕72）；两组比较，差异均有统计学意义（χ2=6.3492、7.9121，P=0.0117、0.0049）。见表2。

表2 两组丙肝患者的检测结果比较（份）

2、诊断效能

与常规组比较，试验组灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值更高（均P＜0.05），见表3。

表3 两组丙肝患者的检测方法的诊断效能比较（%）

讨论

研究发现，丙肝是临床较常见病症，机体因感染HCV病毒而患病［5-8］。HCV 属单股正链RNA 病毒，丙肝患者感染初期症状不典型，极易被忽视；若疾病持续进展，部分群体具体表现为食欲减退、疲劳等。丙肝具有患病率高、病程长、预后差及难治愈等特征，若疾病持续进展，极易增加慢性肝炎、肝功能衰竭及肝癌等发病风险，甚至对患者生命健康造成直接威胁［9-15］。近年来研究表明，目前全球范围内的公共卫生问题为HCV，输血传播是主要传播途径［16］。目前临床对HCV 控制感染情况并未研制出有效的疫苗进行治疗，缺乏针对性治疗办法。因此，控制HVC 感染需严格遵守“早期筛查、早期诊治”原则，对疾病进展严格控制、改善患者生活质量，对减少疾病发生有积极意义［17-20］。

有文献报道，双抗原夹心ELISA 法用于丙肝抗体检测中具有可行性［21］。分析发现：⑴其具有较高的特异度，是筛查抗-HCV 阳性的最常见方式；其充分利用重组抗原技术，提高检测准确度，借助酶类标记抗原、替代酶类标记二抗，重点对免疫球蛋白（Ig）G、IgM等总抗体进行检测，对相关抗体进行2 次特异性反应，明显减少非特异性的IgG 干扰，为检测准确度提供可靠保障，尽早明确患者疾病情况，改善患者预后，利于达到预期检测效果，具有实践价值［22-24］；⑵实际检测时，加样量的多少对丙肝抗体的实验室结果造成直接影响，若加样量减少，最终结果呈阴性，导致临床极易被漏诊，带来严重医疗安全隐患；且实际进行ELISA 检测时，人为操作方式最易对最终结果产生不利影响。因此，日常生活中，加强相关操作人员的培训及技能考核很重要，及时矫正加样枪，避免人为因素引起假阴性、假阳性结果，利用先进的仪器及稳定的试剂切实完成试验操作流程，更要对手工操作的准确度高度重视，根据相关操作要求准确完成加样，可获得准确的检验结果［25-29］。

本研究显示：⑴抗-HCV 阳性标本有8 份，试验组阳性检出率为87.50%，常规组为25.00%；抗-HCV 阴性标本有72份，试验组阴性检出率为97.22%，常规组为83.33%；这表明双抗原夹心ELISA法可尽早检出抗-HCV阳性，为后期疾病治疗提供参考，对改善患者预后效果有积极作用［30］；⑵与常规组比较，试验组灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值更高（均P＜0.05），表明双抗原夹心ELISA 法具有较高的特异度、灵敏度，可提高诊断效能、缩短疾病确诊时间。

综上所述，采用双抗原夹心ELISA 法检测丙肝抗体具有较高的灵敏度、特异度，可尽早明确疾病，对改善患者预后有积极作用，可为疾病治疗提供重要的参考数据，值得推广应用。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突