携带mtDNA12SrRNA基因突变的新生儿听力筛查及诊断结果分析

曲春燕 王璟 申敏 鲁红利 马登科 赵敏

耳聋的病因包括遗传、外伤、感染、药物等因素，其中遗传是主要的致聋原因，约占60%以上。根据遗传方式不同，以耳聋为唯一症状的非综合征型耳聋中，75%～80%为常染色体隐性遗传，15%～20%为常染色体显性遗传，线粒体母系遗传约占5%，伴性遗传约占1%[1,2]。氨基糖苷类抗生素致聋的致病机理与mtDNA 12SrRNA基因突变有关,线粒体基因的遗传方式是母系遗传，母系家族中可出现多名耳聋成员。常见的mtDNA 12SrRNA基因突变类型包括m.1555A>G均质或异质突变、m.1494C>T均质或异质突变,本研究对140例携带mtDNA 12SrRNA基因突变新生儿的听力筛查结果和听力诊断结果进行回顾性分析，报告如下。

1 资料与方法

1.1研究对象 以2012年4月～2019年10月在北京出生、耳聋基因筛查均显示携带mtDNA 12SrRNA基因突变的140例新生儿，男75例，女65例，平均出生孕周39.1±1.28周，平均出生体重3 393.9±459.67克。排除标准：①携带mtDNA 12SrRNA基因突变之外的其它基因突变；②出生后曾在新生儿重症监护病房(NICU)住院；③伴有先天畸形、发育异常或其它疾病；④伴父系耳聋家族史。筛查前明确告知听力筛查和耳聋基因筛查相关知识，监护人或家属签订知情同意书。

1.2研究方法

1.2.1耳聋基因检测 新生儿出生后，由助产机构采集新生儿足跟末梢血2个血斑，每个血斑直径≥8 mm，2012年4月1日至2018年12月31日检测4个常见耳聋基因的9个突变位点，包括：GJB2(c.35delG、c.176del16、c.235delC、c.299_300delAT)、SLC26A4(IVS7-2A>G、c.2168A>G)、线粒体DNA 12SrRNA(m.1494C>T、m.1555A>G)、GJB3(c.538C>T)；2019年1月1日之后增加了6个检测位点，包括：SLC26A4(c.1174A>T、c.1226G>A、c.1229C>T、c.1975G>C、c.2027T>A、 IVS15+5G>A)。采用天根干血斑核酸提取试剂盒(DP334-03)对干血斑进行基因组DNA提取，使用遗传性聋基因芯片检测试剂盒(博奥晶典生物技术有限公司)对样本进行检测；芯片结果为阳性的样本，重新提取血斑的DNA进行Sanger测序复核，确保结果的准确性。

1.2.2新生儿听力筛查和听力学诊断 新生儿出生48小时后在出生医院进行畸变产物耳声发射(DPOAE)初筛，初筛未通过者，出生42天后在各区妇幼保健院或者指定的复筛机构进行复筛，复筛方法为DPOAE或者DPOAE+自动听性脑干反应(AABR)；听力复筛未通过者清除外耳道耵聍后，3～6月龄内进行听力学诊断。本组病例均在中国听力语言康复研究中心进行听力诊断，测试内容包括：行为观察测听、耳声发射、听性脑干反应(ABR)和声导抗检测，ABR检测采用美国智听公司Smart-EP诱发电位测试系统。以气导ABR波V反应阈≤30 dB nHL为正常，31～50 dB nHL为轻度聋，51～70 dB nHL为中度聋，71～90 dB nHL为重度聋，>91 dB nHL为极重度聋。

2 结果

2.1140例mtDNA 12SrRNA基因突变携带情况 140例携带mtDNA 12SrRNA基因突变的新生儿中，108例(77.1%)携带m.1555A>G均质突变，26例(18.6%)携带m.1555A>G异质突变；6例(14.3%)携带m.1494C>T均质突变。

2.2携带不同 12SrRNA基因突变型的新生儿听力筛查和诊断结果 140例中，3例3耳未通过听力筛查，其余137例(97.86%,137/140)均通过听力筛查(表1)，这3例中，2例携带m.1555A>G均质突变，其中1例右耳通过听力筛查，左耳未通过，双耳1 kHz声导抗均为单峰，气导ABR波V反应阈右耳30 dB nHL，左耳90 dB nHL，诊断为左耳重度感音神经性聋，右耳听力正常；另外1例右耳未通过听力筛查，因家长不同意未做听力诊断；1例携带m.1494C>T均质突变者左耳通过听力筛查，右耳未通过，双耳1 kHz声导抗均为单峰，气导ABR波V反应阈左耳20 dB nHL，右耳100 dB nHL，诊断为右耳极重度感音神经性聋，左耳听力正常。

表1 140例携带不同类型DNA 12SrRNA基因突变新生儿听力筛查和诊断结果(例)

3 讨论

氨基糖苷类抗生素导致药物性聋的病理机制是mtDNA 12SrRNA基因突变导致机体对此类药物易感，是遗传因素和药物的共同作用导致的[3,4]。mtDNA 12SrRNA基因突变携带者对氨基糖苷类药物有超敏性，常有“一针致聋”现象，即应用正常剂量或微量的此类药物就可以导致听力损失[5]。

本组140例mtDNA 12SrRNA基因突变新生儿中，137例(97.86%，137/140)通过了听力筛查，3例3耳未通过，其中2例听力诊断为单侧重度和极重度耳聋，另外1例家长拒绝听力诊断;提示绝大部分mtDNA 12SrRNA基因突变新生儿在出生时听力基本正常，与之前的相关报道相符[6,7],听力联合基因筛查方可诊断此类患儿。本研究中这两例单侧聋的发生考虑可能与mtDNA 12SrRNA基因突变无关，是否因发育等其他原因造成的，尚需进一步的影像学进行鉴别和定期随诊。虽然绝大多数mtDNA 12SrRNA基因突变新生儿通过了听力筛查，但是由于对氨基糖苷类抗生素易感，仍属于耳聋的高危人群，建议终生避免使用此类药物，以防“一针致聋”。此外，还应对其母系家庭成员中携带该基因突变的人员进行用药指导，包括新生儿同母的兄弟姐妹、新生儿的母亲及其同母兄弟姐妹、新生儿姨母家的孩子、新生儿的姥姥及其同母兄弟姐妹、新生儿姨姥家的孩子等。通过新生儿耳聋基因筛查可以发现mtDNA 12SrRNA基因突变携带者，在进行随访并绘制家系图后，给予遗传咨询和用药指导，避免携带mtDNA 12SrRNA基因突变的家庭成员因为用药不慎导致听力残疾。