聚乙二醇干扰素α-2a联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎的疗效及机制分析

安绪平

（和政县人民医院感染科，甘肃临夏 731200）

慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B, CHB）是指乙型肝炎病毒（HBV）进入人体后，高度聚集于肝脏并大量增殖所形成的慢性炎症性疾病。患者肝脏细胞长期受到侵害可发生纤维化，严重影响其肝功能。CHB危害性和传染性均较强，亟需探索有效的临床干预方案。恩替卡韦是高度专一治疗HBV药物，可抑制体内HBV增殖，但临床试验发现，长期单纯应用抗病毒药物治疗CHB容易增加病毒的耐药性，导致疗效下降。聚乙二醇干扰素α-2a在抗病的同时具有较强的免疫调节作用，通过双重途径起到抗HBV的作用，具有生物活性高、半衰期长、抗病毒作用强的优势，但目前聚乙二醇干扰素α-2a联合抗病毒药物治疗CHB的细胞生物学机制尚未完全明确[1]。基于此，本研究前瞻性选取CHB患者168例，将聚乙二醇干扰素α-2a、恩替卡韦联合用于CHB患者的治疗，分析其对血清炎性细胞因子、免疫细胞水平及HBV感染相关血清学指标转阴的影响，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年1月至2021年4月和政县人民医院感染科收治的CHB患者168例，通过随机数字表法分为试验组（n=84）及对照组（n=84）。试验组患者中男性43例，女性41例；病程3～6年，平均病程（4.51±0.30）年；肝功能分级[2]：A级40例，B级29例，C级15例；年龄25～68岁，平均年龄（46.35±3.62）岁。对照组患者中男性44例，女性40例；病程3～7年，平均病程（4.47±0.36）年；肝功能分级：A级38例，B级30例，C级16例；年龄24～69岁，平均年龄（47.14±3.17）岁。两组一般资料进行比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究获和政县人民医院医学伦理委员会批准。所有患者及家属均知情并签署知情同意书。纳入标准：①符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》[3]中CHB的诊断要求且经临床确诊；②对研究所使用药物聚乙二醇干扰素α-2a、恩替卡韦耐受；③乙型肝炎病毒-脱氧核糖核酸（HBV-DNA）≥107拷贝/mL，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性均在6月以上。排除标准：①既往存在肝移植手术史或需行肝脏手术治疗；②合并自身免疫性疾病；③合并药物性肝损伤、肝海绵状血管瘤等其他肝脏病变；④心、肾、肺等重要脏器基础功能不全；⑤同期接受其他研究；⑥合并其他类型肝炎病毒（如丙型肝炎、戊型肝炎病毒等）、脊髓灰质炎病毒、带状疱疹病毒、巨细胞病毒感染者；⑦合并阿尔兹海默症、抑郁、双向情感障碍等精神、认知疾病。

1.2 治疗方法 对照组患者接受恩替卡韦片（福建广生堂药业股份有限公司，国药准字H20213209，规格：0.5 mg/s）治疗，0.5 mg/次，1次/d。试验组患者在对照组基础上联合聚乙二醇干扰素α-2a注射液（厦门特宝生物工程股份有限公司，国药准字S20174005，规格：90 μg∶0.5 mL）治疗，药物注射至皮下，单次应用180 μg/次，治疗频率为1次/周。两组均持续用药3个月。

1.3 观察指标 ①血清炎性细胞因子水平。治疗前、治疗3个月后采集两组患者空腹静脉血3 mL，离心处理（离心半径为10 cm，转速为3 000 r/min，时间为10 min）后取上层血清，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR）检测血清视黄酸相关的孤儿受体γt（RORγt）表达水平，通过酶联免疫吸附试验检测血清白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-α（IFN-α）水平。②细胞免疫功能。采集血液标本方法同①，采用流式细胞仪（湖南唯公生物科技有限公司，型号：EasyCell 204A1）检测CD4+T细胞、CD8+T细胞水平，并计算 CD4+/CD8+。 ③ HBsAg、HBeAg、HBV-DNA 的转阴率。治疗3个月后，血清制备方式同①，通过荧光磁微粒酶联免疫吸附实验观察HBsAg水平，以HBsAg检测值＜0.2 IU/mL为阴性，HBsAg转阴率=转阴例数/总例数×100%；根据化学发光法观察血清HBeAg水平，HBeAg检测值＜1 PEIU/mL为阴性，HBeAg转阴率=转阴例数/总例数×100%；采用QRTPCR法检测血清HBV-DNA水平，定义HBV-DNA检测值＜100 IU/mL即为转阴，HBV-DNA转阴率=转阴例数/总例数×100%。

1.4 统计学分析 使用SPSS 21.0统计软件进行分析。计量资料使用（±s）表示，组内、组间比较分别使用配对、独立样本t检验。计数资料以[例(%)]表示，使用χ2检验或校正χ2检验进行比较。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前、治疗3个月后两组患者血清炎性细胞因子水平比较 治疗前，两组患者RORγt、IL-17、IL-4、IFN-α水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗3个月后，两组患者血清IFN-α水平升高，且试验组高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗3个月后，两组血清IL-17、IL-4、RORγt水平均降低，且试验组低于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

表1 治疗前、治疗3个月后两组患者血清细胞因子水平比较(±s)

表1 治疗前、治疗3个月后两组患者血清细胞因子水平比较(±s)

注：与治疗前比较，*P＜0.05。RORγt：视黄酸相关的孤儿受体γt；IL-17：白细胞介素-17；IL-4：白细胞介素-4；IFN-α：干扰素-α。

组别 例数 RORγt(IU/mL) IL-17(pg/mL) IL-4(ng/mL) IFN-α(pg/mL)治疗前 治疗3个月后 治疗前 治疗3个月后 治疗前 治疗3个月后 治疗前 治疗3个月后试验组 84 1.80±0.48 0.92±0.25* 4.23±1.31 0.97±0.26* 5.73±1.62 1.22±0.23* 0.83±0.27 4.18±0.90*对照组 84 1.72±0.39 1.43±0.21* 4.15±1.28 2.19±0.42* 5.89±1.37 3.55±0.77* 0.88±0.22 2.10±0.68*t值 1.186 -14.316 0.400 -22.636 -0.691 -26.573 -1.316 16.900 P值 ＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.2 治疗前、治疗3个月后两组患者细胞免疫功能比较 治疗前，两组患者全血CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗3个月后，两组患者全血CD8+T细胞水平均较治疗前降低，且试验组低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗3个月后，两组患者全血CD4+T细胞水平、CD4+/CD8+水平均较治疗前升高，试验组高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 治疗前、治疗3个月后两组患者细胞免疫功能比较（ ±s ）

表2 治疗前、治疗3个月后两组患者细胞免疫功能比较（ ±s ）

注：与治疗前比较，*P＜0.05。

组别 例数 CD8+(%) CD4+(%) CD4+/CD8+治疗前 治疗3个月后 治疗前 治疗3个月后 治疗前 治疗3个月后试验组 84 37.80±2.48 29.03±3.50* 33.18±2.04 41.10±2.13* 0.88±0.14 1.42±0.19*对照组 84 37.72±3.39 33.24±3.23* 32.79±2.03 37.16±2.04* 0.87±0.18 1.12±0.13*t值 0.175 -8.102 1.242 12.244 0.402 11.943 P值 ＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.3 治疗3个月后两组患者HBsAg、HBeAg、HBVDNA的转阴率比较 治疗3个月后，试验组HBsAg、HBeAg、HBV-DNA转 阴 率 为 11.90%、9.52%、83.33%，均高于对照组的3.57%、0.00%、59.52%，差异有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

表3 治疗3个月后两组患者HBsAg、HBeAg、HBV-DNA的转阴率比较[例(%)]

3 讨论

CHB为临床常见感染性疾病，患者可表现出厌食、乏力、呕吐、肝区疼痛等多种症状，如未得到有效控制可发展为肝硬化甚至肝癌，严重威胁患者生命健康，已成为严重公共卫生问题。药物治疗为控制CHB的主要手段，探索更为有效的治疗方案并分析其治疗机制为临床研究重点。CHB患者临床治愈中重要部分是尽早实现HBV-DNA和HBV相关血清学指标转阴，相关研究认为，CHB患者实现HBVDNA、HBeAg及HBeAg血清学转阴甚至治愈的关键在于机体免疫功能的激活[4-5]。恩替卡韦等抗病毒药物虽然是治疗CHB的一线药物，但长期临床实践显示，其抗病毒作用会随着用药时间的延长而衰弱。2018年美国肝病学会将聚乙二醇干扰素α-2a列为治疗CHB的优先选择的药物之一，聚乙二醇干扰素α-2a可通过激活受感染肝细胞内多种抗病毒基因表达多种抗病毒蛋白，在抗病毒的同时避免了病毒因变异对药物产生耐受，长效抑制病毒复制，限制病毒扩散[6]。此外，聚乙二醇干扰素α-2a在免疫调节主要药物中增加大分子量的聚乙二醇，不通过静脉注射，而通过皮下注射，不仅可提高α-干扰素活性，还能够提高治疗的持续时间，降低用药频率，使其抗病毒效应得到持续和巩固[7]。本研究结果显示，治疗3个月后，试验组患者HBsAg、HBeAg、HBV-DNA转阴率为均高于对照组，提示聚乙二醇干扰素α-2a可改善CHB患者HBsAg、HBeAg、HBV-DNA转阴情况。

一方面，聚乙二醇干扰素α-2a通过皮下进入血液后主要富集在肝脏，可调节T淋巴细胞的表达水平，并通过增强巨噬细胞活动及增强T淋巴细胞对受到HBV病毒侵染的肝细胞的毒性，发挥抗病毒作用[8]；另一方面，聚乙二醇干扰素α-2a可直接抑制HBV复制、增殖，继而抑制HBV及其代谢产物诱导机体炎症级联反应。RORγt与患者肝脏的炎性程度有着密切联系，可作为反映肝脏炎性程度的敏感指标；IL-17是机体重要的促炎因子，可造成患者肝脏有反复炎症损伤的情况出现，引起患者肝功能下降；IL-4多用于评估乙肝患者病情的严重程度；IFN-α能够直接抑制病毒的复制，减轻病毒复制强度。聚乙二醇干扰素α-2a可对机体抗病毒蛋白的产生起到诱导作用，并对病毒核酸的表达产生抑制作用，增强免疫细胞的活性，改善血清炎性细胞因子的水平[9]。本研究结果显示，治疗3个月后，试验组患者全血CD4+、血清IFN-α、CD4+/CD8+水平高于对照组，血清IL-17、IL-4、RORγt、全血CD8+水平低于对照组，提示聚乙二醇干扰素α-2a联合恩替卡韦治疗CHB效果较好，可能与其改善机体细胞免疫、控制血清细胞因子表达有关。郑志恒等[10]研究亦显示，在抗病毒的基础上，接受免疫治疗可改善CHB患者免疫功能，提高治疗效果。

综上所述，聚乙二醇干扰素α-2a联合恩替卡韦可提高CHB患者HBsAg、HBeAg、HBV-DNA转阴率，可能与其改善机体细胞免疫、控制血清细胞因子表达有关，值得临床进一步研究。