甲状腺乳头状癌COX-2和SLeX表达临床研究

聂阿娜，王德淼，胡 玮，尚培中，李 伟，蒋童新

(1.中国人民解放军陆军第八十一集团军医院普通外科，河北 张家口 075000；2.河北怀来世济医院普通外科，河北 怀来 075400；3.中国人民解放军陆军第八十一集团军医院检验病理科，河北 张家口 075000)

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲状腺癌最常见的一种类型，近年发病率显著升高，确诊时不少患者已出现局部浸润和(或)淋巴转移[1-3]。临床研究发现，在PTC发生发展过程中存在多种肿瘤标志物异常表达[4-5]。COX-2(cyclooxygenase-2)是一种诱生型环氧化酶，与癌肿生成及癌前病变恶性转化密切相关[6]，SLeX(sialyl Lewis X)是Lewis血型Ⅱ类抗原，在癌细胞转移过程中参与介导与血管内皮细胞的黏附[7]。我们采用EliVisionTMplus免疫组化两步法检测COX-2和SLeX在PTC及癌旁甲状腺组织中的表达，分析其与患者年龄、甲状腺影像报告和数据系统(thyroid imaging，reporting and data system，TI-RADS)分类、TNM分期、癌浸润、淋巴结转移等临床病理指标的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2017-05—2020-12月陆军第八十一集团军医院收治的120例PTC患者的手术切除标本。其中男39例，女81例；年龄16～53岁，平均(32.2±10.7)岁；癌灶直径0.7～5.5 cm，平均(3.3±1.6)cm；根据国家卫健委制定的《甲状腺癌诊疗规范(2018年版)》[8]进行TNM分期，其中T1期16例，T2期63例，T3期41例。根据术前彩超TI-RADS分类及其他影像学检查、术中探查及冰冻结果、纳米炭示踪情况，依据诊疗规范确定手术方式。综合术中所见、普通病理和免疫病理报告，评定癌浸润及淋巴结转移情况。对照组30例癌旁组织取自距癌灶2 cm处的同侧或对侧甲状腺。

纳入标准：①无严重内科系统性疾病；②无131I、甲状腺素片、中药等治疗史；③凝血机制正常，无出血倾向；④病理确诊PTC。排除标准：①甲亢；②妊娠；③其他部位严重的炎症性疾病；④并发其他部位恶性肿瘤的多元癌；⑤病理证实的滤泡上皮癌、C细胞癌、原发性非上皮癌、继发性癌等其他甲状腺恶性肿瘤。

诊疗方案经医院伦理委员会批准，患者及(或)亲属均于术前签署知情同意书。

1.2 研究方法

采用EliVisionTMplus免疫组化染色两步法检测癌组织及癌旁甲状腺组织COX-2和SLeX的表达。制备石蜡切片厚度为4 μm。免疫组化染色时选取与苏木精-伊红染色相邻的切片，采用微波仪修复抗原。鼠抗人COX-2和SLeX单克隆抗体、3，3'-二氨基联苯胺显色剂和EliVisionTMplus试剂盒均购于福州迈新公司。技术步骤及阴性对照按试剂盒说明书操作，阳性对照采用COX-2和SLeX阳性染色片。

1.3 判定标准

由2位病理医师联合观察判定染色结果，在清晰背景下呈黄、棕、褐色颗粒者为阳性反应。计分方法：①染色深浅度：无染色、黄色、棕黄色、黄褐色，对应计分为0、1、2、3分；②染色百分率：<5%、5%～30%、31%～69%、>69%，对应计分为0、1、2、3分。依据①+②计分之和定性染色结果：≤2分为阴性(-)，3～6分均计为阳性，其中3、4分为弱阳性(+)，5、6分为强阳性(++)。

1.4 观察指标

①COX-2和SLeX在癌组织及癌旁甲状腺组织中的表达部位及阳性率；②COX-2和SLeX表达与患者年龄(<45岁与≥45岁)、TI-RADS分类[(4类+5类)与6类]、TNM分期[(T1期+T2期)与T3期]、癌浸润(有、无)、淋巴结转移(有、无)等临床病理指标的关系；③癌组织COX-2和SLeX表达的相关性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0处理数据，计数资料以n(%)表示，组间比较采用χ2检验，通过χ2值计算列联系数进行相关性分析。检验水准α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 PTC组织及癌旁甲状腺组织COX-2和SLeX表达比较

COX-2蛋白阳性染色多见于细胞质，SLeX蛋白阳性染色多见于细胞膜和细胞质。癌组织及癌旁甲状腺组织中COX-2(图1A、B)和SLeX(图2A、B)阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)(表1)。

A：PTC组织COX-2强阳性表达 B：癌旁甲状腺组织COX-2阴性表达

A：PTC组织SLeX强阳性表达 B：癌旁甲状腺组织SLeX阴性表达

表1 PTC组织及癌旁甲状腺组织中COX-2和SLeX表达的比较 n(%)

2.2 PTC组织COX-2和SLeX表达与患者临床病理指标的关系

COX-2表达阳性率与年龄和TI-RADS分类无关(均P>0.05)，与TNM分期、癌浸润和淋巴结转移相关(均P<0.05)；SLeX表达阳性率与年龄无关(P>0.05)，与TI-RADS分类、TNM分期、癌浸润、淋巴结转移相关(均P<0.05)(表2)。

表2 PTC组织COX-2和SLeX表达与患者临床病理指标的关系 n(%)

2.3 PTC组织COX-2和SLeX表达相关性分析

120例患者COX-2和SLeX同时阳性者74例，共阳性率为61.7%；同时阴性者26例，共阴性率为21.7%。经列联系数相关性分析，COX-2和SLeX在PTC中的表达呈正相关(r=0.52，P<0.05)(表3)。

表3 PTC组织COX-2和SLeX表达的相关性 n(%)

3 讨 论

随着近年生物技术的快速发展，发现不少与PTC相关的肿瘤标志物，进一步研究发现，多种肿瘤标志物的协同作用是PTC发生发展的重要因素。我们观察了120例PTC及30例癌旁甲状腺组织的免疫组化染色结果，探讨COX-2和SleX表达与PTC患者临床病理指标的关系，结果表明癌组织COX-2和SLeX阳性率高，癌旁甲状腺组织阳性率低，两者均有助于鉴别甲状腺良、恶性病变。

细胞受相应刺激后，COX-2基因可发生快速诱导反应，启动合成COX-2，在炎症反应、肿瘤形成过程中发挥重要作用。近年研究发现，COX-2在正常上皮细胞中多为不表达或低表达，但在PTC组织中呈异常高表达[9-10]。本研究中COX-2表达阳性的87例患者不同年龄、TI-RADS分类中COX-2阳性率差异无统计学意义，表明COX-2表达可能与发病年龄、TI-RADS分类相关性不强(P>0.05)；T3期、有癌浸润、有淋巴结转移的患者COX-2阳性率均显著高于T1期+T2期、无癌浸润、无淋巴结转移的患者，表明临床分期越晚(癌灶越大)、浸润性越强、淋巴结转移越早，其阳性率越高，与Parvathareddy等[11]研究结果基本一致，表明COX-2不仅可刺激细胞增殖、导致PTC形成，而且还可促进癌组织浸润及转移。若与BRAFV600E等其他肿瘤标志物联合检测，还有助于鉴别PTC亚型[9,11-12]。

细胞表面黏附分子介导的癌浸润、癌转移是影响患者预后的重要因素。SleX是一种糖类肿瘤标志物，又称CD15s，与SLeA(即CA19-9)系同分异构体，可通过与选择素结合促进癌转移(即Lewis-selectin转移途径)[13-14]。研究表明，正常上皮细胞中SLeX多呈低表达或不表达，但在肺癌、乳腺癌、肝癌、胰腺导管癌、结肠癌、直肠癌等多种癌瘤中呈高表达[15-18]。有研究发现，SLeX前体分子LeX(CD15)与其他肿瘤标志物联合检测，可提高对PTC诊断的敏感性、特异性[19]。PTC组织SLeX表达阳性率显著高于正常甲状腺组织，也高于甲状腺肿及甲状腺炎[20]。弥漫硬化型PTC是一种易发生淋巴结和肺转移的病理亚型，其侵袭性及高转移潜能与癌细胞表达SLeX有关[21]。本研究通过对81例SLeX阳性表达患者进行分组对比分析，结果发现SLeX阳性率与年龄无关；TI-RADS 6类、T3期、发生癌浸润及淋巴结转移的患者SLeX阳性率均显著高于TI-RADS 4类+5类、T1期+T2期、未发生癌浸润及无淋巴结转移的患者，表明TI-RADS 分类越明确、临床分期越晚、浸润性越强、淋巴结转移越早，SLeX阳性率越高，其高水平表达预示PTC恶性度高，侵袭性大。

淋巴结转移是PTC最常见转移途径，也是影响患者生存的关键因素。病理学研究证实，约60.5%的PTC首次手术时即存在淋巴结转移。有几种PTC病理亚型亲淋巴特性强，易发生癌转移，尤其是微小乳头状癌，cN0期患者中央区淋巴结转移率高达33.7%，部分可发生颈侧区甚至远处转移，因而对已发生淋巴结转移及具有转移高危因素的PTC施行颈淋巴结清扫具有重要临床意义[2,22-23]。应用染料、荧光、纳米炭等示踪技术有助于精准施行清扫术，提高淋巴结尤其是微小淋巴结检获量[24-25]。本研究发现，发生淋巴结转移者COX-2和SLeX表达阳性率均高于未发生转移者，表明两者均参与了PTC淋巴转移过程，其高水平共阳性表达预示患者具有高转移风险。对首次手术清扫的中央区淋巴结COX-2和SLeX阳性者，术后应加强对颈侧区淋巴结的随访观察，以便早发现、早处理。

综上，COX-2和SleX高表达均与PTC发生发展相关，且两者表达具有较高的共阳性率，联合检测COX-2和SLeX表达有助于评估患者预后。随着针对COX-2和SLeX特异性靶向抑制剂的研究与应用，将为PTC多靶向联合治疗提供新策略。