承德地区亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与妊高征相关性的研究

王玲玲 郭志国 陈向华

妊娠期高血压疾病(妊高征)是妊娠期所特有的疾病，严重地威胁着母婴的健康，其发病机制至今尚未阐明。近年来随着各种分子生物学技术的日渐成熟，人类基因组研究也在不断发展与进步，遗传学因素在妊高征病因学及发病机制中发挥的作用已成为研究的热点问题。亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是机体叶酸转运及代谢的关键酶，大量的研究表明，MTHFR基因的多态性与妇幼保健类疾病有关，例如：妊娠期高血压疾病、胎盘早剥、习惯性流产、胎儿宫内生长受限、胎儿出生缺陷、新生儿自闭症、产后抑郁及其他妊娠并发症等[1，2]。目前，关于承德地区该基因多态性与妊高征的报道笔者所见尚无；因此，本研究旨在探讨承德地区两者之间的相关性，为寻找妊高征的发病机制及早期干预防治提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2016年12月至2018年12月在我院定期产前检查并住院分娩的孕妇358例，排除有高血压病史、糖尿病史、肾病史、肝病史、内分泌病史、心脑血管疾病史、先天性疾病史、遗传性疾病史、结缔组织疾病史、免疫系统疾病史、恶性肿瘤和既往血脂、凝血功能异常者，并随访至产后12周。发生妊娠期高血压疾病的孕妇32例(妊高征组)，其中妊娠高血压14例(妊娠期高血压组)，轻度子痫前期10例(轻度子痫前期组)，重度子痫前期8例(重度子痫前期组)；未发生妊娠期高血压疾病的孕妇326例(正常对照组)；诊断及分类标准以《妇产科学》为准[3]。妊高征组：年龄22～38岁，平均年龄(26.7±4.1)岁；孕周11～32周，平均(24.6±5.42)周；正常对照组：年龄20～37岁，平均年龄(25.9±5.89)岁；孕周12～33周，平均孕周(25.4±4.32)周。2组孕妇的年龄及孕周差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 外周血标本采集 孕妇于孕检时抽取空腹12 h静脉血5 ml，分别用乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)抗凝(2 ml)和肝素抗凝(3 ml)。

1.3 基因组DNA提取及MTHFR基因多态性检测 采用深圳奥萨医药有限公司的MTHFR基因677C/T检测试剂盒提取基因组DNA，严格按照试剂说明书操作，采用荧光PCR技术进行基因多态性的检测，所用仪器是罗氏480荧光定量PCR仪。采用天津中成佳益生物科技有限公司的同型半胱氨酸(Hcy)试剂盒(酶循环法)检测血浆Hcy水平，所用仪器是贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪。

2 结果

2.1 妊高征组与对照组的MTHFR基因型比较 妊高征组中C677/T677、C677/C677基因型与正常对照组比较，差异有统计学意义(χ2=4.783，χ2=9.243，P<0.05);妊高征组中T677/T677基因型与正常对照组比较，差异无统计学意义(χ2=1.576，P>0.05)；妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组与正常对照组比较，它们的T677/T677基因型、C677/T677基因型、C677/C677基因型差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 2组孕妇MTHFR基因型比较 例(%)

2.2 妊高征组与对照组等位基因频率比较 妊高征组中T677等位基因频率(51.6%)显著高于正常对照组(33.1%)，差异有统计学意义(χ2=8.731，P<0.05)；妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组与正常对照组比较，T677等位基因频率差异均无统计学意义(χ2=2.126，4.150，3.737，P>0.05)。见表2。

表2 2组孕妇MTHFR等位基因频率比较 例(%)

2.3 MTHFR不同基因型血浆Hcy水平比较 妊高征组和正常对照组中，MTHFR基因存在突变者较无突变者的血浆Hcy水平更高，差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。

表3 MTHFR不同基因型血浆Hcy水平比较

3 讨论

MTHFR参与Hcy的代谢，是Hcy再甲基化过程的关键酶[4]。MTHFR酶活性下降，使机体内叶酸和蛋氨酸循环发生障碍，体内DNA、蛋白质、脂质甲基化不足，Hcy在体内积聚，形成高Hcy血症[5，6]。高浓度的Hcy能加速氧自由基的生成，损伤血管内皮细胞，使血管内皮功能受损；同时高Hcy还可以促进低密度脂蛋白的氧化，激活血小板的聚集和黏附功能，刺激血管平滑肌细胞的增生，血管舒缩平衡发生紊乱，造成机体凝血和纤溶系统的破坏，形成血栓前状态，参与机体的病理过程，从而导致妊娠期高血压疾病。

MTHFR基因的多态性是存在地域和种族差异性的[7，8]。我国MTHFR基因677C→T的突变率则处于一个较高水平，T等位基因频率是37.5%左右[9]。目前，多数研究表明，MTHFR基因多态性与妊高征的发病密切相关[10]。Kosmas等[11]通过分析关于MTHFR基因多态性与子痫前期的23篇研究论文显示，基因突变的孕妇发生子痫前期的风险较对照组要增加1.21倍，携带T等位基因的孕妇孕期舒张压升高的风险增加1.41倍。Perales等发现MTHFR基因677C→T的突变与子痫前期有显著相关性，其研究结果显示，试验组与对照组比较MTHFR C677T纯合型(T/T)、杂合型(C/T)、野生型(C/C)分别为38.46%和20%、38.46%和26.6%、23%和53%。

国内也有研究发现，妊高征组中的MTHFR C/T基因型与对照组比较，差异有统计学意义(χ2=4.21,P<0.05)；T等位基因频率妊高征组(48.8%)高于正常对照组(32.5%)，二者比较差异有统计学意义(χ2=5.08,P<0.05)；结果表明MTHFRT677等位基因可能是妊高征的发病诱因之一[12-14]。但是也有研究证实MTHFR基因的多态性与子痫前期没有明显的相关性[15]。

因此，为了了解承德地区MTHFRC677T基因多态性与妊高征的关系，本研究共选取358例妊娠期女性，其中妊高征患者32例(妊娠期高血压组14例，轻度子痫前期组10例，重度子痫前期组8例)，正常对照组326例。妊高征组中C677/T677基因型与正常对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05);妊高征组中C677/C677基因型与正常对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；妊高征组中T677等位基因频率(51.6%)高于正常对照组(33.1%)，差异有统计学意义(P<0.05)；妊高征组和正常对照组中，MTHFR基因存在突变者较无突变者的血浆Hcy水平更高，差异有统计学意义(P<0.01)；结果表明，承德地区孕妇MTHFR基因C677T多态性和高水平的血浆Hcy可能与妊高征的发病有关，T677等位基因可能是妊高征的易感基因。

本研究通过分析承德地区MTHFR基因的多态性变化，探讨妊高征发病的遗传学机制，发现基因多态性与妊高征发病率密切相关，这对于妊高征的早期诊断、及时预防及个体化基因治疗提供了重要的病理生理学线索。但是本研究未能证明MTHFR C→T突变与病情严重程度呈正相关，可能是由于本研究的病例较少，可能会对结果造成偏移,同时，基因多态性分布存在地域、种族、人群等差异，并且病例对照研究是具有多因素复杂性的，得到的研究结果常常受到许多不稳定因素影响。因此，今后应加强大样本、多种族、跨地域的多中心深入研究。

目前，妊高征的遗传学研究尚存在诸多问题，以后的研究重点可以放在分析不同基因型频率和T等位基因频率与环境因素间的相关性，以及MTHFR基因与其他易感基因间的协同关系，从转录和翻译等分子水平了解其内在机制，为妊高征的早期诊断和早期预防提供一定的遗传学信息依据。大量研究结果提示，MTHFR基因多态性可能是妊高征的一个遗传危险因素。

本研究也显示，承德地区该基因多态性与妊高征密切相关；从优生优育的角度出发，我们应该普及和推广MTHFR 基因 677C/T 多态性在孕前、孕中的检测，根据检测结果制定个体化治疗与预防方案，降低妊高征的发病风险，确保孕妇和胎儿的安全。