94例乳腺癌患者BRCA1/2基因突变研究

(临沂国众医学检验有限公司，山东 临沂 276000)

乳腺癌易感基因(Breast cancer susceptibility gene，BRCA)是重要的抑癌基因，包括BRCA1和BRCA2。BRCA在DNA修复的同源性重组机制中扮演重要角色，BRCA基因突变会导致基因组不稳定性显著增加。胚系BRCA1/2突变(gBRCAm)将显著提高乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌以及其他癌症的发病风险，且发病呈年轻化趋势。相关研究表明，约5%-10%的乳腺癌和15%-22%的卵巢癌是由BRCA1/2基因突变导致的[1]。BRCA基因致病性突变使女性发生乳腺癌风险提高5倍，发生卵巢癌风险提高10-30倍[2]。因此，通过BRCA基因检测，了解其状态，有助于采取预防性手术及评估家属遗传风险。

1 材料与方法

1.1研究对象 选取2019年8月—2020年6月在本公司实验室进行BRCA基因检测的乳腺癌患者94例，其中男1例，女93例；年龄26-68岁，平均(41.16±8.93)岁；其中10例有乳腺癌家族遗传史。

1.2方法 核酸抽提及纯度测定：抽取患者静脉血5 mL，采用北京天根血液基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，提取后采用超微量核酸蛋白测定仪进行DNA浓度及纯度测定。文库制备及NGS测序由杭州联川基因诊断技术有限公司完成。所有核酸序列位置编码参考美国国家生物技术信息中心网站的GenBank上的野生型cDNA序列；采用Blast程序确定检测的位点是否引起氨基酸编码改变，把检测到的位点在乳腺癌信息中心网站上进行对照，确定是否为新的突变位点。BRCA基因变异风险程度参考《BRCA数据解读中国专家共识》。

2 结果

94例乳腺癌患者中，共检测到10例致病性突变，突变率为10.64%，其中2例有乳腺癌家族遗传史，8例为散发，二者比较无统计学意义(χ2=1.03，P=0.31)。其中6例存在BRCA1基因突变，突变率为6.38%(6/94)；4例存在BRCA2基因突变，突变率为4.26%(4/94)；二者比较无统计学意义(χ2=0.42，P=0.516)。所有突变位点均经一代测序验证，结果一致。突变情况见表1，致病性突变位点测序见图1。

表1 乳腺癌基因突变位点

图1 致病性突变的测序图谱

BRCA1基因中发现5个突变位点,其中1个为新发现位点突变c.5511-5524delGGTGTTGGACAGTG(p.Trp1837fs)，且经一代测序验证，结果一致，该突变为移码突变，推测导致蛋白翻译提前终止；其余4个为已报道的致病点突变(c.212G>A;c.5539T>C)和致病剪切位点突变(c.212+1G>T;c.135-2A>G)，可引起 BRCA1基因转录后剪切异常，进而影响其蛋白功能。

BRCA2基因中发现3个突变位点，2个为新发现位点：c.5895delT和c.1498-1499insT，均为移码突变。c.5895delT(p.His1966fs)推测导致蛋白翻译提前终止；c.1498-1499insT (p.Gly500fs)属于功能缺失性变异，该变异是非重复区域内单个核苷酸的插入，可能影响蛋白质功能。另外1个为已报道的致病性突变c.8504C>A，导致蛋白发生截短变异。

3 讨论

近年来研究表明，BRCA1/2突变在乳腺癌的发病过程中起着非常重要的作用。BRCA1基因定位于人类染色体17q21，长度约81 kb，BRCA1蛋白和多种相关蛋白共同作用维持基因组的稳定，同时在DNA损伤修复、细胞周期、基因转录调节、细胞凋亡等机制中发挥着重要的生物学功能。BRCA2是一种抑癌基因，位于第13号染色体13q12.3位置，全长84193 bp，编码3418个氨基酸残基组成的蛋白质，该蛋白质通过同源重组及部分调节RAD51的活性参与DNA损伤的修复，进而阻止癌细胞的生长发育[3]。

BRCA基因突变率在不同人群存在较大差异[4-5]。本研究结果显示，BRCA1的突变率(6.38%)高于BRCA2(4.26%)，但二者尚无统计学意义。这可能与人群的选择及检测方法不同有关。本次研究中，有家族遗传史的乳腺癌患者中有一对母女(9号和10号)发生了相同的基因突变，提示我们有家族遗传史的高风险人群，应及早进行基因筛查，提前做好健康管理及干预，具有非常重要的意义。

总之，本次对94例乳腺癌患者进行的BRCA1/2检测，共发现3个新的突变位点，这3个位点突变类型均为移码突变，涵盖BRCA1和BRCA2基因区域。这一实验结果进一步丰富了乳腺癌患者BRCA基因突变谱，也为中国人群BRCA基因相关研究提供一定的基础资料，并为未来的临床基因检测提供了筛查模式。