丁苯肽和长春西汀治疗急性缺血性脑卒中对患者血清LncRNA CAI2及CD62P的影响

耿彪 赵小辉 宋志军 杨晶 刘盼 王洪志 马天骄

急性缺血性脑卒中是一种由脑部急性血液障碍导致脑组织缺血缺氧的临床综合征，该疾病发病急、病情发展迅速，对脑组织的损伤不可逆转，且致残率和致死率极高[1]。急性缺血性脑卒中的发病机制大多是患者血管异常堵塞或狭窄，血液粘度异常增加，从而造成脑组织供血障碍。目前临床上多采用扩张脑血管药物治疗急性缺血性脑卒中，其中长春西汀是目前临床治疗常使用的溶栓药物之一[2]。由于溶栓的最佳治疗时间是早期，因此随着病情的发展急需联合其他治疗手段提高疗效并改善患者预后。近年来，临床治疗常采用丁苯肽联合治疗急性缺血性脑卒中，丁苯肽不仅可以有效抑制血小板聚集，还可以降低机体炎性因子水平，从而保护神经细胞[3]。近年来有研究发现，长非编码RNA(long non coding RNA，LncRNA)CAI2和血小板膜激活标记物P-选择素(Platelet membrane activation marker P-selectin，CD62P)在急性缺血性脑卒中病情发展中具有巨大研究价值[4，5]。本研究采用丁苯肽结合长春西汀治疗急性缺血性脑卒中患者，及其对血清LncRNA CAI2及CD62P的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 研究对象为2017年3月至2020年5月于本院就诊并接受治疗的220例急性缺血性脑卒中患者，采用随机数字表法分为对照组和观察组，每组110例，年龄40～75岁。2组患者在年龄和性别比、病程和合并症等临床资料差异无统计学意义(P>0.05)。本研究由医院伦理委员会批准进行，患者及家属签订知情同意书。见表1。

表1 2组患者的一般资料 例，

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：(1)患者经CT检查已确诊患有急性缺血性脑卒中，临床症状符合2018版急性缺血性脑卒中急诊急救中国专家共识[6]中急性缺血性脑卒的诊断标准；(2)入院前无急性缺血性脑卒中病史；(3)病发3 d内入院接受治疗；(4)无治疗药物过敏史。排除标准：(1)患有脑出血或其他自发性出血疾病；(2)患有其他并发症、恶性肿瘤以及精神病的患者；(3)身体重要脏器受损或内分泌系统障碍；(4)患者认知和社交无障碍。

1.3 方法 患者均给予常规治疗，主要包括稳定颅内压、营养支持、内环境平衡、抗血小板凝聚、液体补充治疗和辅助呼吸等。此外，对于合并高血压患者给予常规降压治疗，对于合并高血糖患者给予常规降糖治疗。除常规治疗外，对照组给予静脉滴注长春西汀注射液(规格：50 mg/2 ml，批号：31170306，河北智同生物制药有限公司)，1次/d，30 mg/次。观察组在常规治疗的基础上，给予丁苯肽胶囊结合长春西汀注射液，常规治疗和长春西汀注射液的治疗方案同对照组，丁苯肽胶囊(规格：0.2 g/颗，必普药业有限公司)口服给药，3次/d，0.2 g/次。2组治疗期均为2周。

1.4 观察指标

1.4.1 临床疗效：本实验采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIH Stroke Scale,NIHSS)评价临床疗效，评价指标为治疗后患者神经功能状况。分别于2周后观察并记录两组治疗前后的NIHSS分数。NIHSS分数相较治疗前降低>90%，记作治愈；NIHSS分数相较治疗前降低在46%～90%，记作显著有效；NIHSS分数相较治疗前降低在18%～45%，记作有效；NIHSS分数相较治疗前降低<18%，记作无效。治疗有效率=治愈率+显著有效率+有效率。

1.4.2 NIHSS评分、mRS评分和Barthel指数:分别于2周后比较2组治疗前后NIHSS评分、改良Rankin量表(modified Rankin scale,mRS)评分和Barthel指数(the Barthelindex of ADL，BI)评分。无或有轻微神经功能障碍，记作0分；有轻微神经功能障碍，但不影响工作生活，记作1分；无法正常工作生活，在他人帮助下可实现生活自理，记作2分；可独立行走，在他人帮助下可实现生活自理，记作3分；无法独立行走，在他人帮助下可实现生活自理，记作4分；患者大小便失禁，无法行走，且完全丧失生活能力，记作5分。

1.4.3 血液流变学指标：取患者早晨空腹肘静脉血2 ml，4℃离心10 min(3 000 r/min)，LG-R-80A型全自动血液黏度计(北京中科富邦医疗设备有限公司)测定其中全血黏度(whole blood viscosity，WBV)、血浆黏度(plasma viscosity，PV)水平、纤维蛋白原(fibrinogen，FIB)水平和红细胞比容(hematocrit，HCT)。

1.4.4 血清炎性因子水平:治疗前后取患者早晨空腹静脉血5 ml，4℃离心10 min(3 000 r/min)，取上层血清通过免疫比浊法(检测试剂来自RANDOX公司)测定其中C-反应蛋白(CRP)含量。采用酶联免疫法(检测试剂均来自北京晶美生物技术有限公司)测定血清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)的含量。

1.4.5 血清LncRNACAI2和CD62P:水平分别治疗前后取患者早晨空腹后静脉取血样品3ml，加入抗凝剂枸橼酸钠，4℃离心15 min(4 000 r /min)，取上层血清采用实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)测定其中LncRNACAI2水平。首先采用逆转录试剂盒(批号：A257414368813，美国应用生物系统公司)将血清样品中RNA逆转录为cDNA，然后采用PowerUp SYBR Green预混液(批号：A25741，美国应用生物系统公司)定量扩增cDNA，最后以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH) 为对照品，采用荧光定量PCR仪(美国伯乐公司)实时定量PCR，并通过2-ΔΔCT法计算LncRNACAI2的相对含量。分别治疗前后取患者早晨空腹后静脉取血样品5 ml，加入抗凝剂枸橼酸钠，4℃离心10 min(3 000 r/min)，取上层血清采用酶联免疫吸附法(检测试剂来自上海酶联生物有限公司)测定其中CD62P水平。

2 结果

2.1 临床疗效 治疗后对照组总有效率为 89.1%，观察组为96.4%，观察组总有效率显著高于对照组，2组间差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组治疗后临床疗效比较 n=110,例(%)

2.2 NIHSS、mRS和BI评分 治疗前2组NIHSS、mRS和BI评分指数均无明显差异(P>0.05)，治疗后2组NIHSS和mRS评分均显著降低(P<0.05)，BI显著提高(P<0.05)。此外，治疗后观察组的NIHSS和mRS评分均明显低于对照组(P<0.05)，BI明显高于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 2组治疗前后NIHSS、mRS和BI评分比较 n=110,分，

2.3 血液流变学指标 治疗前2组血液流变学指标均无明显差异(P>0.05)，治疗后2组均明显降低(P<0.05)，且观察组均明显低于对照组(P<0.05)。见表4。

表4 2组治疗前后血液流变学指标比较

2.4 血清炎性因子水平 治疗前2组的血清炎性细胞因子水平均无明显差异(P>0.05)，治疗后2组均明显降低(P<0.05)，且治疗后观察组均明显低于对照组(P<0.05)。见表5。

表5 2组治疗前后血清炎性因子水平比较

2.5 血清LncRNACAI2和CD62P水平 治疗前2组的血清LncRNACAI2和CD62P水平均无明显差异(P>0.05)，治疗后2组均显著降低(P<0.05)，且观察组均低于对照组(P<0.05)。见表6。

表6 2组治疗前后血清LncRNACAI2和CD62P水平比较

3 讨论

急性缺血性脑卒中发病原因为患者脑血管病理性萎缩或是血液粘度异常增高导致脑血管堵塞，从而引发脑血栓以及其他并发症[7]。长春西汀是目前临床治疗中常使用的一种溶栓药物[8]，作为吲哚类生物碱的长春西汀脂溶性较好的，可通过血脑屏障直达脑组织，有效降低脑血液粘度，从而改善患者血栓。但是溶栓治疗时间很短暂，因此在临床治疗中常需联合其他药物提高疗效。脑组织缺血缺氧会刺激人体氧化应激反应，从而促进机体分泌炎性因子，过高水平的炎性因子会进一步损伤神经细胞。因此本研究采用长春西汀联合可有效降低机体炎性因子水平的丁苯肽，以达到提高疗效以及改善患者预后的作用。

本研究中，观察组总有效率显著高于对照组(P<0.05)。这说明长春西汀和联合用药均可以有效治疗急性缺血性脑卒中并改善患者的神经功能恢复，但联合用药的疗效更佳。治疗后2组的NIHSS和mRS评分均显著降低(P<0.05)，BI均显著提高(P<0.05)这说明长春西汀和联合用药均可以有效改善患者生活自理能力以及神经功能恢复。原因可能是长春西汀可有效阻滞机体钙离子通道[9]，降低机体钙离子水平，从而保护脑组织缺血缺氧状态下神经细胞兴奋性损伤，从而避免神经细胞受损。此外，丁苯肽中消旋-3-正定基本肽成分可保护脑细胞线粒体的功能与结构[10]，从而保护神经细胞，改善患者的神经功能恢复。

治疗后2组的血液流变学指标均明显降低(P<0.05)，且观察组低于对照组(P<0.05)。这说明长春西汀和联合用药均可以有效改善急性缺血性脑卒中患者的全血黏度、血浆黏度水平、纤维蛋白原水平和红细胞比容。原因可能是长春西汀可调节红细胞形状[11]，降低血管内红细胞水平，从而降低血液粘度。丁苯肽中消旋-3-正定基本肽成分可有效调节机体花生四烯酸表达水平[12]，从而抑制脑血管血小板异常凝聚，从而降低血液粘度。

治疗后2组的血清炎性细胞因子水平均明显降低(P<0.05)，且观察组低于对照组(P<0.05)。这说明相较于长春西汀，联合用药降低机体血清炎性细胞因子水平效果更佳。分析认为原因可能是丁苯肽的活性成分消旋-3-正定基本肽可抑制机体合成谷氨酸[13]，从而抑制机体氧化应激反应产生炎性因子，避免神经细胞炎性受损。

急性缺血性脑卒中的致死率极高，因此预防诊断逐渐成为临床治疗急性缺血性脑卒中的研究热点，其中LncRNACAI2和CD62P的水平变化与急性缺血性脑卒中病情发展密切相关。LncRNA广泛存在于人体脑组织中，参与机体神经炎性反应[14]，影响急性缺血性脑卒中患者神经功能恢复。CD62P作为促炎性因子[15]，在血小板活化过程中具有重要作用。本研究发现治疗后2组的血清LncRNACAI2和CD62P水平均显著降低(P<0.05)。健康人体内血清LncRNACAI2水平极低[16]，患有急性缺血性脑卒中后明显增高，联合治疗后血清LncRNACAI2和CD62P水平显著降低，这提示临床中可监测患者血清LncRNACAI2和CD62P水平，提早诊断和治疗急性缺血性脑卒中，给予患者个性化治疗，改善患者预后。

本研究发现，长春西汀联合丁苯肽可以显著改善急性缺血性脑卒中患者的神经功能和生活自理能力恢复。此外，丁苯肽结合长春西汀可能发生协同作用，增强溶栓和抗炎作用，显著改善血液流变学指标、血清炎性因子水平以及血清LncRNACAI2和CD62P水平。