在线固相萃取液相色谱串联质谱法测定阿姆西汀异构体的药代动力学差异

李迎等

摘 要 建立了在线固相萃取高效液相色谱串联质谱法（Online SPE HPLCMS/MS）测定大鼠血浆中S/R阿姆西汀手性异构体的方法。血浆样品经过以下预处理步骤： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 应用Online SPE将血浆样品中的其它杂质去除； 将保留在SPE柱上的阿姆西汀和内标洗脱后用分析柱进一步分离。分离后再用串联质谱法分别测定大鼠血浆中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱为 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱为ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。质谱采用电喷雾离子源（ESI），多反应监测（MRM）模式，检测离子为正离子，分别选择m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作为S/R阿姆西汀和内标（普萘洛尔）的检测离子对。结果表明，S/R阿姆西汀的线性范围为0.2～1000 μg/L，相关系数R分别为0.9903和0.9951， 批内精密度RSD分别为1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分别为94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之间。本方法显著提高了阿姆西汀的检测灵敏度，可以满足大鼠灌胃给予阿姆西汀两种异构体的药代动力学研究要求。

3.5 药代动力学参数分析

应用DAS 2.0 计算药代动力学参数，结果表明，大鼠灌胃给予阿姆西汀异构体后， R阿姆西汀的最大浓度显著低于S阿姆西汀，两者的最大浓度分别为（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，灵敏的检测方法是研究该药手性差异的前提和必要条件。

4 结 论

与离线SPE相比较，在线SPE具有快速、省力和便于自动化分析的优点。本研究将蛋白质沉淀法和在线SPE相结合，有利于除去血浆中杂质并提高分析柱寿命[12]。据此建立了大鼠血浆样品中S/R阿姆西汀的在线SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并进行了严格的方法学验证，确证后的方法用于SD大鼠体内阿姆西汀异构体的药代动力学研究。研究表明，大鼠灌胃给予阿姆西汀异构体后两者之间有显著的差异，其中R阿姆西汀的最大浓度比S阿姆西汀低3.3倍， 文献[10＼]报道的方法不能满足其测定要求。而本方法在满足该测定要求的基础上，操作简便快速，重现性好，可以满足临床研究的需要。

References

1 Morilak D A， Frazer A. Int. J. Neuropsychopharmacol， 2004， 7（2）： 193-218

2 Dell′Osso B， Buoli M， Baldwin D S， Altamura A C. Hum Psychopharmacol， 2010， 25（1）： 17-29

3 Papakostas G I， Thase M E， Fava M， Nelson J C， Shelton R C. Biol. Psychiatry.， 2007， 62（11）： 1217-1227

4 Westanmo A D， Gayken J， Haight R. Am. J. HealthSyst Pharm.， 2005， 62： 2481-2490

5 Palmer E C， Binns L N， Carey H. Ann. Pharmacother.， 2014， 48（8）： 1030-1039

6 Xue R， Jin Z L， Chen H X， Yuan L， He X H， Zhang Y P， Meng Y G， Xu J P， Zheng J Q， Zhong B H， Li Y F， Zhang Y Z. Eur. Neuropsychopharmacol， 2013， 23（7）： 728-741

7 Grillo M P， Wait J C， Tadano L M， Khera S， Benet L Z. Drug Metab Dispos.， 2010， 38（1）： 133-142

8 Hardikar M S. J. Indian. Med. Assoc.， 2008， 106（9）： 615-618， 622， 624

9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬来， 邓 鸣， 熊 山， 张振清. 军事医学， 2013， 37（11）： 818-821

11 CHEN Jing， LIU ZhaoJin， AN BaoChao， XU Qun， ZHANG XiangMin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（9）： 1418-1422

陈 静， 刘召金， 安宝超， 许 群， 张祥民. 分析化学， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾连峰， 马育松， 陈瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化学， 2013， 41（8）： 1194-1198

摘 要 建立了在线固相萃取高效液相色谱串联质谱法（Online SPE HPLCMS/MS）测定大鼠血浆中S/R阿姆西汀手性异构体的方法。血浆样品经过以下预处理步骤： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 应用Online SPE将血浆样品中的其它杂质去除； 将保留在SPE柱上的阿姆西汀和内标洗脱后用分析柱进一步分离。分离后再用串联质谱法分别测定大鼠血浆中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱为 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱为ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。质谱采用电喷雾离子源（ESI），多反应监测（MRM）模式，检测离子为正离子，分别选择m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作为S/R阿姆西汀和内标（普萘洛尔）的检测离子对。结果表明，S/R阿姆西汀的线性范围为0.2～1000 μg/L，相关系数R分别为0.9903和0.9951， 批内精密度RSD分别为1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分别为94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之间。本方法显著提高了阿姆西汀的检测灵敏度，可以满足大鼠灌胃给予阿姆西汀两种异构体的药代动力学研究要求。

3.5 药代动力学参数分析

应用DAS 2.0 计算药代动力学参数，结果表明，大鼠灌胃给予阿姆西汀异构体后， R阿姆西汀的最大浓度显著低于S阿姆西汀，两者的最大浓度分别为（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，灵敏的检测方法是研究该药手性差异的前提和必要条件。

4 结 论

与离线SPE相比较，在线SPE具有快速、省力和便于自动化分析的优点。本研究将蛋白质沉淀法和在线SPE相结合，有利于除去血浆中杂质并提高分析柱寿命[12]。据此建立了大鼠血浆样品中S/R阿姆西汀的在线SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并进行了严格的方法学验证，确证后的方法用于SD大鼠体内阿姆西汀异构体的药代动力学研究。研究表明，大鼠灌胃给予阿姆西汀异构体后两者之间有显著的差异，其中R阿姆西汀的最大浓度比S阿姆西汀低3.3倍， 文献[10＼]报道的方法不能满足其测定要求。而本方法在满足该测定要求的基础上，操作简便快速，重现性好，可以满足临床研究的需要。

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7 Grillo M P， Wait J C， Tadano L M， Khera S， Benet L Z. Drug Metab Dispos.， 2010， 38（1）： 133-142

8 Hardikar M S. J. Indian. Med. Assoc.， 2008， 106（9）： 615-618， 622， 624

9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬来， 邓 鸣， 熊 山， 张振清. 军事医学， 2013， 37（11）： 818-821

11 CHEN Jing， LIU ZhaoJin， AN BaoChao， XU Qun， ZHANG XiangMin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（9）： 1418-1422

陈 静， 刘召金， 安宝超， 许 群， 张祥民. 分析化学， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾连峰， 马育松， 陈瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化学， 2013， 41（8）： 1194-1198

摘 要 建立了在线固相萃取高效液相色谱串联质谱法（Online SPE HPLCMS/MS）测定大鼠血浆中S/R阿姆西汀手性异构体的方法。血浆样品经过以下预处理步骤： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 应用Online SPE将血浆样品中的其它杂质去除； 将保留在SPE柱上的阿姆西汀和内标洗脱后用分析柱进一步分离。分离后再用串联质谱法分别测定大鼠血浆中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱为 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱为ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。质谱采用电喷雾离子源（ESI），多反应监测（MRM）模式，检测离子为正离子，分别选择m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作为S/R阿姆西汀和内标（普萘洛尔）的检测离子对。结果表明，S/R阿姆西汀的线性范围为0.2～1000 μg/L，相关系数R分别为0.9903和0.9951， 批内精密度RSD分别为1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分别为94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之间。本方法显著提高了阿姆西汀的检测灵敏度，可以满足大鼠灌胃给予阿姆西汀两种异构体的药代动力学研究要求。

3.5 药代动力学参数分析

应用DAS 2.0 计算药代动力学参数，结果表明，大鼠灌胃给予阿姆西汀异构体后， R阿姆西汀的最大浓度显著低于S阿姆西汀，两者的最大浓度分别为（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，灵敏的检测方法是研究该药手性差异的前提和必要条件。

4 结 论

与离线SPE相比较，在线SPE具有快速、省力和便于自动化分析的优点。本研究将蛋白质沉淀法和在线SPE相结合，有利于除去血浆中杂质并提高分析柱寿命[12]。据此建立了大鼠血浆样品中S/R阿姆西汀的在线SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并进行了严格的方法学验证，确证后的方法用于SD大鼠体内阿姆西汀异构体的药代动力学研究。研究表明，大鼠灌胃给予阿姆西汀异构体后两者之间有显著的差异，其中R阿姆西汀的最大浓度比S阿姆西汀低3.3倍， 文献[10＼]报道的方法不能满足其测定要求。而本方法在满足该测定要求的基础上，操作简便快速，重现性好，可以满足临床研究的需要。

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3 Papakostas G I， Thase M E， Fava M， Nelson J C， Shelton R C. Biol. Psychiatry.， 2007， 62（11）： 1217-1227

4 Westanmo A D， Gayken J， Haight R. Am. J. HealthSyst Pharm.， 2005， 62： 2481-2490

5 Palmer E C， Binns L N， Carey H. Ann. Pharmacother.， 2014， 48（8）： 1030-1039

6 Xue R， Jin Z L， Chen H X， Yuan L， He X H， Zhang Y P， Meng Y G， Xu J P， Zheng J Q， Zhong B H， Li Y F， Zhang Y Z. Eur. Neuropsychopharmacol， 2013， 23（7）： 728-741

7 Grillo M P， Wait J C， Tadano L M， Khera S， Benet L Z. Drug Metab Dispos.， 2010， 38（1）： 133-142

8 Hardikar M S. J. Indian. Med. Assoc.， 2008， 106（9）： 615-618， 622， 624

9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬来， 邓 鸣， 熊 山， 张振清. 军事医学， 2013， 37（11）： 818-821

11 CHEN Jing， LIU ZhaoJin， AN BaoChao， XU Qun， ZHANG XiangMin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（9）： 1418-1422

陈 静， 刘召金， 安宝超， 许 群， 张祥民. 分析化学， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾连峰， 马育松， 陈瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化学， 2013， 41（8）： 1194-1198