Rho激酶在阻塞性睡眠呼吸暂停综合征相关肺动脉高压患者中的作用研究

王楠 单丽娜

肺动脉高压(PAH)是由多种病因引起的一种复杂的进行性疾病，主要症状为进行性运动后呼吸困难，常伴有疲劳，进展迅速可致右心衰，3年生存率为70%～80%[1]。阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)被列为PAH的独立危险因素之一,其通过低氧性血管收缩、肺血管重塑、全身炎症反应和高凝状态等机制促进PAH的形成，持续气道正压通气(CPAP)是OSAS最有效的治疗方法[2]。Rho激酶(ROCK1/ROCK2)可由缺氧及炎症等因素激活，通过调节肌动蛋白细胞骨架和运动，引起内皮功能紊乱、肺动脉血管收缩和重构、心室肥大及右心室功能障碍，导致PAH。近年来，较多实验证明Rho/Rho激酶信号转导通路在缺氧性PAH中起重要作用，但Rho激酶在OSAS相关PAH患者中的作用研究较少，且CPAP治疗对其影响尚不明确。本研究通过检测正常人群、OSAS不伴PAH患者、OSAS伴PAH患者、经CPAP治疗后的OSAS患者血清Rho激酶水平变化，旨在探讨Rho激酶(ROCK1/ROCK2)在OSAS相关PAH患者中的作用，观察CPAP治疗对OSAS相关PAH患者血清Rho激酶的影响，为临床早期干预及治疗提供重要参考。

对象与方法

1.对象：2018年12月～2019年10月经我院多导睡眠呼吸监测(PSG)和超声心动图检测诊断为OSAS合并PAH的患者15例作为PAH组，其中经CPAP治疗3个月的患者7例作为TPAH组;单纯OSAS患者30例作为OSAS组，其中经CPAP治疗3个月后的患者10例作为TOSAS组;纳入同期于我院体检的健康受试者15例作为对照组。其中对照组男12例，女3例，年龄18～61岁，平均年龄(36.80±14.58)岁，平均BMI(28.96±2.59)kg/m2；OSAS组男25例，女5例，年龄20～71岁，平均年龄(45.53±16.71)岁，平均BMI(30.47±4.27)kg/m2；PAH组男12例，女3例，年龄26～75岁，平均年龄(46.40±14.87)岁，平均BMI(31.53±4.81)kg/m2，3组受试者性别、年龄、BMI比较差异均无统计学意义(P>0.05)。排除特发性肺动脉高压、慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘、高血压、冠状动脉硬化性心脏病、心力衰竭、糖尿病等其他慢性疾病患者。本研究经我院伦理委员会审核批准,所有受试者均签署知情同意书。

2.方法

(1)PSG：受试者行PSG，监测时间为晚上22∶00～次日清晨5∶00，记录睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)、夜间平均血氧饱和度(MSaO2)、平均呼吸暂停时间、夜间最低血氧饱和度(LSaO2)、血氧饱和度低于90%的时间(TS90%)等相关参数。OSAS诊断标准：经PSG每夜7 h睡眠过程中呼吸暂停及低通气反复发作在30次以上,或AHI≥5次/h，且以OSA为主。

(2)超声心动图检查：对照组受试者和所有患者治疗前后均行超声心动图检查检测肺动脉收缩压(PASP)。PAH诊断标准：通过多普勒超声心动图测定，根据简化的Bernoulli方程，三尖瓣最大返流速度>3.4 m/s即PASP>50 mmHg[3]。

(3)Rho激酶水平检测：采集对照组受试者和所有患者治疗前后晨起空腹肘静脉血4 ml,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清ROCK1、ROCK2水平，试剂盒购于杭州酶标生物有限公司。

结 果

1.对照组、OSAS组及PAH组受试者PSG指标及血清Rho激酶水平比较：治疗前PAH组PASP、血清ROCK2水平均高于OSAS组和对照组，OSAS组PASP、血清ROCK2水平均高于对照组(P<0.01或P<0.05)；治疗前PAH组和OSAS组AHI、平均呼吸暂停时间、血清ROCK1水平均高于对照组(P<0.01或P<0.05)，但PAH组和OSAS组AHI、平均呼吸暂停时间、血清ROCK1水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)；治疗前PAH组MSaO2低于对照组及OSAS组，OSAS组MSaO2低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 对照组、OSAS组及PAH组受试者治疗前PSG指标及血清Rho激酶水平比较

2.TOSAS组和PAH组患者CPAP治疗前后PASP及血清Rho激酶水平比较：TOSAS组和TPAH组患者CPAP治疗3个月后PASP、血清ROCK1、ROCK2水平均低于同组治疗前(P<0.01或P<0.05)。见表2。

表2 TOSAS组和TPAH组患者CPAP治疗前后PASP及血清Rho激酶水平比较

3.对照组、TOSAS组、TPAH组受试者治疗后PASP及血清Rho激酶水平比较：治疗后TOSAS组、TPAH组治疗后PASP及血清ROCK2水平均高于对照组，TPAH组PASP及血清ROCK2水平均高于TOSAS组(P<0.05)，而对照组、TOSAS组、TPAH组间两两血清ROCK1水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 对照组、TOSAS组、TPAH组受试者治疗后PASP及血清Rho激酶水平比较

4.OSAS患者各指标间的相关性分析：Pearson秩相关分析结果显示，OSAS患者年龄与AHI、平均呼吸暂停时间呈中度正相关(r=0.486,P=0.010;r=0.438,P=0.010)；BMI与AHI呈中度正相关(r=0.443,P=0.013)；AHI与MSaO2、LSaO2呈中度负相关(r=-0.647,P<0.001;r=-0.720,P<0.001)，与TS90%呈中度正相关(r=0.651,P<0.001)，与PASP呈中等程度正相关(r=0.519,P<0.001);LSaO2与PASP呈中度正相关(r=0.662,P<0.001)；PASP与ROCK1呈低度正相关(r=0.381,P=0.035)，与ROCK2呈高度正相关(r=0.800,P<0.001)。见表4。

讨 论

OSAS相关PAH的病理生理机制较复杂，间歇性低氧、经胸负压和内皮功能障碍可能在其中起一定作用。肺血管重构是肺动脉高压的显著特征之一，在细胞水平上，其特点是内皮功能障碍和小肺动脉收缩性增强，导致内膜、中膜和外膜活动的改变，但具体的细胞分子机制仍不清楚。本研究结果显示，对照组PASP低于OSAS组，且相关性分析结果显示，PASP与AHI、TS90%存在相关关系，反映OSAS中的间断性缺氧对肺动脉高压的发生发展具有促进作用，提示OSAS为PAH发生的危险因素。同时本研究结果显示，PAH组患者MSaO2低于OSAS组，提示夜间血氧饱和度越低越易发生PAH。

Rho激酶参与肌动蛋白细胞骨架组织、细胞粘附和运动、增殖和凋亡、细胞外基质重塑和平滑肌细胞收缩，可被缺氧、炎症因子[4]及多种细胞因子激活。法舒地尔是非特异性Rho激酶拮抗剂[5],可改善缺氧和野百合碱诱导的PAH小鼠模型中肺动脉压力和肺动脉重塑[6-7]，可使PAH患者的肺动脉压力降低[8-9]。RhoA/ROCK信号通路通过血管重构和血管收缩参与PAH的发病过程[10]。本研究结果还显示，PAH组血清ROCK2水平高于对照组和OSAS组，TPAH组血清ROCK2水平也高于TOSAS组和对照组；相关性分析结果显示，PASP与ROCK2呈高度正相关,而与ROCK1呈低度相关，由此推测在OSAS患者PAH形成过程中发挥主要作用的Rho激酶可能为ROCK2。

CPAP是OSAS最有效的治疗方法，目的是打开睡眠时阻塞的上呼吸道，防止呼吸暂停事件的发生，且可以降低无心肺疾病的OSAS患者的肺动脉压[11]。本研究证明CPAP治疗可降低OSAS患者的肺动脉压力，尤其是伴有PAH患者PASP下降明显，其次本研究结果显示，经CPAP治疗后的OSAS患者血清ROCK1、ROCK2水平均较治疗前显著降低。

综上所述，OSAS是PAH的危险因素，CPAP治疗能够降低OSAS患者肺动脉压力和血清ROCK1、ROCK2水平，ROCK2可能在OSAS患者PAH形成过程中发挥重要作用。但本研究样本量过小，有待进一步深入研究。