肺炎支原体抗体联合降钙素原对小儿支原体肺炎感染的诊断价值

许 铖，路 燕，徐 明，朱美君，赵晓冬，杨小红

(江苏省南通市第一人民医院儿科，江苏 南通 226001)

肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，MP)是儿童呼吸道感染的常见病原菌，也是引起肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)的主要病原菌[1]。发热和咳嗽是其临床主要表现，难以根据症状与其他疾病区分，而MPP若治疗不及时可进一步累及皮肤、耳部等肺外病变，并且有些MP会发生耐药突变，加大治疗难度。因此MP的早期诊断和治疗对患儿而言具有重要意义。目前，MP诊断主要通过血清学MP-IgM抗体检测，但其有一定不足之处，往往需感染1周后才能较为准确地检测，早期检测漏诊率较高。近年来研究发现，降钙素原(procalcitonin，PCT)在机体发生MP感染时会出现改变，对MP感染的诊断有一定的应用价值[2]。但目前关于PCT诊断MP的报道较少，而MP抗体联合PCT诊断MP尚未在国内发现相关报道。因此，笔者通过检测分析MP抗体联合PCT在小儿MP的诊断价值和肺炎支原体耐药突变位点，旨在为临床MP早期诊断和治疗提供新的依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2017年2月至2019年12月江苏省南通市第一人民医院儿科住院的肺炎支原体肺炎患儿120例作为观察组，男58例，女62例，年龄1岁5个月～9岁，平均年龄(5.36±1.92)岁。纳入标准：①均符合《诸福棠实用儿科学》中对支原体肺炎的诊断标准；②发病3d内入院治疗。排除标准：①先天性免疫缺陷或自身免疫性疾病者；②严重结核病者；③结缔组织疾病者。另选取同期在本院进行体检的120例健康儿童作为对照组，男56例，女64例，年龄1岁6个月～9岁，平均年龄(5.46±1.86)岁。两组研究对象性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，家属对研究知情同意，并签署知情同意书。

1.2研究方法

1.2.1仪器和试剂

Modular Analytics E170型自动电化学发光免疫分析仪购自瑞士罗氏公司，PCT试剂盒购自北京莱博奥科技有限公司，其他试剂均购自生工生物工程(上海)股份有限公司。MP抗体诊断试剂盒购自日本富士瑞必欧株式会社。

1.2.2标本采集及PCT检测

入院当天或次日清晨抽取空腹静脉血2mL，置于EDTA-K 2抗凝管，离心机加速离心后，分离血清，置于-80℃冷冻保存，用于PCT检测，操作严格按照试剂盒说明书进行；入院当天或次日清晨、病程第1周、第2周，抽取患儿空腹静脉血3mL，置于普通生化管中，用于肺炎支原体抗体检测。

1.2.3 MP抗体被动凝集法检测

取MP抗体试剂盒，采用被动凝集法检测血清MP抗体(IgG、IgM、IgA)，严格按照说明书进行操作，最后在平板观测器上读取凝集图像。

1.2.4 MP耐药基因检测

入院后24h内采用无菌咽拭子采集咽后壁样本，利用PCR结合Taq-man荧光探针技术进行核酸检测，检测结果MP抗体阳性者，采用PCR结合Taq-man荧光探针技术对耐药突变位点进行检测，设计23SrRNA基因突变位点引物探针，检测23SrRNA基因2063、2064位点突变情况(A2063G、A2064G突变是MP耐大环内酯类药物的主要机制)。

1.3阳性判断标准

MP抗体判断以MP-Ab滴度≥1∶160为阳性，PCT判断以PCT≥0.05ng/mL为阳性，联合诊断阳性以1个或1个以上的指标阳性为标准。观察组MP抗体、PCT判断阳性时为真阳性(TP)，判断阴性时为假阴性(FN)，对照组MP抗体、PCT判断阳性时为假阳性(FP)，判断阴性时为真阴性(TN)。

1.4统计学方法

2结果

2.1观察组和对照组MP抗原检查结果比较

观察组患儿中MP抗体检查阳性者(MP-Ab滴度≥160)94例(78.33%)，对照组阳性者8例(6.67%)；观察组患儿中MP抗体检查显示阴性者(MP-Ab滴度≤80)26例(21.67%)，对照组阴性者112例(93.33%)，比较发现观察组阳性率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=126.104，P<0.05)，见表1。

表1 观察组和对照组MP抗原检查比较[n(%)]Table 1 Comparison of detection results of MP antigen of the children between the observation group and the control group[n(%)]

2.2 PCT检测结果分析

观察组PCT水平高于对照组，差异有统计学意义(t=31.882，P<0.05)；观察组患儿中PCT检查阳性者89例(74.17%)，对照组阳性者22例(18.33%)；观察组患儿中PCT检查阴性者31例(25.83%)，对照组阴性者98例(81.67%)，比较发现观察组阳性率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=75.240，P<0.05)，见表2。

表2 观察组和对照组PCT水平及检测结果比较Table 2 Comparison of PCT levels and positive and negative detection rates of the children between the observation group and the control

2.3 MP抗体联合PCT检测在小儿支原体肺炎感染中的诊断价值

MP抗体联合PCT检测小儿支原体肺炎感染灵敏度为92.50%、准确度为94.58%，显著高于MP抗体、PCT单一检测(χ2值分别为9.667、10.401、14.520、28.107，P<0.05)；联合检测的特异度为96.67%、阳性预测值为96.52%，显著高于PCT单一检测(χ2值分别为13.976、14.815，P<0.05)；联合检测的阴性预测值为92.80%，显著高于MP抗原单一检测(χ2=7.704，P<0.05)，见表3。

表3 MP抗体联合PCT检测在小儿支原体肺炎感染中的诊断价值[%(n/N)]Table 3 Diagnostic value of combined detection of MP antibody with PCT for MPP in children[%(n/N)]

2.4 MP对大环内酯类药物耐药检测

120例患儿经引物探针检测23SrRNA基因2063、2064位点突变情况，显示56例(46.67%)存在耐药基因。

3讨论

3.1 MP抗体检测小儿支原体肺炎感染的诊断价值

MP属于病毒与细菌之间的一种病原体，能在体外生存和进行DNA复制，对环境要求较低，有氧、无氧均能生长。MP与人体某些组织的抗原相同，产生的抗体会对人体自身免疫造成损害，而且MP可引起葡萄糖发酵，生成乳酸和过氧化物酶，造成组织器官损伤，进一步发展可引起呼吸窘迫或多脏器受累等情况，严重影响患儿身体健康[3]。因此为减轻MP对患儿的伤害，避免诊断不及时对治疗的延误，MP感染需尽早确诊。目前，临床最常用的诊断方法有核酸检测、MP培养及血清学抗体检测等，其中核酸检测敏感性较高，时间较快，但易受空气污染，对检测实验室的要求较高；而MP培养是以往确定MP感染的“金标准”，但检验周期较长，检验条件严苛。MP抗体检测是通过免疫学方法检测机体中的IgM、IgG等抗体，实用性更好，但仍有一定限制性，常需在感染MP后7～10d才能检测出。本研究中MP抗体检查结果显示，观察组阳性(MP-Ab滴度≥160)率显著高于对照组，对MP感染诊断的灵敏度为78.33%、特异度为93.33%、阳性预测值为92.16%、阴性预测值为81.16%、准确度为85.83%，提示MP抗体检测的灵敏度较差，因此，小儿MP感染的诊断仍需进一步完善。在MP抗体检测时临床采集血液标本需把握好最佳时间段，小儿MPP急性期或起病时间较短均无法检测出抗体阳性，且发病后10～20d内，抗体水平可达到顶峰，抗体种类为IgM早期抗体，后期30d之后再度升高抗体一般为IgG抗体，因此在初期检查为阴性后仍需进行复查[4]。

3.2 MP抗体联合PCT检测小儿支原体肺炎感染的诊断价值

PCT属于非甾体类抗炎物质，正常情况下血清中PCT含量极低或不存在，但当机体受到病原菌感染时，可在短时间内大量生成，因此，PCT检测近年来成为一种新兴实验室检测指标。以往认为PCT可用于鉴别诊断细菌性和非细菌性肺炎，但无法鉴别病毒和肺炎支原体感染。但近年来报道显示，PCT检测对支原体肺炎和细菌性肺炎的早期鉴别诊断有益[5]。本研究中PCT检查结果显示，观察组阳性率显著高于对照组，对MP感染诊断的灵敏度为74.17%、特异度为81.67%、阳性预测值为80.18%、阴性预测值为75.97%、准确度为77.92%，提示PCT虽然对MP感染诊断有一定价值，但价值有限。有学者在关于细菌性肺炎、支原体肺炎和病毒性肺炎患儿研究中表示，PCT在支原体肺炎和病毒性肺炎中差异无统计学意义，但PCT联合白细胞、C反应蛋白可提高支原体肺炎的诊断率[6]，故推断PCT与其他诊断方式联合有提高诊断率的作用。本研究中MP抗体联合PCT检测小儿支原体肺炎感染灵敏度为92.50%、准确度为94.58%，显著高于MP抗体、PCT单一检测；联合检测的特异度为96.67%、阳性预测值为96.52%，显著高于PCT单一检测；联合检测的阴性预测值为92.80%，显著高于MP抗原单一检测。提示MP抗体联合PCT检测效能优于单一检测，同时也能更好的指导临床正确用药。

3.3 MP对大环内酯类药物耐药性

MPP是由MP感染引起的一种难治性疾病，常规的青霉素等抗菌药物对其治疗效果非常有限。大环内酯类药物是治疗MP的最有效药物，但有些MP的23SrRNA基因A2063G、A2064G会发生突变，使MP产生耐药性，治疗效果减弱，患儿病程延长，住院时间增加，并发症发生率升高，不利于MPP的治疗[7]。因此为减轻MP耐药性对治疗的影响，可通过明确大环内酯类药物在MP作用靶点的基因突变，予以针对性治疗。本研究中对120例患儿23SrRNA基因2063、2064位点突变情况进行检测，显示56例(46.67%)存在耐药基因，与以往学者研究结果一致[8]。一般认为耐药性的产生与抗生素作用靶点突变、酶性失活等有关，而服用大环内酯类药物可能会诱导药物作用靶点突变，产生耐药性。

综上所述，MP抗体、PCT对MPP的诊断具有参考意义，且MP抗体联合PCT检测能提高小儿MPP感染的诊断率，临床应用价值较高。