lncRNA AK09679联合血浆骨形成蛋白-7与转化生长因子-β1用于预测早产儿支气管肺发育不良的价值

蔡 蕊，卓泽勇，陈 明

(东莞市东部中心医院新生儿科，广东 东莞 523000)

支气管肺发育不良(BPD)是临床早产儿常见的一种慢性肺部疾病，随着临床医学和新生儿ICU技术的不断更新，显著提升了早产儿存活率，特别是极低出生体质量儿以及极早早产儿[1]。早产儿目前在国内有较高的发生率，占比9.9%左右，居世界第二位[2]。早产儿BPD发生率也随之增长，胎龄在28周以下的早产儿BPD发生率在40%左右[3]。患儿发病初期需长时间住院，随着发病时间的延长，会由于发生呼吸系统疾病再入院治疗，再入院大部分患儿会合并神经系统损害，不仅会在一定程度上影响生长发育，同时还会降低生活质量。及早预测高风险的BPD早产儿对预后改善十分关键。然而现阶段临床中针对此种疾病尚未有预测方案。多项临床研究显示，多种脏器纤维化中，Smads信号转导通路起到显著作用，此通路形成过程中骨形成蛋白-7(BMP-7)和转化生长因子-β1(TGF-β1)是不可或缺因子，均参与了肺损伤[4]。还有临床小鼠研究提示，在高体积分数氧诱导小鼠BPD组织内，lncRNA AK096792水平较高，而小鼠和人体均存有lncRNA[5]。该指标在血液中稳定性较高，可抑制核酸核酶降解，能够作为早产儿BPD的诊断标志物。因此选择了本院新生儿ICU收治的74例早产儿为研究对象，针对lncRNA AK09679联合BMP-7与TGF-β1用于预测早产儿BPD的临床价值进行了研究。

1 资料与方法

1.1一般资料：选择2018年6月～2020年8月本院新生儿ICU收治的74例早产儿为研究对象，按照早产儿BPD诊断标准分成44例的非BPD组和30例BPD组。入组标准：所有患儿全部与相应诊断标准相符，即美国国立卫生研究院联合 BPD 研究小组2000年6月发布的标准[6]，氧气依赖超过28 d(超过210 ml/L)新生儿；胎儿胎龄28～32周(不含32周)，出生体重在1 500 g以下；出生后24 h内转入新生儿ICU。排除标准：先天性疾病患儿；存活时间不超过28 d患儿。患儿家属均同意本次研究，且获得院内伦理委员会批准。非BPD组男22例，女22例；胎龄28～31周，平均(29.31±0.74)周；出生体重1 334～1 450 g，平均(1 381.36±107.11)g；剖宫产32例，自然分娩12例。非BPD组患儿男16例，女14例；胎龄29～31周，平均(30.1±0.59)周；出生体重1 334～1 450 g，平均(1 381.36±107.11)g；剖宫产18例，自然分娩12例。两组一般资料对比,差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法：在患儿出生第1天、第7天、第14天采集患者1 ml动脉血，置入肝素抗凝管内储存，标本采集30 min后在4 ℃环境下以2 000 r/min的速度离心处理15 min，将上层血浆取出后储存于-80 ℃冰箱内。选择酶联免疫吸附法按照相应试剂盒说明对血浆BMP-7、TGF-β1水平进行检测。患儿出生时采集2～5 ml，放于血清分离管，以3 000 r/min的速度离心处理15 min，之后储存于-70℃冰箱内。将血清取出后置入Trizol，振荡后在室内温度下放置10 min，根据相应试剂盒要求提取RNA和开展qPCR反应，10 μl为反应体系，置入384孔板内进行。反应条件：预变性(95 ℃)2 min，变性(95 ℃)15 s，退火(56 ℃)15 s，延伸(72 ℃)1 min，循环40，溶解曲线分析。在各个样品中，设置重复对照孔三个。通过Genbank 数据库查询引物全长序列，其中AK096792下游引物CCTCCTTCTGCTCCTCTCAG，上游引物CCAGTCCGCTTCGCTATCTA；亲环蛋白A基因下游引物TCGAGTTGTCCACAGTCAGC，上游引物TTCATCTGCACTGCCAAGAC。

1.3观察指标：记录患儿出生第1天、第7天、第14天血浆BMP-7、TGF-β1水平以及脐带血中lncRNA AK096792表达水平。

2 结果

2.1不同时间患儿血浆TGF-β1水平比较：与非BPD组相比，BPD组出生第1天、第7天、第14天的血浆TGF-β1水平均较高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同时间血浆TGF-β1水平对比

2.2不同研究患儿血浆BMP-7水平对比：与非BPD组相比，BPD组出生第1、7、14d的血浆BMP-7均较高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同时间患儿血浆BMP-7水平对比

2.3不同时间患儿脐带血lncRNA AK096792表达水平对比：与非BPD组脐带血lncRNA AK096792表达水平[(104.25±20.49)%]相比，BPD组[(486.39±279.63)%]均更高，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

早产儿常见严重疾病之一为BPD，主要以肺组织纤维化和受损后异常修复、肺微血管和肺泡发育异常、肺发育不成熟等为临床特征，而纤维化占比较高，而诱发该疾病的主要因素为遗传、炎性反应、感染、氧化应激反应、机械通气损伤等[7-8]。

现阶段引起纤维化最重要的细胞因子之一为TGF-β1。相关临床研究显示，急性呼吸窘迫综合征发病过程中，早产儿在出生第3天时，TGF-β1水平会升至峰值，并在第7天时逐渐恢复至正常水平，这就说明该细胞因子在早期肺损伤过程中起到一定作用[9]。部分研究显示，早产儿发生BPD后，其TGF-β1水平在早期肺泡灌洗液中显著提升，且和BPD呈相关[10]。还有临床研究提示，在TGF-β1在正常新生鼠肺组织中水平显著低于BPD模型新生鼠，显示此种细胞因子会对BPD起促进作用[11]。本研究结果中，和非BPD组血浆TGF-β1水平相比，在出生第1天、第7天、第14天的BPD组水平均较高。虽然在第7天出现下降情况，但是之后又出现了上升情况。出现肺损伤后，肺组织细胞膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体会与TGF-β1相结合，加强磷酸化Smad2/3，并和Smad4产生作用，以生成活性高的转录复合物，进入细胞核内对相应基因转录情况进行有效调节。

在TGF超家族中，最大蛋白家族为BMP，在肺过敏性炎性反应中，BMP-7起显著作用。相关小鼠研究显示，BMP-7水平下降可加重肝纤维化，说明BMP-7具有抗纤维化功能[12]。丝氨酸/苏氨酸激酶受体之一为BMP-7受体，提高Smad 6、7以控制Smads蛋白水平，进而阻止Smad2/3磷酸化，产生Smad 4以阻碍TGF-β1转导信号。多项研究提示，脏器纤维化中BMP-7水平会显著降低[13]。本研究结果说明BPD有BPM-7参与，出生7天后会升至峰值，能够有效预测BPD的发生。早产儿早期出现肺损伤后，保护因子包括BMP-7，其水平升高会对机体起到保护作用，并与Smad4竞争性结合，调节TGF-β1，并抑制其水平提高。因此BPD患儿在出生第7天时，BMP-7高于第1天，TGF-β1下降。而肺损伤的加重且BMP-7无法调节时，TGF-β1会提升，对受损肺组织起修复作用，此外还会阻止BMP-7表达，因此BPD患儿出生第14天会出现BMP-7下降、TGF-β1上升，最终产生BPD。这一结果与本研究结果较相似。

早产儿BPD至今仍未明确发病机制，然而多项临床研究证实，肺发育中lncRNA起到显著作用[14]。CDC6基因可通过lncRNA_MALAT1起到抗凋亡作用，抗肺泡上皮细胞死亡，抵抗BPD发病。多条lncRNA可通过Foxa2、Gata6对NKx2.1、视黄酸、Wnt进行调控，进而影响肺部发育。有临床研究发现，可通过BPD和lncRNA AK096792的联系预测BPD的发生[15]。本次研究结果。说明BPD发病中lncRNA AK096792可能参与其中，还可能和BPD严重程度密切相关。

综上所述，lncRNA AK09679、血浆骨形成蛋白-7与转化生长因子-β1与早产儿BPD的发生密切相关，对预测早产儿BPD临床价较高。