基于肌腱重塑途径探讨富血小板血浆对兔肩损伤模型修复的机制

支 芳，林星镇，吴星星

(1.江西中医药大学附属洪都中医院，江西 南昌 330000；2.南昌市进贤县七里卫生院，江西 南昌 331713)

肩袖损伤多因肩袖的退变、撞击、供血原因等原因造成[1]，其中肌腱腱性损伤是最常见的原因[2]，其临床表现为肩关节的疼痛和功能障碍[3-4]，给患者造成长期痛苦[5-7]。 肌腱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维的表达调控细胞基质重塑[8]，可作为评判肌腱损伤患者恢复状况的重要指标，对评价肌腱受损及修复程度有重要意义[9]。富血小板血浆(PRP)是近年来新兴的再生医学领域技术[10-11]，因含大量生长因子，成为修复关节软骨缺损的新方向。本实验通过研究腱性组织细胞基质中Ⅰ型、Ⅲ 胶原表达，探讨PRP通过调控细胞基质重塑修复肩袖损伤腱性的效应机制，为PRP治疗肩袖损伤腱性修复机制奠定基础。

1 资料与方法

1.1一般资料:实验符合医学伦理学标准。对照组造模成功大白兔6只不予处理(空白组)；实验组取造模成功大白兔6只给予1 ml PRP关节腔注射，8周后检查；PRP+组织基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1组取造模成功大白兔6只给予PRP(0.5 ml)+TIMP-1(0.5 ml)关节腔注射，8周后检查。本次研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2药物选择:选用Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白高效抑制剂TIMP-1，抑制Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的合成和分泌。

1.3免疫染色检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的情况:采集的肩袖肌腱组织样品以10%甲醛固定，常规石蜡组织包埋，切片行HE染色，使用免疫酶细胞化学技术法，将酶标记的抗体与肌腱组织作用，然后加入酶底物，再对组织内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的进行检测。

1.4MRI扫描:对兔肩关节进行MRI扫描。使用2 ml/kg的10%水合氯醛于耳缘静脉麻醉后使用3.0T磁共振成像(MRI)扫描系统对经过治疗的肩袖组织进行扫描。获取矢状位和冠状位T1加权和T2加权的质子密度图像。通过计算得到该层面的平均信号强度以及肌腱损伤百分比。

2 结果

2.1免疫组化染色检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白:Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白在PRP+TIMP-1组中阳性面积占比最多，PRP+TIMP-1效果明显优于空白和单独使用PRP。见表1。

表1 Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白染色各组阳性面积占比

2.2MRI扫描肩袖损伤修复情况：平均信号强度、肌腱损伤百分比在PRP+TIMP-1组中分别占比最高及最低，见表2。

表2 MRI扫描平均信号强度和肌腱损伤

3 讨论

肩袖损伤是临床常见病和多发病[12-14]。肩袖损伤大多因肩袖的退变、创伤、撞击、供血等多种原因造成，其中肩袖肌腱腱性损伤是最常见的原因，其主要临床表现为肩关节的疼痛和功能障碍[15-17]。临床研究表明，PRP可促进组织修复。PRP技术是近年来新兴的再生医学领域技术[18]，因含大量生长因子，成为修复关节软骨缺损的新方向[19]。

本文实验结果发现Ⅰ型、Ⅲ胶原蛋白在PRP+TIMP-1组的表达是最明显的，而且Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维是肌腱组织所含胶原的主要类型。Ⅰ型胶原的含量可占到整个肌腱组织胶原的 95%以上，占肌腱组织干重的65%～80%，Ⅲ型胶原含量则低于3%。Ⅲ型胶原的含量与肌腱受损程度呈正相关，而Ⅰ型胶原含量与其呈负相关。因此，肌腱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维的表达调控细胞基质重塑，可作为评判肌腱损伤患者恢复状况的重要指标，对评价肌腱受损及修复程度具有重要意义。通过MRI扫描发现，使用PRP+TIMP-1肌腱受损情况得到明显改善，可以观察到修复非常有效。

总之，PRP能够调控基质重塑促进兔肩袖损伤模型肌腱修复，为治疗肩袖损伤提供新的非手术治疗方法，同时也为PRP治疗肩袖损伤腱性修复机制进一步奠定基础。