血清25-羟维生素D、CD4+、CD8+水平与肺炎支原体感染后喘息的相关性

赵 帅，何小刚，买 萍

肺炎支原体(MP)是儿童、老年人呼吸道感染的病原体之一，MP感染后易发生喘息，临床常见约有42%的喘息发作与MP有关[1]。有研究报道，血清25-羟维生素D[25-(OH)D]减少时可能引起不同程度的哮喘、肺炎等疾病[2]。MP通过在气道上皮细胞聚集、繁殖，同时释放多种炎症因子，参与免疫应答，气道上皮因此出现炎症反应，引起气道高反应性和慢性炎症，因此导致喘息出现。目前对感染MP后是否发生喘息，有25-(OH)D检测以及外周血CD4+、CD3+、CD8+水平检测可以预测[3]。但目前探究25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+水平与MP感染后是否发生喘息的相关性分析仍然较少，对MP感染后发生喘息的相关危险因素也不够丰富。因此，本研究结合了MP感染后发生喘息的相关危险因素，探讨了25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+水平与MP感染后发生喘息的相关性，旨在为临床后续防治喘息提供有效参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2019年1月至2021年1月我院确诊的MP感染患者120例，其中男59例，女61例。纳入标准：符合《医院获得性肺炎诊断和治疗指南》[4]中的相关MP感染诊断标准，临床资料及影像学资料完整。排除标准：严重肝、肾、心功能障碍者；既往存在喘息发作史或哮喘史者；合并其他系统原发性恶性肿瘤；合并其他感染性疾病者。依据MP感染后是否存在喘息症状将其分为对照组78例和观察组42例。观察组男23例，女19例；对照组男36例，女42例。

1.2 观察指标:收集并记录所有患者性别、年龄、病程等一般资料，以及咳嗽、发热、肺部啰音等一般情况。患者均在我院确诊后48 h内进行检测。抽取2组患者空腹静脉血3～5 mL，用酶联免疫分析试剂盒[上海谷研，GOY -(elisa)-14606]测定C反应蛋白(CRP)水平，经酶联免疫分析试剂盒(上海心语生物科技有限公司，CYP24A1)测定25-(OH)D水平，用Biomatik 酶联免疫试剂盒(加拿大，EKC01126)测定MP免疫球蛋白(IgM)抗体滴度。采集2组患者空腹静脉血3～5 mL，按照美国Maestro Z血细胞分析仪的操作要求，确保仪器每日质控在控，标本接收后1 h内检测完毕，检测白细胞(WBC)、中性粒细胞(N)、嗜酸性粒细胞(E)。

利用流式细胞检测仪检测CD4+、CD3+、CD8+水平。用EDTA抗凝管采集患者空腹静脉血5 mL，进行红细胞裂解后，离心(1 000 r/min，5 min)，弃上层清液，加入5 μl荧光标记抗体anti-human CD3 FITC、CD4 APC、CD8 PE，保持室温，孵育20 min并离心(1 000r/mim，5 min)，弃上清液，PBS重悬，取200 μl，利用流式细胞检测仪(上海然哲仪器设备有限公司)分析T淋巴细胞亚群。

2 结果

2.1 2组患者发生喘息的临床特征比较：MP感染后喘息与患者的年龄、性别、发热、CRP浓度、WBC、N、E数量无相关性(P>0.05)，与患者的病程、咳嗽、肺部啰音、IgM抗体滴度有相关性(P<0.05)，见表1。

表1 2组患者临床特征情况比较[n(%)]

2.2Logistic回归分析影响肺炎支原体感染后喘息的独立危险因素:筛选2.1中影响MP感染后喘息的差异变量进行二分类Logistic回归分析，检验水准α=0.05。病程<7d=0，病程≥7d=1；无咳嗽=0，有咳嗽=1；无肺部啰音=0，有肺部啰音=1；IgM抗体滴度1∶80=0，IgM抗体滴度1∶160/1∶320=1。Logistic回归分析显示，病程≥7 d、IgM抗体滴度1∶160/1∶320为MP感染后发生喘息的独立危险因素(P<0.05)，见表2。

表2 MP感染后喘息的Logistic回归风险预测模型

2.3 2组患者血清25-(OH)D和外周血CD4+、CD3+、CD8+水平比较:观察组25-(OH)D、CD4+、CD3+明显高于对照组，CD8+明显低于对照组(P<0.05)，见表3。

表3 2组患者25-(OH)D、CD4+、CD8+水平比较

2.4 血清25-羟维生素D、CD3+、CD4+、CD8+水平及三者联合预测MP感染后发生喘息的ROC特征:25-(OH)D、CD3+、CD4+、CD8+联合预测MP患者感染后喘息的AUC为0.875，95%CI为0.811～0.938(P<0.05)，其预测效能明显高于25-(OH)D、CD3+、CD4+、CD8+各项单独预测，见表4。

表4 25-(OH)D、CD4+、CD8+及联合预测MP感染后发生喘息的ROC特征

3 讨论

MP感染可损伤多器官、多系统，主要症状是出现阵发性咳嗽，也有表现为神经系统、心血管系统受损，严重者可出现血尿及溶血性贫血等。MP感染是诱使哮喘出现的一大重要因素，有42%的喘息发作和哮喘与MP有关[5]。对MP感染发生喘息患者的危险因素进行分析有着重要的价值。本研究结果显示，120例MP感染患者中，35.00 %(42/120)存在喘息症状，观察组病程(≥7 d)、咳嗽、肺部啰音率以及肺炎支原体IgM抗体滴度为1∶160，占比均明显高于对照组。本研究主要分析了患者MP感染后发生喘息年龄、性别、病程、发热、咳嗽、肺部啰音、CRP、WBC、N、E、IgM抗体滴度等因素，发现MP感染后发生喘息主要与病程、咳嗽、肺部啰音、IgM抗体滴度有关，其中，病程>7 d和IgM抗体滴度1∶160/1∶320是感染后发生喘息的重要危险因素。既往研究显示，MP感染后发生喘息与病程、病情严重程度等因素有关，这与本研究结论基本相符[6]。原因可能如下，病程持续时间长，患者机体免疫功能逐渐降低，宿主的细胞膜抗体不断变化，导致炎症反应持续发生，无法消退，哮喘发作概率逐渐上升。肺部啰音是指呼吸音以外的附加音，肿胀、痉挛导致支气管狭窄，呼吸时当空气经过狭窄的支气管，便出现肺部啰音。因此，出现肺部啰音患者极大提高了感染MP后出现喘息的概率。咳嗽也预示了气管、支气管黏膜受炎症刺激，咳嗽严重者感染MP后出现喘息的概率同样大大增加。感染MP发生喘息的患者外周血CD4+、CD3+明显升高，CD8+显著下降后，能产生特异性IgM类抗体，一般在感染后1周出现，4周内水平明显提高，因此IgM抗体阳性可作确诊MP的重要指标。且IgM抗体滴度高，说明气道变应性炎症严重，此时喘息容易发生。

本研究结果显示，观察组25-(OH)D明显高于对照组，MP发生喘息后患者外周血CD4+、CD3+明显升高，CD8+显著下降。维生素D是一种活性广泛的激素前体类物质，包含维生素D2及维生素D3。其中25-(OH)D 在血清中含量最高，理化性质最为稳定，因此，25-(OH)D成为检测维生素D水平的指标之一[7]。目前有研究报，道维生素D减少时能够引起不同程度的哮喘、肺炎等疾病，同时，维生素D也有调控炎症反应的作用[8-9]。MP感染后，血液中大量炎性介质被释放，影响内环境稳定状态，改变神经调节功能，因此病情加重，可能出现喘息症状。T淋巴细胞表面抗原CD4+和CD8+相互诱导、制约，对调节免疫平衡和维持稳定有重要作用，各个淋巴细胞亚群之间相互协调、相互制约使机体的免疫维持在平衡状态。MP感染人体后外周血CD4+/CD8+细胞比值失衡，B细胞会大量增殖并产生抗体，抗原抗体反应进一步引起机体病理损伤，肺炎后喘息缓解，血清CD4+、CD3+水平明显升高，CD8+的水平明显降低，因此，可以对肺炎后是否发生喘息起到一定预测作用[10]。本研究结果与以上报道一致，说明了喘息发生，患者有效防御反应下降，这是MP感染后进一步导致广泛机体组织损伤的重要原因之一，也说明25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+的水平与肺炎后发生喘息关系密切。

本研究ROC曲线分析显示，25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+水平联合预测MP感染后喘息的AUC明显高于25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+。既往研究显示，血清25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+联合检测，喘息发生的预测价值明显升高[11]，提示临床在有条件的情况下可通过联合检测25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+水平来评估MP感染后发生喘息的情况，评估患者的病情发展和预后，选择合适的治疗方案，以减少喘息发生，从而提高患者预后。