复方桐叶烧伤油中桐叶麻油两组分同时薄层色谱鉴别*

韩湘云，杨德泉，覃爱桃，徐玉辉

(1.湘西宏成制药有限责任公司，湖南 吉首 416000；2.湘西土家族苗族自治州食品药品检验所，湖南 吉首 416000)

复方桐叶烧伤油载于《国家药品标准新药转正标准》第77册[1]，是由桐叶和麻油组成的土家成药，具有清热解毒，消肿止痛，祛腐生肌的功效，用于面积小于29%的烧烫伤.桐叶为玄参科植物白花泡桐(Paulowniafortunei(Seem.) Hemsl.)的干燥叶.桐叶中含有熊果酸、齐墩果酸、3α-羟基-熊果酸、23-羟基-乌苏酸、2α,3α,23-三羟基-12-烯-28-乌苏酸、2α,3β,19,23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸、2α,3β,19,23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸、2α-羟基-齐墩果酸、棕榈酸、落叶酸、木樨草素、洋芹素、β-谷甾醇、胡萝卜苷、2α,3β,19β-三羟基-乌苏酸-28-O-β-D-吡喃半乳糖苷、3β,28-二羟基-乌苏烷等成分[2-6]，其中桐叶中熊果酸含量居白花泡桐植物其他部位之首[7].麻油为脂麻科植物脂麻(SesamumindicumL.)的成熟种子通过压榨法得到的脂肪油，主要含有芝麻素、芝麻林素、甲氧芝麻素、羟基芝麻素、芝麻明酚、芝麻酚、不饱和脂肪酸、蛋白质等成分[7-13].目前复方桐叶烧伤油标准的鉴别项，采用桐叶作为对照药材进行薄层色谱鉴别，其供试品溶液的制备需采用样品加体积分数0.5%氢氧化钠溶液皂化，过滤，萃取的方法，而样品经皂化后，过滤时间一般需要6～8 h；此外，桐叶对照药材溶液的制备，因需要经历回流、碱化、酸化、萃取等过程，故耗时较长.由此可以看出，当前供试品溶液和对照药材溶液的制备方法均存在制备时间较长等不足之处，且当前的鉴别方法仅可以鉴别处方中的桐叶组分.为优化和完善复方桐叶烧伤油薄层色谱鉴别方法，进一步提高检验工作效率，本研究拟建立同时定性鉴别复方桐叶烧伤油中桐叶和麻油两个处方组分的薄层色谱方法，旨在为复方桐叶烧伤油的质量控制提供一定参考.

1 仪器、试药和样品

1.1 仪器与试药

AUW220D电子天平(日本岛津公司).GoodSee-10型薄层色谱成像仪(上海科哲生化科技有限公司).定量毛细管(美国Orunond Scientigic Co).薄层硅胶预制板分别购于青岛海洋化工有限公司(批号：2021年8月9日，10 cm×20 cm)、青岛海浪干燥剂有限公司(批号：20210701，10 cm×20 cm)和Merck公司(批号：1.05626.0001，10 cm×20 cm).环已烷、乙醚、乙酸丁酯、冰醋酸、甲醇试剂的纯度均为分析纯，水为纯化水.

1.2 实验样品与对照品

1.2.1 实验样品及来源 复方桐叶烧伤油由湘西宏成制药股份责任有限公司提供，批号：20191101；20201003；20210901.

1.2.2 对照品及来源 熊果酸对照品购于中国食品药品检定研究院(批号：110742-201823)，芝麻素对照品购于中国食品药品检定研究院(批号：110742-201823).桐叶对照药材由湘西宏成制药股份有限责任公司提供.

2 方法与结果

2.1 供试品溶液制备

取样品2 mL，加甲醇20 mL，摇振5 min，4 000 r/min条件下离心5 min，取上清液，水浴挥干甲醇，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液.

2.2 对照品溶液制备

2.2.1 对照药材溶液 取桐叶0.5 g，甲醇20 mL，超声处理10 min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加乙醚15 mL溶解，用15 mL水萃取，分取乙醚层，挥干，残渣用甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液.

2.2.2 熊果酸对照品溶液 取熊果酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg熊果酸的溶液，作为对照品溶液.

2.2.3 芝麻素对照品溶液 取芝麻素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg芝麻素的溶液，作为对照品溶液.

2.3 鉴别方法

参照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液2 μL，桐叶对照药材溶液、熊果酸对照品溶液、芝麻素对照品溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷—乙醚—乙酸丁酯—冰醋酸(体积比20∶5∶4∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积分数为10%的硫酸乙醇溶液，110 ℃下烘烤至斑点清晰，于日光下检视(图1).

1—桐叶药材；2—熊果酸对照品；3—芝麻素对照品；4—复方桐叶烧伤油供试液(20191101)；5—复方桐叶烧伤油供试液(20201003)；6—复方桐叶烧伤油供试液(20210901).图1 Merck公司硅胶G薄层色谱板展开结果(温度：18.8 ℃，湿度：46%)Fig. 1 Development Results of Merck Silica Gel G TCL Plate (Temperture:18.8C,Humidity:46%)

结果显示，各斑点分离度好、斑点清晰.供试品色谱与对照药材、对照品色谱在相应的位置上，显相同颜色的斑点.

2.4 耐用性考察

采用青岛海洋化工有限公司和青岛海浪干燥剂有限公司生产的薄层硅胶G板，分别在不同的温度、湿度条件下，按2.3节的方法进行实验，实验结果与2.3节结果一致(图2、图3).

1—桐叶药材；2—熊果酸对照品；3—芝麻素对照品；4—复方桐叶烧伤油供试液(20191101)；5—复方桐叶烧伤油供试液(20201003)；6—复方桐叶烧伤油供试液(20210901).图2 青岛海洋化工有限公司硅胶G薄层色谱板展开结果(温度：24.8 ℃，湿度：52%)Fig. 2 Unfolding Results of Silica Gel G TCL Plate of Qingdao Ocean Chemical Engineering Co.,LTD.(Temperture:24.8C,Humidity:52%)

1—桐叶药材；2—熊果酸对照品；3—芝麻素对照品；4—复方桐叶烧伤油供试液(20191101)；5—复方桐叶烧伤油供试液(20201003)；6—复方桐叶烧伤油供试液(20210901).图3 青岛海浪干燥剂有限公司硅胶G薄层色谱板展开结果(温度：28.8 ℃，湿度：69%)Fig. 3 Unfolding Results of Silica Gel G TCL Plate of Qingdao Hailang Drying Agent Co.,LTD.(Temperture:28.8C,Humidity:69%)

图2、图3显示，在不同品牌硅胶G薄层色谱板、不同温度、不同湿度条件下，不同溶液的薄层色谱结果一致，表明本方法耐用性良好.

3 讨论

复方桐叶烧伤油为油剂，本研究在制备其供试品溶液时，考虑熊果酸和芝麻素均溶于甲醇，故采用甲醇为提取溶剂，经离心处理，分离油脂等成分，取甲醇溶液制备为供试品溶液.本研究在制备桐叶对照药材溶液时，采用桐叶粉末加甲醇超声处理，过滤，滤液蒸干，残渣以乙醚溶解.因熊果酸和芝麻素均几乎不溶于水，故本研究用水萃取除去其中杂质，取乙醚层，挥干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液.方法简便，实验结果显示色谱中主斑点明显，杂质斑点少.

本研究曾试用过4种展开剂：①环已烷—三氯甲烷—乙酸乙酯—冰醋酸(体积比20∶5∶8∶0.5)；②环已烷—氯仿—乙酸乙酯—石油醚(60～90 ℃)(体积比20∶5∶8∶1)；③环已烷—乙醚—乙酸乙酯(体积比20∶5∶2)；④环已烷—乙醚—乙酸丁酯(体积比20∶5∶2).结果发现，①，②，③供试品溶液色谱中芝麻素斑点与相邻斑点未达到完全分离，④熊果酸Rf低于0.1.最终本研究确定采用环已烷—乙醚—乙酸丁酯—冰醋酸(体积比20∶5∶4∶0.1)为展开剂，结果显示，采用此展开剂后，供试品溶液色谱中各斑点分离度好、斑点清晰，且熊果酸Rf为0.45，芝麻素Rf为0.23.

4 结论

本研究建立的复方桐叶烧伤油薄层色谱鉴别方法操作简便、稳定性良好，方法可行.供试品溶液的薄层色谱中，熊果酸、芝麻素与其他成分完全分离，能够同时鉴别处方中桐叶和麻油两个组方成分，为控制复方桐叶烧伤油质量提供了可靠的方法.