理冲颗粒的薄层鉴别方法的建立

侯秋苑，李惠敏，林凤屏，冯白茹，殷蕾，梁可

（1.惠州卫生职业技术学院，广东惠州，516025；2.惠州市药用植物研究与开发重点实验室，广东惠州，516025；3.惠州市食品药品检验所，广东惠州，516025）

0 引言

理冲汤出自清末名医张锡纯所著《医学衷中参西录》上册，由生黄芪、党参、白术、生山药、天花粉、知母、三棱、莪术、生鸡内金九味药材组成，具有益气行血，调经祛瘀之功效［1］。笔者前期研究了理冲颗粒的制备工艺和含量测定方法。为了更有效地控制其质量，本实验对理冲颗粒进行薄层色谱鉴别研究，为理冲颗粒的质量控制提供参考依据。

1 材料

1.1 仪器

KQ-250 超 声 波 清 洁 机；BWS-20 恒 温水槽水浴锅；XS205 分析天平（METTLER TOLEDO）；SL-373 医 药 阴 凉 柜；DHG-9070A电热鼓风干燥箱；薄层硅胶预制板（烟台市化学工业研究所、Merck）；CAMAG REPROSTAR 3薄层数码成像系统（瑞士卡玛公司）。

1.2 试药

理冲颗粒（自制）；理冲颗粒阴性（自制）；黄芪甲苷对照品（北京世纪奥科生物技术有限公司，批号:2001220，纯度≥98%）；三棱对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121521-201905）。水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 黄芪甲苷薄层色谱鉴别

2.1.1 理冲颗粒溶液的制备［2］

取理冲颗粒10g，加4%浓氨的80%甲醇50mL，回流1h，过滤，滤液蒸干，残渣用80%甲醇溶解，定容到5mL 的容量瓶，制成理冲颗粒溶液。

2.1.2 黄芪甲苷对照品溶液的制备［2］

称取黄芪甲苷对照品10mg，加80%甲醇制成每1mL 含0.1mg 的溶液，即得。

2.1.3 理冲颗粒阴性溶液的制备

取不含黄芪的理冲颗粒10g，按“2.1.1”流程制成理冲颗粒阴性溶液。

2.1.4 展开系统的考察［3］

分别吸取理冲颗粒溶液、黄芪甲苷对照品溶液和理冲颗粒阴性溶液各1 ～5μL，分别点于同一块硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）的下层溶液为展开系统Ⅰ［4］、三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下层溶液为展开系统Ⅱ、三氯甲烷-甲醇-水（17:7:2）的下层溶液为展开系统Ⅲ，展开，拿出，自然晾干，再喷适量10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色，置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图1。结果表明，展开系统Ⅱ的展开效果最佳，阴性溶液色谱在相应位置上无干扰，因此选择三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下层溶液为该薄层鉴别的展开系统。

图1 展开系统考察

2.1.5 耐用性考察［5］

（1）不同薄层板的考察。分别吸取理冲颗粒溶液、黄芪甲苷对照品溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL，分别点于3 种不同的硅胶G 板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下层溶液为展开剂，展开，拿出，自然晾干，再喷适量10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色，置于365nm 紫外光灯下检视。结果见图2。结果表明，Merck 板的分离效果优于其他板，但影响不大。

图2 薄层板考察

（2）不同展开温度的考察。分别吸取理冲颗粒溶液、黄芪甲苷对照品溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL，分别点于同一块硅胶G 板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下层溶液为展开剂，在8℃、25℃、32℃的温度下展开，拿出，自然晾干，再喷适量10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色，置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图3。结果表明，展开温度对分离结果影响不大，可选择在室温下展开。

图3 温度考察

（3）不同展开湿度的考察。分别吸取理冲颗粒溶液、黄芪甲苷对照品溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL，分别点于同一块硅胶G 板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下层溶液为展开剂，在相对湿度为32%、58%、88%的湿度下展开，拿出，自然晾干，再喷适量10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色，置于365 nm紫外光灯下检视。结果见图4。结果表明，不同的相对湿度对展开结果影响不大。

图4 湿度考察

2.2 三棱薄层色谱鉴别［6-8］

2.2.1 理冲颗粒溶液和三棱对照药材溶液的制备

取理冲颗粒10g，加乙醇50mL，加热回流1h，过滤，蒸干滤液，残渣用2mL 乙醇溶解，制成理冲颗粒溶液。另取三棱对照药材2g，用相同方法制成三棱对照药材溶液。

2.2.2 理冲颗粒阴性溶液的制备

取不含三棱的理冲颗粒10g，按“2.2.1” 流程制成理冲颗粒阴性溶液。

2.2.3 展开系统的考察

分别吸取理冲溶液、三棱对照药材溶液和理冲颗粒阴性溶液各1～5μL，分别点于同一块硅胶G 薄层板上，以环己烷-丙酮（9.2:0.8）为展开系统Ⅰ，环己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开系统Ⅱ，石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）为展开系统Ⅲ，展开，拿出，自然晾干，置于365 nm紫外光灯下检视。结果见图5。结果表明，展开系统Ⅲ的展开效果最佳，理冲颗粒阴性溶液色谱在相应位置上无干扰。因此石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）为该薄层鉴别的展开系统。

图5 展开系统考察

2.2.4 耐用性考察［5］

（1）不同薄层板的考察。分别吸取理冲溶液、三棱对照药材溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL，分别点于3 种不同的硅胶G 板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，拿出，自然晾干，置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图6。结果表明，不同材料的薄层板对展开效果影响不大。

图6 薄层板考察

（2）不同展开温度的考察。分别吸取理冲溶液、三棱对照药材溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，在8℃、25℃、32℃的温度下展开，拿出，自然晾干，置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图7。结果表明，展开温度对分离结果影响不大，选择在室温下展开。

图7 温度考察

（3）不同展开湿度的考察。分别吸取理冲溶液、三棱对照药材溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，在相对湿度为32%、58%、88%的湿度下展开，拿出，自然晾干，置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图8。结果表明，不同的相对湿度对展开结果影响不大。

图8 湿度考察

以上黄芪甲苷和三棱的薄层色谱结果可说明，本次实验建立的理冲颗粒的薄层色谱鉴别方法分离效果佳，结果可重现，能用于理冲颗粒的鉴别并为理冲颗粒的质量控制提供参考依据。

3 讨论

实验研究中，拟对党参、白术、山药、天花粉进行薄层鉴别，但由于以上四味成分均具有氨基酸成分，阴性样品存在互相干扰情况，因此未再进行深入研究。

实验考察了不同材质的薄层板、温度、湿度对理冲颗粒分离程度的影响，结果表明，供试品在不同环境下的分离程度佳，斑点清晰可见。另对黄芪甲苷对照品溶液、三棱对照药材、理冲颗粒溶液及其阴性溶液的稳定性进行了考察，结果表明，以上溶液在放置96 小时后点样，层析结果和之前一样，由此可见样品稳定性较好。