枳壳HPLC 含量测定中不确定度计算

宁知贵，洪家顺，刘威

（江西省道地药材质量评价研究中心，江西南昌，330029）

0 引言

枳实、 枳壳,为中医临床常用中药。2020 年版中国药典枳壳源于芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL及其栽培变种的未成熟果实,有理气宽中、行滞消胀的功效。枳壳中HPLC 含量测定流程较多，影响结果的因素不能直接判断，对于新手来说，结果的判断准确性就会受到极大的影响。因此，有必要对枳壳中柚皮苷含量测定整个过程进行分析，找出影响不确定度的因素，如实反映检测的置信度和准确性。

1 仪器设备

XSR205DU/A 电 子 天 平（十 万 分 之一），梅特勒-托利多；高效液相色谱仪ACQUITYUPLCH-ClassPLUS， 沃 特 斯 中 国 有限公司；25mL 容量瓶，容量允差：±0.020mL（A 级）， 天 玻；100mL 容 量 瓶， 容 量 允 差：±0.04mL（A 级），天玻；10mL 吸量管，容量允差：±0.010mL（A 级），天玻；50mL 吸量管，容量允差：±0.010mL（A 级），天玻。

2 测量不确定度来源

2.1 色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（20:80）（用磷酸调节pH 值至3）为流动相；检测波长为283nm。

2.2 对照品溶液的制备

取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL 含80μg 柚皮苷的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品粗粉约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1.5 小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10mL 置25mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.4 测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得，含量为7.68%。

3 计算模型

3.1 不确定度来源

如图：

3.2 数学模型

柚皮苷含量R按下式计算结果为：

式中，A 样：样品中柚皮苷峰面积；A 对：对照品中柚皮苷峰面积；mx：样品的称样量，mg；Vx1：样品第一次吸取体积，mL；Vx2：样品吸取体积，mL；Vx3：样品第二次定容体积，mL；ms：对照品的称样量，mg；Vs1：对照品第一次定容体积，mL；根据不确定度传律公式得出：

根据测定过程中各个不确定度分量的评定，计算出测定过程中的不确定度，并评估合成标准不确定度和扩展不确定度。由于目前尚无有证标准物质可用于评价化验室的操作，因此所有可能的影响因子均需考虑，如对照品的定容、样品的称量、样品的定容等，得出不确定度数学模型：

3.3 不确定度主要来源

经过对上面公式的分析，样品含量测定的不确定度主要由下面几个方面组成：

被测样品的重复性引入的不确定度U(C02)；被测样品称取引入不确定度Umx；被测样品的定容引入不确定度UVx1、UVx2；被测样品吸取引入不确定度UVx3。

对照品的重复性引入的不确定度U(C01)；对照品称取引入不确定度Ums；对照品的定容引入不确定度UVs1；仪器测定引入不确定度UE。

4 计算A 类不确定度

4.1 测试对照品的重复性引入的不确定度U(C01)

表1 对照品重复性引入数据

如上表，对照品重复性引入的不确定度U(C01)：

4.2 测试样品的重复性引入的不确定度U(C02)

如下表， 样品重复性引入的不确定度U(C01)：

表2 测试样品重复性引入数据

实验重复性测量引入的不确定度为A 类不确定度，表示如下：

5 计算B 类不确定度

5.1 对照品配制引入不确定度UMs

5.2 被测样品的定容引入不确定度UVx

温度引入不确定度：实验室的温度在标准规定范围内，因此因温度控制不充分而产生的标准不确定度可以忽略不计。

50mL 移液管经校准，已知在20℃时，体积最大误差为±0.010mL，按则引入的标准不确定度：

10mL 移液管经校准，已知在20℃时，体积最大误差为±0.010mL，按均匀分布，则引入的标准不确定度：

5.3 仪器测定引入不确定度UE

ACQUITYUPLCH-ClassPLUS 高效液相色谱仪经检定，定量重复性为0.7%，按均匀分布，则引入的标准不确定度：

5.4 其它

由对照品含量引起的相对标准不确定度,对照品说明书中没有报告含量的允差极值，故忽略不计。

6 合成不确定度

6.1 不确定度分量

表3 不确定度分量表

6.2 合成相对标准不确定度

将上述数据合成得枳壳含量测定结果的相对标准不确定度：

6.3 合成标准不确定度

实验测得柚皮苷含量测定结果为7.68%，则测量结果的合成标准不确定度：

7 扩展不确定度

取扩展因子k=2，则扩展不确定度为

8 测量结果

柚皮苷含量测定以R表示为R=7.68%

该样品的被测量之值为Y=(7.68%±0.035%，k=2)g/g，其中扩展不确定度U=0.035%是由合成不确定度U(R)=0.01732%乘以包含因子k=2得到。