核桃楸皮的化学成分研究

付起凤，魏砚君，方振兴，刘艳，刘源，张晓娟，罗雨萌，周媛媛✉

（1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江省科学院火山与矿泉研究所，黑龙江 五大连池 164155）

核桃楸（Juglans mandshuricaMaxim）又被称为山核桃、胡桃楸、小核桃等，为胡桃科胡桃属落叶乔木，其根、皮、叶和种子都有一定的药用价值，其中对核桃楸皮（barks ofJuglans mandshuricaMaxim）的研究和应用最多［1］。核桃楸是由核桃楸树皮、枝皮和果皮经干燥而成，味苦、性寒，具有清热、解毒、明目、止痢、止带等功效［2−4］。现代药理研究发现，核桃楸皮中含有丰富的化学成分，包括醌类、黄酮类、二芳基庚烷类、酚酸类等［5］，具有良好的抗菌、抗肿瘤、镇痛等多种药理活性［6－7］。研究表明，核桃楸皮可用于各种肿瘤疾病的治疗，且效果显著［8－9］。为进一步开发利用此药用资源，笔者对核桃楸皮进行系统的成分分离，从中共分离得到12个化合物。

1 仪器与材料

Bruker－400 型超导核磁共振光谱仪（美国BRUKER）；Q－Tof（ESI）LC/MS 6530高分辨质谱仪（美国Agilent）；515－2414半制备型高效液相色谱（Waters公司）；AgilentEclipse XDB－C18半制备色谱柱（9.4 mm ×250 mm，5 μm）（美国Agilent 公司）；EYELAN－1100 旋蒸仪（东京理化公司）；DTC－22隔膜真空泵（东京理化公司）；硅胶填料（200～ 300 目，青岛海洋化工厂）；ODS反相硅胶填料（日本YMC）；预制薄层板GF254（青岛海洋化工厂）；其他试剂均为分析纯。

核桃楸皮采自黑龙江省牡丹江地区张广才岭，经黑龙江中医药大学药用植物学教研室苏连杰教授鉴定为胡桃楸（Jugland mandshuricaMaxim）的干皮。标本（20191022）保存于黑龙江中医药大学药学院中药化学教研室。

2 提取分离

核桃楸皮干燥药材5.5 kg，适当粉碎，90%乙醇10 L 加热回流提取3 次，每次2.5 h，合并过滤液并回收乙醇得到浓缩浸膏。用水将浸膏捏溶后，分别用等体积的石油醚、二氯甲烷、正丁醇依次萃取至有机相近无色，取石油醚部位60 g，通过硅胶柱色谱分离，以石油醚－乙酸乙酯（1∶0→0∶1）梯度洗脱，得到Fr.A～Fr.D，其中流分Fr.A经硅胶色谱柱以石油醚－乙酸乙酯（20∶1）等度洗脱以及重结晶得到化合物7（38 mg），Fr.C 经硅胶色谱柱以石油醚－乙酸乙酯梯度洗脱（20∶1→5∶1），洗脱后得到化合物8（6.3 mg）；取二氯甲烷部位55 g，同上以硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷－甲醇（1∶0→0∶1）梯度洗脱，得到Fr.E～Fr.I，其中流分Fr.F 经硅胶柱色谱以二氯甲烷－甲醇（15∶1）等度洗脱得到化合物9（9.2 mg）；正丁醇部位55 g，以二氯甲烷－甲醇（15∶0→0∶1）梯度洗脱，得到Fr.J～Fr.O，其中流分Fr.J通过硅胶柱色谱分离，以氯仿－甲醇（15∶0→0∶1）梯度洗脱，重结晶得到化合物10（4.3 mg）、化合物11（6.6 mg）、化合物12（5.1 mg），流分Fr.N 通过ODS柱色谱以甲醇－水（10%→90%）梯度洗脱并取30%部位以半制备HPLC 分离得到化合物5（3.5 mg）、化合物6（3.0 mg），70%部位以半制备HPLC 分离得到化合物1（2.2 mg）、化合物2（2.5 mg）、化合物3（2.8 mg）和化合物4（2.1 mg）。

3 结构鉴定

3.1 化合物1

黄色无定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：445.193 3［M+H］+，推测分子量为444。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.30（1H，dddd，J=3.8，4.6，6.5，13.6 Hz，H－3a），2.33（1H，dddd，J=2.2，4.6，8.9，13.6 Hz，H－3b），2.45（1H，ddd，J=4.6，6.5，17.6 Hz，H－2a），2.88（1H，ddd，J=4.6，8.9，17.6 Hz，H－2b），3.36（1H，m，H－2′），3.38（2H，dd，J=2.4，7.2 Hz，H－3′，4′），3.62（1H，m，H－5′），4.40（1H，d，J=7.6 Hz，H－1′），4.45（1H，dd，J=7.2，11.6 Hz，H－6′a），4.67（1H，dd，J=2.2，11.6 Hz，H－6′b），7.98（2H，d，J=8.8 Hz，H－2″，6″），6.80（2H，d，J=8.8 Hz，H－3″，5″）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：200.5（C－1），35.4（C－2），30.9（C－3），76.2（C－4），130.2（C－5），134.4（C－6），129.0（C－7），127.5（C－8），132.7（C－9），143.8（C－10），103.3（C－1′），75.4（C－2′），78.2（C－3′），72.7（C－4′），75.6（C－5′），65.3（C－6′），122.4（C－1″），132.8（C－2″，6″），116.6（C－3″，5″），163.4（C－4″），167.9（C－7″）。以上数据与文献［10］对照基本一致，鉴定化合物1 为（4S）－4－羟基－α－四氢萘酮－4－O－β－D－（6′－O－4″－羟基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷。

3.2 化合物2

黄色无定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：483.174 9［M+Na］+，推测分子量为460。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.15（1H，tt，J=4.2，12.8 Hz，H－3a），2.38（1H，dt，J=3.6，17.2 Hz，H－2a），2.49（1H，dddd，J=1.3，3.2，4.7，12.8 Hz，H－3b），3.05（1H，ddd，J=5.0，13.4，17.2 Hz，H－2b），3.22（1H，m，H－2′），3.38（2H，m，H－3′，4′），3.67（1H，m，H－5′），4.42（1H，dd，J=6.8，11.8 Hz，H－6′a），4.62（1H，d，J=7.8 Hz，H－1′），4.64（1H，dd，J=2.0，11.8 Hz，H－6′b），5.38（1H，t，J=3.2 Hz，H－4），6.80（2H，dt，J=2.6，8.8 Hz，H－3″，5″），7.11（1H，dd，J=1.0，8.2 Hz，H－6），7.28（1H，t，J=8.2 Hz，H－7），7.44（1H，dd，J=1.0，8.2 Hz，H－8），7.98（2H，dt，J=2.6，8.8 Hz，H－2″，6″）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：201.2（C－1），33.4（C－2），30.2（C－3），70.0（C－4），157.2（C－5），122.5（C－6），130.4（C－7），119.0（C－8），134.7（C－9），129.8（C－10），103.5（C－1′），75.4（C－2′），78.0（C－3′），72.5（C－4′），75.6（C－5′），65.1（C－6′），122.0（C－1″），132.8（C－2″，6″），116.4（C－3″，5″），163.5（C－4″），168.0（C－7″）。以上数据与文献［10］对照基本一致，鉴定化合物2 为（4S）－4，5－二羟基－α－四氢萘酮－4－O－β－D－（6′－O－4″－羟基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷。

3.3 化合物3

黄色无定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：499.166 6［M+Na］+，推测分子量为476。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.18（2H，m，H－3），2.45（1H，dt，J=3.4，17.2 Hz，H－2a），3.04（1H，ddd，J=6.0，12.8，17.2 Hz，H－2b），3.44（1H，dd，J=3.4，17.2 Hz，H－4′），3.47（1H，t，J=8.6 Hz，H－3′），3.50（1H，dd，J=8.6，16.5 Hz，H－2′），3.71（1H，dt，J=2.0，8.4 Hz，H－5′），4.40（1H，dd，J=7.4，11.6 Hz，H－6′a），4.61（1H，dd，J=2.0，11.6 Hz，H－6′b），4.77（1H，d，J=7.6 Hz，H－1′），5.30（1H，t，J=3.2 Hz，H－4），6.68（1H，d，J=8.8 Hz，H－7），6.85（2H，dd，J=2.8，8.6 Hz，H－3″，5″），7.44（1H，d，J=9.1 Hz，H－6），7.80（2H，dt，J=2.8，8.6 Hz，H－2″，6″）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：205.2（C－1），33.4（C－2），30.1（C－3），61.7（C－4），148.2（C－5），128.5（C－6），118.5（C－7），159.1（C－8），116.4（C－9），135.0（C－10），104.5（C－1′），75.2（C－2′），78.0（C－3′），72.3（C－4′），75.6（C－5′），65.0（C－6′），122.4（C－1″），132.8（C－2″，6″），116.3（C－3″，5″），163.4（C－4″），167.9（C－7″）。以上数据与文献［10］对照基本一致，鉴定化合物3 为（4S）－4，5，8－三羟基－α－四氢萘酮－5－Oβ－D－（6′－O－4″－羟基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷。

3.4 化合物4

红色无定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：377.324 8［M+Na］+，推测分子量为354。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.12（1H，tdd，J=2.6，4.4，13.8 Hz，H－3a），2.49（1H，d，J=4.4 Hz，H－3b），2.51（1H，d，J=5.0 Hz，H－2a），3.15（1H，m，H－2′），3.19（1H，d，J=5.0 Hz，H－2b），3.32（1H，m，H－3′），3.33（1H，m，H－4′），3.34（1H，m，H－5′），3.82（1H，m，H－6′a），3.90（3 H，s，H－11），3.94（1H，m，H－6′b），4.49（1H，d，J=7.6 Hz，H－1′），5.45（1H，t，J=2.8 Hz，H－4），7.30（1H，dd，J=1.2，8.2 Hz，H－6），7.46（1H，t，J=8.2 Hz，H－7），7.56（1H，dd，J=1.2，8.2 Hz，H－8）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：200.6（C－1），33.5（C－2），30.3（C－3），68.7（C－4），159.1（C－5），117.0（C－6），130.5（C－7），120.0（C－8），134.4（C－9），131.9（C－10），56.8（C－11），104.2（C－1′），75.2（C－2′），78.0（C－3′），72.0（C－4′），78.3（C－5′），63.0（C－6′）。经与文献［11］对照基本一致，鉴定化合物4 为（4R）－4－羟基－5－甲氧基－α－四氢萘酮－4－O－β－D－吡喃葡萄糖苷。

3.5 化合物5

黄色无定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：489.312 9［M+H］+，推测分子量为488。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.24（2H，m，H－3），2.50（1H，dt，J=3.5，17.6 Hz，H－2a），3.04（1H，m，H－2b），3.18（1H，dd，J=2.0，11.6 Hz，H－6′a），3.34（1H，s，H－4′），3.44（1H，t，J=8.8 Hz，H－2″），3.53（1H，m，H－2′），3.58（1H，m，H－4″），3.62（1H，t，J=5.6 Hz，H－5″），3.66（1H，d，J=7.6 Hz，H－1′），4.94（1H，d，J=1.2 Hz，H－1″），5.36（1H，t，J=3.0 Hz，H－4），6.87（1H，d，J=8.8 Hz，H－7），7.50（1H，d，J=8.8 Hz，H－6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：206.1（C－1），33.5（C－2），30.3（C－3），61.5（C－4），149.1（C－5），128.6（C－6），119.0（C－7），159.3（C－8），116.4（C－9），135.4（C－10），104.3（C－1′），77.2（C－2′），83.0（C－3′），72.0（C－4′），78.6（C－5′），63.2（C－6′），110.3（C－1″），77.6（C－2″），85.7（C－3″），75.2（C－4″），68.6（C－5″）。经与文献［12］对照基本一致，鉴定化合物5 为（4S）－4，5，8－三羟基－α－四氢萘酮－5－O－（6′－O－α－L－阿拉伯糖基）－β－D－吡喃葡萄糖苷。

3.6 化合物6

黄色无定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：541.172 4［M+Na］+，推测分子量为518。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.24（2H，m，H－3），2.52（1H，dt，J=3.5，17.2 Hz，H－2a），3.03（1H，m，H－2b），3.22（2H，m，H－2′，4″），3.28（1H，m，H－3″），3.40（1H，t，J=9.0 Hz，H－4′），3.46（2H，t，J=9.0 Hz，H－5′，5″），3.54（1H，m，H－2″），3.62（1H，m，H－3′），3.66（1H，dd，J=5.8，12.0 Hz，H－6″a），3.82（1H，dd，J=6.3，11.8 Hz，H－6′a），3.86（1H，m，H－6″b），4.13（1H，m，H－6′b），4.37（1H，d，J=7.8 Hz，H－1″），4.82（1H，d，J=7.8 Hz，H－1′），5.34（1H，t，J=3.3 Hz，H－4），6.93（1H，d，J=8.8 Hz，H－7），7.60（1H，d，J=8.8 Hz，H－6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：206.1（C－1），33.5（C－2），30.3（C－3），61.5（C－4），148.8（C－5），128.6（C－6），119.1（C－7），159.3（C－8），116.4（C－9），134.8（C－10），104.3（C－1′），75.4（C－2′），77.9（C－3′），71.6（C－4′），78.0（C－5′），69.8（C－6′），104.7（C－1″），75.6（C－2″），78.2（C－3″），71.2（C－4″），78.3（C－5″），62.5（C－6″）。经与文献［12］对照基本一致，鉴定化合物6 为4（S）－4，5，8－三羟基－α－四氢萘酮－5－O－（6′－β－D－吡喃葡萄糖基）－β－D－吡喃葡萄糖苷。

3.7 化合物7

橙黄色针晶（MeOH）。HR－ESI－MS（m/z）：175［M+H］+，推测分子量为174。1H－NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.25（1H，m，H－6），7.58（1H，d，J=7.6 Hz，H－7），7.60（1H，d，J=7.6 Hz，H－8），7.03（2H，s，H－2，3）。13C－NMR（CDCl3，100 MHz）δ：189.9（C－1），138.8（C－2），139.4（C－3），184.8（C－4），160.9（C－5），124.5（C－6），137.0（C－7），118.8（C－8），114.9（C－9），132.0（C－10）。经与文献［13］对照基本一致，鉴定化合物7为胡桃醌。

3.8 化合物8

红色片状结晶（CH2Cl2）。HR－ESI－MS（m/z）：191［M+H］+，推测分子量为190。1H－NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.09（4H，s，H－2，3，6，7），12.50（1H，s，5，8－OH）。13C－NMR（CDCl3，100 MHz）δ：190.1（C－1），138.2（C－2），138.9（C－3），185.0（C－4），161.1（C－5），124.7（C－6），136.7（C－7），119.1（C－8），115.2（C－9），132.2（C－10）。经与文献［13］对照基本一致，鉴定化合物8为5，8－二羟基－1，4－萘醌。

3.9 化合物9

棕色粉末。HR－ESI－MS（m/z）：179［M+H］+，推测分子量为178。1H－NMR（CDCl3，400 MHz）δ：2.19（1H，m，H－3a），2.41（1H，m，H－3b），2.72（1H，ddd，J=17.8，8.8，5.0 Hz，H－2a），3.10（1H，ddd，J=17.8，8.8，5.0 Hz，H－2b），4.89（1H，dd，J=4.0，7.2 Hz，H－4），7.02（1H，dd，J=8.8，1.2 Hz，H－7），7.06（1H，m，H－5），7.53（1H，dd，J=8.8，1.2 Hz，H－6），12.42（1H，s，8－OH）。13C－NMR（CDCl3，100 MHz）δ：205.8（C－1），34.2（C－2），30.8（C－3），68.0（C－4），117.2（C－5），136.9（C－6），117.7（C－7），163.0（C－8），116.1（C－9），144.8（C－10）。经与文献［14］对照基本一致，鉴定化合物9为核桃酮。

3.10 化合物10

无色针状结晶（MeOH）。HR－ESI－MS（m/z）：171［M +H］+，推测分子量为170。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.02（2H，s，H－2，H－6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：121.8（C－1），109.9（C－2，6），146.8（C－3，5），140.2（C－4），169.8（－COOH）。经与文献［15］对照基本一致，鉴定化合物10 为没食子酸。

3.11 化合物11

无色针状结晶（MeOH）。HR－ESI－MS（m/z）：167［M－H］－，推测分子量为168。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.88（3 H，s，－OCH3），6.88（1H，d，J=8.6 Hz，H－5），7.39（1H，d，J=2.0 Hz，H－2），7.45（1H，d，J=8.6 Hz，2.0 Hz，H－6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：123.0（C－1），112.9（C－2），147.1（C－3），149.0（C－4），113.5（C－5），124.8（C－6），57.2（－OCH3）。经与文献［15］对照基本一致，鉴定化合物11为香草酸。

3.12 化合物12

无色针状结晶（MeOH）。HR－ESI－MS（m/z）：199［M +H］+，推测分子量为198。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.86（6H，s，3，5－OCH3），7.30（2H，s，H－2，6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：121.0（C－1），106.9（C－2，6），56.2（3，5－OCH3），139.8（C－4），148.1（C－3，5），167.9（－COOH）。经与文献［15］对照基本一致，鉴定化合物12为丁香酸。

4 小结

本实验对核桃楸皮进行系统成分分离研究，从石油醚、二氯甲烷、正丁醇三个不同极性萃取部位中共分离得到12个化合物，分别是（4S）－4－羟基－α－四氢萘酮－4－O－β－D－（6′－O－4″－羟基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷（1）、（4S）－4，5－二羟基－α－四氢萘酮－4－O－β－D－（6′－O－4″－羟基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷（2）、（4S）－4，5，8－三羟基－α－四氢萘酮－5－O－β－D－（6′－O－4″－羟基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷（3）、（4R）－4－羟基－5－甲氧基－α－四氢萘酮－4－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（4）、（4S）－4，5，8－三羟基－α－四氢萘酮－5－O－（6′－O－α－L－阿拉伯糖基）－β－D－吡喃葡萄糖苷（5）、4（S）－4，5，8－三羟基－α－四氢萘酮－5－O－（6′－β－D－吡喃葡萄糖基）－β－D－吡喃葡萄糖苷（6）、胡桃醌（7）、5，8－二羟基－1，4－萘醌（8）、核桃酮（9）、没食子酸（10）、香草酸（11）和丁香酸（12）。其中化合物1～ 6 为首次从该药用部位中分离得到。