血管生成素样因子2 与周围血管病变相关性研究

蔡许超

周围血管病变（PVD）是糖尿病最常见并发症之一[1-2]，其特点为全身的动脉粥样硬化，导致动脉壁增厚变硬、管腔狭窄及闭塞，引起所供应的组织或器官缺血、坏死[3]。胰岛素抵抗（IR）是引起2 型糖尿病的重要原因。因此，研究PVD 与IR 的相关性极为重要。IR 影响因素中，血管生成素样因子2（ANGPTL2）是一个重要的炎症介质，通过加速白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症因子产生，增强IR[4]，并且产生血管炎症，进一步对血管壁的内皮细胞产生破坏[5]。本研究检测PVD 患者血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8、IR 水平，研究其相关性，报道如下。

1 资料与方法

1.1研究对象 收集自2016 年9 月—2019 年9 月于杭州市第一人民医院血管外科血管造影确诊为动脉粥样硬化患者130 例，按多普勒超声检测结果分组，其中不稳定性斑块患者63 例纳入观察组，稳定性斑块患者67 例纳入对照组。本项临床研究为回顾性研究，仅采集患者临床资料，不干预患者治疗方案，不会对患者生理带来风险，研究者尽全力保护患者提供的信息不泄露个人隐私。

1.2纳入及排除标准 纳入标准：（1）年龄＞65 岁；（2）出现外周动脉疾病，经超声检查确诊为下肢血管狭窄、闭塞或动脉斑块形成；（3）伴血压、血脂、血糖异常。排除标准：（1）严重的心、肝、肾、内分泌功能不全患者；（2）因炎症引发的血栓性闭塞性脉管炎、大动脉炎的患者；（3）具有严重认知障碍或精神药物依赖史者。

1.3研究方法

1.3.1问卷调查、指标测量 采用问卷调查的方法收集所有研究对象的一般资料，内容具体包括：性别、年龄、身高、体质量、糖尿病病程等。计算身体质量指数（BMI），BMI=体质量（kg）/身高2（m2）。用鱼跃公司血压计测量血压，连续测量3 次，计算平均值。

1.3.2血糖、胰岛素测定 收集全部患者晨起空腹以及餐后2h 静脉血3mL，分离血清标本。通过欧姆龙公司血糖仪检测血糖。利用德国罗氏公司全自动生化分析仪检测患者血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。采用化学发光免疫分析对胰岛素进行测定，计算IR 指数=空腹血糖×空腹胰岛素/22.5。

1.3.3血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8 水平测定 采集患者晨起空腹静脉血，离心机分离血清标本供检测。IL-8、TNF-α 检测分别采用上海开放生物科技有限公司和上海酶联生物技术有限公司的酶联免疫吸附法检测试剂盒。ANGPTL2 检测采用美国Sigma 公司速率法检测试剂盒。检测步骤参照仪器及试剂盒说明书。

1.3.4斑块稳定性检测 斑块稳定性的判断通过多普勒超声检测，稳定性斑块超声表现为斑块质地均匀、表面光滑、回声强并伴声影；不稳定性斑块超声表现为粗糙不平整、质地不均匀，超声回声低弱不均一。

1.4统计学方法 应用SPSS 26.0 及GarphPad 8.0软件对数据与图形处理。首先对数据采用（Kolmogorov-Smirnov test）检验与Levene 检验数据的正态性与方差齐性；计量数据以均数±标准差（）表示，组间比较采用配对样本t 检验；计数数据以百分比（%）表示，采用卡方检验；采用Pearson 相关性分析与线性回归分析其互相之间的联系。P＜0.05 认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1两组动脉粥样硬化患者基线资料比较 观察组与对照组年龄、性别、BMI、高血压、吸烟史、高血脂、LDL-C、HDL-C、TC、TG、糖尿病等基础资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 两组动脉粥样硬化患者基线资料比较

2.2两组动脉粥样硬化患者血清ANGPTL2、TNFα、IL-8、IR 水平比较 观察组患者血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8 水平及IR 指数均显著高于对照组（P均＜0.05），见表2。

表2 两组动脉粥样硬化患者血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8、IR 水平比较（ng/L，）

表2 两组动脉粥样硬化患者血清ANGPTL2、TNF-α、IL-8、IR 水平比较（ng/L，）

注：观察组为动脉粥样硬化不稳定性斑块患者；对照组为动脉粥样硬化稳定性斑块患者；ANGPTL2 为血管生成素样因子2；TNF-α 为肿瘤坏死因子-α；IL-8 为加速白细胞介素-8；IR 为胰岛素抵抗；与对照组比较，aP<0.05

2.3ANGPTL2、TNF-α 与IL-8 及IR 相关性分析ANGPTL2、TNF-α 与IL-8 及IR 呈显著的正相关关系；进一步将数据标准化后以IR 为因变量ANGPTL2 为自变量建立线性回归分析可得Y=0.03x0.024。见图1。

图1 IR 与ANGPTL2 线性回归分析

3 讨论

ANGPTL2 是1999 年KIM 等[6]对成人心肌测序时发现的，由7 个基因编码而成，可以调节血管生成。ANGTPL2 水平在糖尿病、肥胖和癌症患者中升高，且研究发现，它在健康受试者中随着年龄的增长而升高，ANGTPL2 在有高胆固醇和动脉粥样硬化病变的老鼠中也过早升高[7]。动物实验显示，敲除ANGPTL2 基因的小鼠，高血脂、高血压、炎症反应、糖耐量、IR 等情况显著降低[8]。

本研究结果显示，ANGPTL2 表达水平与PVD 的病情进展呈显著的正相关性，PVD 的病情越严重，其不稳定斑块患者血清ANGPTL2 水平含量越高。ANGPTL2 是脂肪来源的关键性炎症因子，具有促炎作用，可以加速血管内膜、中膜巨噬细胞、脂肪细胞数量，加速动脉粥样硬化过程，斑块稳定性也变差[9]。本研究发现ANGPTL2 表达水平与脂肪、BMI 内脏脂肪呈正相关。PVD 患者IL-8 的表达水平显著高于对照组。IL-8 是一种广泛多效的细胞炎症因子，在PVD中能刺激CRP 与纤维蛋白原的生成[10]，形成血栓，堵塞管腔，从而加快PVD 的进程。ANGPTL2 可通过整合素介导的核转录因子-κB（NF-κB）信号级联反应，增加内皮细胞TNF-α、IL-8 表达，而后作用于胰岛素信号系统，抑制胰岛素受体磷酸化，干扰胰岛素受体信号转导而引起IR[11]。

本研究结果显示，观察组ANGPTL2、TNF-α、IL-6、IR 显著高于对照组（P＜0.05）；结果说明PVD 斑块稳定性好的患者机体ANGPTL2、TNF-α、IL-8、IR 水平较低，表现为炎症驱化聚集对血管组织损伤较小，并通过炎症因子作用于胰岛素，干扰胰岛素敏感程度较弱，IR 水平较低。线性回归分析结果表明，ANGPTL2 能通过串联TNF-α 与IL-8 表达水平，而TNF-α、IL-8 等炎症因子能作用于胰岛素，使得胰岛素对机体的敏感性下降，进而引发机体产生IR，从而加速PVD 疾病进程。

总之，ANGPTL2 可能通过上调TNF-α 与IL-6表达水平从而引起IR，进而引发糖脂代谢紊乱从而加快PVD 的疾病进程。