RMPP患儿外周血IL-6、淋巴细胞亚群及23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G检测意义*

郭步庆，庞新丰，乔 静，杨广平，李红芬，李小荣，伦瑞花，李文刚

焦作市妇幼保健院：1.检验科；2.输血科；3.儿科，河南焦作 454000

难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)近年在儿童患者中发病率明显增高，RMPP易累及心血管系统、消化系统、神经系统等器官组织造成肺外感染，引起严重并发症[1]。RMPP病理特点是由富含浆细胞的淋巴细胞浸润支气管，淋巴细胞在RMPP发病机制中起着重要的作用[2]。婴幼儿肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变导致大环内酯类药物治疗婴幼儿肺炎支原体感染过程发生治疗无效，也可导致婴幼儿RMPP[3]；CD4+辅助性T细胞参与了RMPP的免疫病理过程，CD4+辅助性T细胞决定疾病的严重程度和对感染的抵抗力，而CD8+T淋巴细胞则参与抑制这些炎性反应[4]。外周血白细胞介素-6(IL-6)是一种多功能的炎症因子，可以作用于T淋巴细胞，促使炎性反应的发生，对RMPP发生及进展有鉴别作用，IL-6在抗感染的免疫反应中与机体损伤有关[5]。患者外周血IL-6、淋巴细胞亚群异常情况及肺炎支原体耐药基因位点成为RMPP近年来研究的热点[6]。本研究旨在对0～6岁RMPP患儿进行肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G检测结合外周血IL-6、淋巴细胞亚群异常情况，采用Logistic回归方程对RMPP发生的危险因素进行分析，为早期诊断RMPP提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年6月1日至2020年5月31日在焦作市妇幼保健院儿童呼吸病区住院的RMPP婴幼儿45例(研究组)作为研究对象，年龄为0～6岁；45例普通单纯肺炎支原体感染患儿作为对照组，对照组符合单纯肺炎支原体感染诊断标准[7]，年龄0～6岁；两组年龄、体质量、性别比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：(1)经大环内酯类抗菌药物正规治疗超过7 d，仍持续发热38 ℃以上；(2)临床症状加重、出现肺外合并症；(3)病程延长并伴随影像学异常。排除标准：(1)先天性支气管发育异常，先天性肺功能不全；(2)先天性免疫缺陷，继发性免疫缺陷；(3)严重的肝肾心功能障碍，影响检测结果。研究通过焦作市妇幼保健院伦理委员会审核(批准编号jzfy-2020-1360)，患者享有知情权、选择权。

1.2方法 23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G检测采用PCR-Taqman荧光探针技术，外周血淋巴细胞亚群采用流式细胞分析仪进行CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞百分比检测。参考中国不同年龄及性别的健康儿童外周血淋巴细胞亚群参考值范围[8]，患儿淋巴细胞亚群结果不在正常范围内即为异常；IL-6检测方法为化学发光法，仪器选用深圳新产业生物MAGLUMI 2000 Plus型全自动化学发光仪，0～6岁人群IL-6>7 pg/mL为IL-6水平异常。

2 结 果

2.1各组肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变情况 研究组肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；研究组各年龄段肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变率比较，差异有统计学意义(P<0.05)，年龄越大，其突变比例也越高。见表1。

表1 各组肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变情况

2.2研究组各年龄段IL-6水平及其异常情况比较 研究组各年龄段IL-6水平及其异常情况比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 研究组各年龄段IL-6水平及其异常情况比较

2.3两组CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞水平及异常情况比较 两组CD4+T淋巴细胞百分比、CD4+T淋巴细胞异常数、CD4+T淋巴细胞/CD8+T淋巴细胞异常数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞水平及异常情况比较

2.4RMPP logistic回归模型分析 通过多因素Logistic分析RMPP：肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变、IL-6水平异常是RMPP发生的独立危险因素。见表4。

表4 RMPP多因素Logistic分析

2.5联合指标诊断RMPP的ROC曲线分析 IL-6水平异常诊断RMPP的ROC曲线下面积(AUC)为0.844(95%CI:0.758～0.931)；肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变诊断RMPP的AUC为0.756(95%CI:0.652～0.859)；肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变、IL-6水平异常联合指标诊断预测RMPP的AUC为0.927(95%CI:0.870～0.984)，对比单一因素诊断RMPP具有较高价值，见图1。

图1 A2603G或(和)A2604G突变、IL-6水平异常联合指标诊断RMPP的ROC曲线

3 讨 论

RMPP具有发热时间长、病情进展快的临床特点，容易发生肺实质病变，造成胸腔积液和肺不张等合并症，严重病例可发展成坏死性肺炎。病原体感染类型可以为单纯肺炎支原体、混合型病原体感染。RMPP以肺炎支原体引起的肺炎感染及肺外损伤为病理特点，肺炎支原体A2063、A2064核苷酸突变，可引起核糖体结合抗菌药物的亲和力下降，从而使肺炎支原体产生耐药性[9]。0～6岁RMPP患儿通常出现炎症因子变化剧烈、气管平滑肌痉挛、呼吸困难及肺外器官如心脏、肝脏损伤，造成病情加重[10]。

本研究结果提示，肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G产生耐药性可能是肺炎支原体肺炎转为RMPP的重要原因，耐药性导致大环内酯类药物对于儿童患者无效或者效果减低[11]，而常规用于成人治疗肺炎支原体的药物对于儿童是慎用的，普通治疗方案不能控制病情，造成病程增加，病情加重。本研究结果显示，研究组各年龄段肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变率比较，差异有统计学意义(P<0.05)，年龄越大，其突变比例也越高。提示肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G的检测可以作为RMPP诊断指标[12]。

IL-6作为临床常用一种的炎症指标，可以反映炎症感染程度及肺部实质病变指标，单纯肺炎支原体感染造成的感染程度有限，且合并症较少[12-13]。本研究结果证实了IL-6可以作为RMPP诊断指标。与文献[14-15]报道结果一致。

肺炎支原体感染可导致淋巴细胞多克隆活化，淋巴细胞亚群发生改变，淋巴细胞亚群变化与肺炎支原体感染导致的肺炎进展密切相关[16]。有学者认为辅助性T细胞参与了肺部感染肺炎支原体的免疫病理过程，而CD8+T淋巴细胞则抑制了肺部免疫反应，CD4+辅助性T细胞与肺炎的严重程度有关[17-18]。本研究结果显示，两组CD4+T淋巴细胞百分比、CD4+T淋巴细胞异常数、CD4+T淋巴细胞/CD8+T淋巴细胞异常数比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变、IL-6水平异常是RMPP发生的独立危险因素。肺炎支原体基因突变位点A2603G或(和)A2604G突变、IL-6水平异常联合指标诊断对比单一因素诊断RMPP具有较高价值。

综上所述，肺炎支原体23SrRNA基因突变位点A2603G或(和)A2604G检测可作为RMPP诊断的常规项目，该检测结果可以为早期诊断RMPP提供依据。