嗜酸粒细胞趋化蛋白-2血清含量对结直肠癌的诊断价值

徐小卫,董利阳,郑婷婷,刘佳梦,张珊,高学荣,毛朝明

(江苏大学附属医院核医学科,江苏 镇江 212001)

2021年全球癌症数据报告显示,结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是第3位最常见的恶性肿瘤,在恶性肿瘤死亡中位居第3[1]。Ⅰ-Ⅱ期结直肠癌患者的整体生存率约为90%,Ⅲ期约为71%,Ⅳ期为14%[2],显然,早期诊断对改善患者预后具有重要意义。结肠镜检查和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)测定为结直肠癌辅助诊断的常用手段,然而分别存在侵袭性和低灵敏度的弊端[3-4]。探寻新型无创、高效的结直肠癌诊断标志物尤为迫切。研究发现,趋化因子、细胞因子等在肿瘤发生发展中具有重要作用,被认为是具有潜力的肿瘤标志物[5-6]。嗜酸粒细胞趋化蛋白2(eosinophil chemotactic protein 2,eotaxin-2,又称CCL24)是一类CC家族的小分子趋化因子,在结直肠癌病变组织中高表达,其可促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭[7]。目前,关于eotaxin-2在结直肠癌血清中的水平及其在结直肠癌诊断中的价值尚不完全清楚。本研究拟检测结直肠癌患者血清中eotaxin-2的含量,并评价其在结直肠癌中的临床应用价值,以期发现诊断结直肠癌的新型肿瘤标志物。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2020年1月至2021年2月在江苏大学附属医院胃肠外科接受治疗的50例结直肠癌患者为病例组。纳入标准:① 病理诊断证实为结直肠癌；② 患者均系首次诊断,首次手术治疗,且术前无放化疗、靶向治疗及生物治疗等抗癌治疗史。排除标准:① 合并其他肿瘤者；② 有精神障碍、高血压、免疫性疾病、器官衰竭以及合并其他心脏、肝脏、肾脏等功能不全者。结直肠癌的临床分期(TNM)参考国际抗癌联盟(UICC)第八版结直肠癌分期标准。

收集同期本院体检健康者40例作为对照组。本研究通过江苏大学附属医院医学伦理委员会批准,各研究对象均知情同意。

1.2 血清标本采集与处理

结直肠癌患者于手术前采集静脉血标本,体检健康者于体检时采集静脉血标本。将采集的静脉血标本(5 mL)置于含分离胶促凝剂的真空采血管中,1 000×g离心10 min,吸取上层血清置于1.5 mL EP管,-80 ℃保存备用。

1.3 血清eotaxin-2检测

人eotaxin-2 ELISA试剂盒购自北京索莱宝公司(货号SEKH-0063),按试剂盒说明书操作,每孔加入100 μL标准品或检测标本,封板后置37 ℃、90 min孵育；拍板和洗板4次；每孔中加入100 μL生物素化抗体工作液,封板后置37 ℃、60 min孵育；拍板和洗板4次；每孔加入100 μL酶结合物工作液,封板后置37 ℃、30 min孵育；拍板和洗板5次；每孔加入100 μL显色底物,封板后于37 ℃避光显色15 min；每孔加入50 μL终止液；5 min内使用酶标仪(美国公司BioTek公司)读取450 nm波长下的光密度值,绘制标准曲线后计算各标本eotaxin-2浓度(pg/mL)。

1.4 血清CEA检测

CEA检测采用化学发光法(雅培i2000全自动化学发光分析仪),试剂盒购自爱尔兰雅培公司,批号26040FN00。参照产品说明书进行操作,浓度单位为ng/mL。

1.5 统计学分析

应用SPSS 22.0软件进行统计分析。结直肠癌组与对照组性别、年龄构成比较采用χ2检验。血清eotaxin-2含量为非正态分布,以中位数(四分位数)表示,组间比较采用Mann-WhitneyU检验。受试者工作特征(ROC)曲线评价血清eotaxin-2对结直肠癌的筛查价值,通过约登指数(敏感性+特异性-1)确定截断值(cut-off),曲线下面积(AUC)≤0.5为无诊断价值,0.5

2 结果

2.1 结直肠癌组与对照组一般情况比较

结直肠癌组男34例,女16例,年龄<60岁患者17例,≥60岁33例；对照组男23例,女17例,年龄<60岁11例,≥60岁29例,两组性别(χ2=1.055,P=0.304),年龄构成(χ2=0.438,P=0.508)差异均无统计学意义。

2.2 结直肠癌患者血清eotaxin-2含量

结直肠癌患者与对照组血清eotaxin-2含量分别为220.8(189.7,257.1)pg/mL和169.9(136.1,195.7)pg/mL,结直肠癌组明显高于健康对照组,差异有统计学意义(Z=-3.93,P<0.01)。见图1。

图1 结直肠癌患者血清中eotaxin-2含量

2.3 血清eotaxin-2含量与结直肠癌患者临床病理特征的关系

血清eotaxin-2的含量与结直肠癌患者淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关(P均<0.01),而与性别、年龄、肿瘤类型、肿瘤直径均无明显关系(P均>0.05)。见表1。

表1 血清eotaxin-2含量与结直肠癌患者临床病理特征的关系

2.4 血清eotaxin-2诊断结直肠癌的价值

血清中eotaxin-2筛查结直肠癌的AUC为0.742(95%CI:0.639～0.845,P<0.01),当截断值为196.73 pg/mL时,敏感性为68.0%,特异性为77.5%。血清CEA筛查结直肠癌的AUC为0.636(95%CI:0.520～0.751,P=0.027),当截断值取4.15 ng/mL时,敏感性为52.0%,特异性为80.0%。血清eotaxin-2与CEA联合筛查结直肠癌时AUC为0.742(95%CI:0.640～0.843,P<0.01),敏感性为68.0%,特异性为75.0%。见图2。

图2 血清eotaxin-2诊断结直肠癌的ROC曲线

3 讨论

结直肠癌是目前全世界范围内发病率与致死率均居前列的恶性肿瘤,其起病隐匿,多数患者确诊时已属中晚期,丧失最佳手术时机,患者预后较差。现阶段仍缺乏结直肠癌早期诊断的肿瘤相关指标,CEA等肿瘤标志物虽然能够在结直肠癌的诊断过程中提供参考,但诊断灵敏度较低。本研究检测了结直肠癌患者血清eotaxin-2含量,在一定程度上为结直肠癌提供可参考的新型血清学标志物。

Eotaxin-2属于趋化因子CC类,是趋化因子受体CCR3的主要配体之一,其主要由纤维、上皮和巨噬细胞产生[8]。Eotaxin-2能促进嗜酸粒细胞迁移,被证实在类风湿关节炎、哮喘等疾病发展中发挥关键作用[9-10]。近年来,eotaxin-2被报道参与了包括结直肠癌在内的肿瘤发生过程[11]。Cheadle等[12]研究显示eotaxin-2在结直肠癌原发性肿瘤和肝转移性肿瘤中的表达水平明显高于邻近的非肿瘤组织。Cho等[13]研究结果表明,伴随结直肠癌病情的加剧,病灶基质细胞中eotaxin-2表达增加,而腺细胞中eotaxin-2表达降低,嗜酸粒细胞在肿瘤病变组织的数量呈减少趋势。GEPIA数据库(http://gepia.cancer-pku.cn/detail.php?gene=CCL24)分析发现,eotaxin-2在结直肠癌病变组织中表达上调,且与其他类型肿瘤相比,exotain-2在结直肠癌中的丰度最高[14]。以上实验及在线分析主要为结直肠癌组织水平的探究,考虑到血清较组织取材方便,血清eotaxin-2较组织eotaxin-2检测简单快捷,故本研究对血清eotaxin-2与结直肠癌的关系进行探讨。结果显示结直肠癌患者血清中eotaxin-2含量显著上调,其水平与结直肠癌的淋巴转移、远处转移及TNM分期显著相关,这提示血清eotaxin-2可能成为预测结直肠癌患者预后的指标。Olsen等[15]研究亦表明血浆高水平的eotaxin-2与结直肠癌特异性死亡率呈显著正相关。

Gong等[16]发现,相对于健康者,鼻咽癌患者血清中eotaxin-2含量显著升高,据此推测血清eotaxin-2具有诊断鼻咽癌的可能。Wang等[17]研究表明,血清高水平的eotaxin-2对肾透明细胞癌具有筛查效能,其诊断肾透明细胞癌的AUC为0.844,最优截断值为200 pg/mL。本研究结果表明,血清eotaxin-2诊断结直肠癌的AUC为0.742,最优截断值为196.73 pg/mL。这些研究提示,eoxtain-2可能为一种新型的广谱性肿瘤标志物。本研究中,血清eotaxin-2诊断结直肠癌的AUC(0.742)和敏感性(68.0%)均高于CEA的0.636和52.0%,而特异性(77.5%)略低于CEA的80.0%,提示血清eotaxin-2对结直肠癌的整体筛查效能优于CEA,血清eotaxin-2可作为较理想的结直肠癌诊断标志物。需要注意的是,相较于eotaxin-2单一检测,eotaxin-2和CEA联合检测并未提升筛查结直肠癌的特异性。

综上所述,结直肠癌患者血清eoxtain-2含量显著上升,检测血清eoxtain-2水平对结直肠癌患者病情及诊断具有一定的指导价值。但由于本研究样本量较小,仍需要进行多中心、大规模临床研究来验证eotaxin-2的有效性。