白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛主要临床指标的影响

苏柘僮，肖劲邦，钱柏霖，朱颍琨，周剑婧，朱秋祥，杨世林，冯育林，高红伟，沈留红

(1.广西英路维特药物有限公司，广西 荔浦 546600 ； 2.四川农业大学动物医学院 动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 成都 611130 ； 3.江西中医药大学 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西 南昌 330006 ； 4.广西中医药大学, 广西 南宁 530000)

乳房炎是全世界公认的奶牛三大疾病之一，严重制约了奶牛养殖业的健康发展。目前其防控主要手段是使用抗生素，但长期大剂量甚至超剂量使用抗生素，不仅会导致耐药菌株产生耐药性，还会导致乳汁内抗生素残留的公共卫生安全隐患[1-4]。中草药及其制剂因其疗效好、副作用少、无残留等优势，在奶牛养殖中的应用越来越广泛，牧场常选用具有抗菌消炎、提高免疫、抗氧化、抗内毒素等作用的中药或中药组方治疗奶牛乳房炎，并取得一定效果[5-6]。白头翁及其主要成分白头翁皂苷B4具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫等功效，人医临床上常用于抗炎抑菌[7-9]、增强免疫[10]和抗氧化[11]等，其兼备的抗炎、抑菌、抗氧化和提升免疫力等药效，与乳房炎清除细菌、缓解炎症、提高自身免疫力以帮助自愈的治疗需求密切吻合。因此，本试验旨在探究不同剂量白头翁皂苷B4对奶牛临床型乳房炎奶牛体温、呼吸频率、心率、单次反刍咀嚼次数、产奶量、治愈时间和治愈率的影响，从临床的角度探明白头翁皂苷B4治疗临床型乳房炎的最佳剂量，为后续试验及其临床推广应用提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 选用四川某规模化奶牛场半封闭统一饲舍的中国荷斯坦奶牛，体重(612±47)kg，年龄3～4周岁，2～3胎泌乳高峰期健康奶牛20头和患临床型乳房炎的奶牛50头。从中选取泌乳天数、产奶量相近的临床检查健康奶牛12头和患临床型乳房炎奶牛36头进行本试验，常规饲养。

1.2 主要试剂 白头翁皂苷B4注射液(100 mL/瓶，白头翁皂苷B4含量66.67%)，由四川英路维特医药科技有限公司惠赠，经江西中医药大学中药固体制剂制造技术国家工程研究中心鉴定。

1.3 主要仪器 阿波罗(ALPRO)牛群管理系统，瑞士DeLaval股份有限公司；TGLB-16G台式离心机，Sigma公司；JS-B电子台秤，上海升徽电子有限公司；DW-86L828W超低温冰箱，青岛海尔股份有限公司。

1.4 试验方法

1.4.1 奶牛临床型乳房炎判断标准 本试验临床型乳房炎奶牛均为自然发病病例，由牧场同一执业兽医师判定，其判定标准：奶牛乳腺红、肿、触之敏感，患区乳房表面温度升高，乳腺肿大，产奶量显著减少或停止，乳汁异常，呈浅黄色或浅红色，稀薄或黏稠，有絮状物。

1.4.2 试验奶牛给药方法及分组 根据乳房灌注、颈部肌内注射和颈静脉注射白头翁皂苷B4治疗奶牛临床型乳房炎(5、10 mL/次和15 mL/次，3 次/d，连续给药4～6 d)均有效的预试验结果。因颈部肌内注射给药最简单，本试验选择颈部肌内注射的方法给药。将12头健康奶牛(对照组)记为A组，36头临床型乳房炎奶牛(试验组)随机均分为B、C、D三组。A组不注射药物，B、C组和D组分别颈部肌内注射白头翁皂苷B4 15、30 mL和60 mL，1 次/d，发病当天即开始用药(采样均在用药之前)，记为第1天，连续给药4～6 d，观察至第12天。

1.4.3 试验奶牛体温、呼吸频率、心率、单次反刍咀嚼次数测定 每日上午8:00应用体温表测定并记录健康和临床型乳房炎奶牛第1～7天直肠温度；利用秒表记录连续5 min心率、呼吸频率，记录连续3次的单次反刍咀嚼次数，并均取平均值。

1.4.4 疗效判定方法和标准 治疗期间及治愈后，对比每一天临床症状和乳汁性状进行分析[12]。痊愈：乳房或患病乳区红、肿、热、痛等临床症状完全消失，产奶量回升，泌乳量和乳汁恢复正常；有效：乳房或患病乳区红、肿、热、痛等临床症状减轻或基本消失，乳汁无凝块或有少量絮状物或基本恢复正常，泌乳量回升或基本恢复正常；无效：乳房或患病乳区红、肿、热、痛等临床症状无明显改善或加重，泌乳量下降，乳汁异常。

1.4.5 试验奶牛产奶量、治愈时间和治愈率的测定 依据ALPRO牛群管理系统记录健康及临床型乳房炎奶牛试验第1～7天的产奶量，观察临床型乳房炎奶牛每天的临床症状(包括乳房质地、性状、乳汁性状等)判断治愈情况，并计算12 d内的治愈时间、有效率及治愈率等。

2 结果

2.1 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛体温的影响 如表1所示，临床型乳房炎奶牛和健康奶牛体温均在正常范围波动，B、C、D组奶牛体温均呈逐渐下降趋势，第5天后均接近对照组(组内差异均不显著)(P>0.05)。其中B组1～3 d差异不显著(P>0.05)，C组1～3 d差异显著(P<0.05)，D组1～5 d差异均显著(P<0.05)。试验前4天，3个试验组组间均分别差异不显著(P>0.05)，但均明显高于对照组(P<0.05)；第5～6天，B组仍明显高于A组(P<0.05)，第7天时，各组体温差异均不显著(P>0.05)。

表1 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛体温的影响Table 1 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the temperature of dairy cows with clinical mastitis (℃、n=12)

2.2 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛呼吸频率的影响 如表2所示，A组奶牛呼吸频率1～7 d均在正常范围波动(P>0.05)；B、C、D组奶牛呼吸频率均呈下降趋势，其中B组第3～4、5～7天差异均分别不显著(P>0.05)，但第1、2、3～4、5～7天间分别差异显著(P<0.05)；C组第3～4、4～6、5～7天差异均分别不显著(P>0.05)，但第1、2、3、5～7天间分别差异显著(P<0.05)；D组第5～7天差异均分别不显著(P>0.05)，但第1、2、3、4、7天间分别差异显著(P<0.05)。另外，B、C、D组前3天均显著高于A组(P<0.05)；第4天，C、D组均分别与A、B组差异显著(P<0.05)；第5～6天，B组显著高于A组(P<0.05)；第7天，A组与B、C、D组差异均分别不显著(P>0.05)，但B组和C组差异显著(P<0.05)。

表2 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛呼吸频率的影响Table 2 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the respiratory rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.3 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛心率的影响 如表3所示，A、B、C、D各组间和组内奶牛第1～7天试验奶牛心率均无明显变化趋势，差异均分别不显著(P>0.05)。

表3 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛心率的影响Table 3 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the heart rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.4 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛单次反刍咀嚼次数的影响 由表4可见，试验期间A组奶牛各天单次反刍咀嚼次数均差异不显著(P>0.05)。B、C、D组奶牛随用药时间推进，治疗前3天，B、C、D组(组间差异不显著)均明显低于A组(P<0.05)，且3 d后，B组明显低于C组或D组(P<0.05)， C、D组(第4天与A组差异不显著)效果优于B组(第7天仍低于A组)，但C、D组差异均不显著(P>0.05)。第4天后基本恢复正常，组内差异不显著(P>0.05)。

表4 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛单次反刍咀嚼次数的影响Table 4 Effect of Pulsatilla saponin B4 on mastications per rumination of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.5 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛泌乳量的影响 由表5可见，试验期间A组奶牛各天产奶量均差异不显著(P>0.05)。B、C、D组除第2天低于第1天外，均随治疗时间推进，呈上升趋势，C、D组第4天后明显高于前3天，B组第5天后才明显高于前3天(P<0.05)。临床型乳房炎奶牛产奶量明显低于健康奶牛(P<0.05)，治疗7 d均也明显低于A组(P<0.05)，且第3天后，B组明显低于C、D组(P<0.05)，D组高于C组，但组间差异不显著(P>0.05)。

表5 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛泌乳量的影响Table 5 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the milk production of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.6 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛治愈时间及治愈率的影响 如表6所示，B、C、D组临床型乳房炎奶牛12 d内治疗有效率均达100.00%，总治愈率分别为75.00%、75.00%和91.67%，呈明显量效关系；平均治愈时间分别为6.33、6.11 d和6.91 d，其中，治疗第6天，C组即有6头临床治愈，B、D组均为4头。综上，选取C组30 mL/d的剂量即可达到理想临床治疗效果。

表6 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛治愈时间及治愈率的影响Table 6 Effect of Pulsatilla saponin B4 on cure time and cure rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

3 讨论

3.1 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛主要临床指标的影响 体温、呼吸频率、心率和单次反刍次数是评价奶牛机体健康状况和生理状态的重要临床指标。奶牛属于恒温动物，其体温仅在较为恒定的范围内发生细微变化，但临床型乳房炎会造成奶牛体温不同程度升高，从而刺激呼吸感受器，经呼吸中枢整合增强呼吸反射，导致奶牛呼吸频率上升[13]，进而促使心交感神经兴奋，心脏收缩力加强，心率加快。本试验结果表明，临床型乳房炎奶牛体温、呼吸频率、心率和单次反刍次数均在正常生理范围波动，但体温、呼吸频率均高于健康奶牛，使用白头翁皂苷B4治疗后均呈下降趋势，并在第7天时，各组间奶牛体温、呼吸频率均分别差异不显著(P>0.05)，与王爽[5]和郑会超等[14]研究结果一致，说明临床型乳房炎引起奶牛体温和呼吸频率不同程度的升高，而白头翁皂苷B4可发挥抗炎、解热作用，并呈一定量效关系缓解体温和呼吸频率的升高。临床型乳房炎奶牛的心率在发病初期及治疗过程中与健康奶牛无明显变化(P>0.05)，与肖定福等[15]利用青蒿、薄荷、佩兰、金银花和甘草等按一定比例配制组成的中药组方降低热应激奶牛心率的结果相符，一方面可能由于牧场揭发临床型乳房炎较为及时，尚无严重全身症状；另一方面表明白头翁皂苷B4对奶牛心率无明显副作用。奶牛是反刍动物，反刍活动对其采食和消化具有重要意义，当奶牛处于疾病或应激状态下，反刍咀嚼次数会发生显著变化[16-17]。本试验结果发现，试验第1～3天各组临床型乳房炎奶牛单次反刍咀嚼次数均显著低于健康奶牛(P<0.05)，但随治疗时间的推进，单次反刍咀嚼次数逐渐恢复，在第4天时发生显著改善，说明临床型乳房炎会影响奶牛的反刍和消化功能，而白头翁皂苷B4具备解热、抗炎、抑菌、提高免疫的作用，可有效缓解奶牛炎症和疼痛应激状态，恢复单次咀嚼和反刍次数，改善采食。

3.2 白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛治愈时间、治愈率和泌乳量的影响 临床型乳房炎大多是由细菌感染引起炎症反应，会导致奶牛乳腺损伤和产奶量下降，抑制细菌和消除炎症是治疗奶牛乳房炎的2个关键。研究表明，白头翁兼具良好的抗菌和抗炎作用，白头翁皂苷B4的α、β不饱和酮结构是抗炎所必需基团，可调节血管收缩，增加血流量，减轻白细胞与内皮细胞黏附反应，控制白细胞传出血管壁，减少炎症组织中白细胞数，从而减轻炎症反应，其效应与局部血流量相关，而奶牛每产1 kg牛奶需500 kg的血液流经乳腺[18]，因此推测对乳腺也会有相应的效果，文献报道应用白头翁散加减治疗奶牛出血性乳房炎，灌服1剂后乳汁红色变淡，续服2剂，4 d后痊愈[19]；金兰梅等[20]通过体外抑菌试验发现，单味白头翁对引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌均有较强抑制作用；吕平等[6]研究认为，白头翁提取物均对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定抑菌作用。本试验结果显示，各组临床型乳房炎奶牛12 d内治疗有效率均达100%，总治愈率分别为75.00%、75.00%和91.67%，其中在治疗第7天，3个组治愈头数相近，在超出给药时间后，C、D组分别有1头和2头自愈，且在治疗过程中，泌乳量均呈逐渐上升趋势，C组和D组第3天开始，泌乳量回升趋势均显著高于B组(P<0.05)， 表明不同剂量白头翁皂苷B4对临床型乳房炎均具有较好治疗效果，呈明显量效关系。但考虑治疗成本和减轻注射应激，推荐30 mL颈部肌内注射，1 次/d，连续4～6 d，即可达到理想治疗效果。