过江藤合成氧化银在血液透析导管病菌培养中的抗菌活性

李汝芬 于风叶 任 瑞 王 琳 宋向芹 邓方方 纪象芹

滨州医学院附属医院 山东 滨州 256603

近年来，随着各种原因引起肾功能衰竭患者的增加，血液透析已经成为一种重要的治疗手段。血管通路是血液透析病人必不可少的前提条件，虽然自体动静脉内瘘是其首选的血管通路，但由于血管条件差，无法建立内瘘或等待内瘘成熟期的病人，中心静脉留置导管依然广泛应用于血液透析治疗。感染是中心静脉留置导管最常见的并发症，可导致血液透析病人住院率增高和住院时间增加，影响病人的生活质量和长期生存率；且导管相关血液源性感染是其较为常见且严重的并发症，甚至可以导致患者死亡[1]。黄雨琴[2]指出：使用中心静脉导管进行血液透析的患者，导管相关感染的发生率超过15%，且随着透析时间的延长，感染发生率越来越高。尿毒症血液透析患者由于肾脏排泄功能的降低，药物特别是抗生素的应用更加控制严格，为防止中心静脉导管感染，严格的无菌操作及导管护理用品的选择尤为重要。杨勇勋等报道[3]植物药过江藤具有较宽的抗炎、抗菌止痛等活性谱，可用于清热解毒，散瘀消肿，跌打损伤；外用治痈疽疔毒，带状疱疹，慢性湿疹等病症。银化合物及其盐类自20世纪60年代起就被用作烧伤及深度创面的治疗用物及护理产品，且植物提取物合成Ag2O易获得、安全无毒，具有植物成分化学性质，辅助减少阴离子[4]，目前仍有银化合物合成药物用于临床伤口的抗感染治疗，Ag2O 纳米粒子作为一种有效的抗菌药物也已被广泛研究和证实。研究证明：草药抗菌素和金属的开发有巨大潜能，能成功治疗传染性疾病，同时减少与抗生素使用相关的副作用[5]。本研究团队使用过江藤提取物绿色合成氧化银粒子，在透析用中心静脉置管病菌培养皿中测定其抗菌活性，旨在寻找一种天然有效，副作用小的透析用导管抗菌护理用品。

1 材料和方法

1.1 材料与设备 过江藤植物的干燥叶片,花期采摘，硝酸银(分析级)溶液，高压釜，FDV小型高速超细粉碎机，硅石坩埚，马弗炉等。

1.2 过江藤植物粉末制作 选取过江藤植物的新鲜叶子，流动水清洗干净，沥干水分，放入高压釜中对植物叶子进行干燥。干燥后的叶片使用FDV小型高速超细粉碎机进行粉碎，粉碎后粉末颗粒透射电镜(TEM)分析直径在5～10 μm之间，将粉碎粉末收集备用。

1.3 过江藤Ag2O粒子的合成 准备好硝酸银溶液(分析级)，将硝酸银和过江藤叶子粉末按重量1∶1比例放入硅石坩埚，使用磁搅拌器充分搅拌5～10 min，使其充分混匀。将混合物置于(600±10)℃预热的马弗炉中，中心部分最先出现反应，火焰先出现在表面，然后快速充满炉体，通过吸收剂结构分离无色粉末，合成的Ag2O 通过X射线衍射和TEM分析显示平均粒径范围为20 nm，符合氧化银典型结构。随后将合成的Ag2O 用于透析用中心静脉导管病菌培养的抗菌活性研究。

1.4 透析用中心静脉导管病菌培养 选择本医疗机构使用中心静脉导管进行血液透析患者30例，在导管护理前，用无菌棉签蘸取0.9%无菌氯化钠溶液擦拭导管植入口周围皮肤，擦拭范围直径>15 cm，擦拭三次后待干。将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支在导管植入口周围皮肤及导管距植入口1 cm处旋转涂擦各两次，并随之转动采样棉拭子，无菌手术剪剪去手接触部位；将棉拭子放入装有10 mL采样液的试管内送微生物实验室行微生物培养[6]。30例患者中培养出6例患者3种菌，其中表皮葡萄球菌者2例，金黄色葡萄球菌者3例，黄曲霉菌者1例。

1.5 抗菌活性筛选方法 采用扩散法测定抗菌活性[7]。将培养出的菌株分别接种于培养基中进行培养，其中表皮球菌和金黄色葡萄球菌菌株接种于血琼脂平板培养基，黄曲霉菌菌株接种于沙保罗培养基。接种方法：用无菌棉拭蘸取菌液，在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在培养基表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度以确保接种菌的均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周，接种好的平板可敞开盖子在室温下干燥5 min。 采用二甲基亚砜(DMSO)溶解法分别制备过江藤粉末(0.1 mg/mL)和过江藤氧化银(0.1 mg/mL)萃取物，然后将过江藤粉末、过江藤氧化银、四环素、氟康唑及DMSO制备成直径为0.5 cm的抗菌纸片，然后用浸满药液的纸片分别明确标识后放入菌株培养基表面并轻压，使纸片与培养基表面完全接触。其中四环素(0.1 mg/mL)作为抗表皮球菌和金黄色葡萄球菌的标准对照，氟康唑(0.1 mg/mL)作为抗黄曲霉菌抗菌的标准对照，DMSO溶剂为空白对照。表皮球菌、金黄色葡萄球菌在35 ℃下培养24 h，黄曲霉菌培养皿在37 ℃条件下培养48 h。每种菌株培养皿针对同种药剂做30个培养皿，每皿测量抑菌区域直径，以毫米计。培养结果聘请微生物实验室专业检验师判定，抑菌圈直径15 mm以上为高度敏感，10～14 mm为中度敏感，10 mm以下为低度敏感，0为不敏感[8]。

2 结果

通过分析培养皿抑菌圈表明：表皮球菌对四环素、过江藤、过江藤Ag2O均敏感，但对四环素敏感性更高；金黄色葡萄球菌对过江藤、过江藤合成Ag2O粒子敏感，对四环素不敏感；黄曲霉菌对氟康唑、过江藤合成Ag2O粒子、过江藤均敏感，前两者抑菌结果无显著差异，过江藤粉效果较前两种药剂效果略差。本实验将病菌对药物敏感性作为药物抗菌活性的判断指标。病菌对药剂的敏感性结果见表1、表2。

表1 不同病菌对不同药剂的敏感性对照表

表2 不同抗菌药物的抗菌活性(抑菌区域直径)/mm

3 讨论

中药过江藤有较好的抗菌活性，合成Ag2O抗菌活性明显提高。通过抗菌活性实验得出，过江藤粉末对表皮球菌、金黄色葡萄球菌及黄曲霉菌均有抗菌活性。在合成Ag2O后，抗金黄色葡萄球菌和黄曲霉菌活性明显提高，可能与银离子协同作用有关。表皮球菌在无禁忌的情况下，首选四环素，过江藤和过江藤Ag2O颗粒可作为次选。在抗黄曲霉菌作用方面，氟康唑与过江藤Ag2O颗粒均可作为首选，过江藤粉末次选。

尿毒症患者由于贫血、营养不良、机体免疫力低下等原因，极易发生各种感染。而肾小球滤过率的下降，影响了抗生素的代谢和清除。如果抗生素使用时间或用量不当，极易出现抗生素脑病[9]。深静脉置管作为急症透析和动静脉内瘘准备期间必不可少的血管通路，同时也是最易发生感染的血管通路。导管相关血液源性感染是其较为常见且严重的并发症，甚至导致患者死亡[1]。国外学者研究报道：金黄色葡萄球菌主要通过皮肤表面传播，由于静脉留置导管破坏正常皮肤保护屏障，同时处于患者普遍处在较为危重的疾病进程中，免疫功能相对低下，所以极易导致金黄色葡萄球侵入繁殖引发感染[10]。

在预防透析用中心静脉置管感染的措施中，导管护理起到十分重要的作用。除严格执行手卫生和无菌操作之外，导管护理敷料选择和抗生素软膏的使用[11]也十分重要。由于抗生素使用的局限性，选择安全、实用、副作用小、抗菌效果好的导管护理用材料成为本团队研究目标。

草药中含有的抗生素具有巨大的开发潜力，越来越多的中草药抗生素成为医药人员的研究目标。过江藤植物提取物合成的Ag2O 粒子能更有效地对抗对细菌性和真菌性病原体，且容易获取、安全、副作用小。既可以有效防止细菌及真菌感染，又减少了抗生素使用相关副作用，适宜尿毒症血液透析患者使用，因此在开发透析用中心静脉置管护理用敷料方面具巨大的潜能。

本研究的不足之处是没有将氧化银单独作为观察药剂进行对比分析，此部分内容将在下一步研究中进行。