慢性乙型肝炎患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平与肝功能指标及炎症因子的相关性

王莉，赵媛

1.西安市第八医院肝病科，陕西 西安 710061；2.延安市人民医院感染科，陕西 延安 716000

慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）是消化内科及感染科的常见病，是导致肝硬化、慢性肝病及肝癌等的主要原因[1]。CHB早期症状不典型，加上确诊CHB的金标准主要为病理学活检，这种侵入性操作并不利于早期诊断，因此近年来血清学指标在CHB中的诊断价值得到重视。现有研究表明，炎性介质、免疫细胞与乙型肝炎病毒（HBV）清除及肝脏炎性损伤有关[2]。血管黏附蛋白-1（VAP-1）主要由肝脏产生，可水解为可溶性血管黏附蛋白-1（sVAP-1），发挥促炎效果[3]。DNA甲基化转移酶1（DNMT1）为体细胞内丰富的甲基转移酶，可维持DNA甲基化。以往的研究发现，肝组织中DNMT1表达与CHB、肿瘤复发/转移等临床病理特征有关[4]。T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（Tim-3）是T淋巴细胞免疫球蛋白家族中的重要一员，在多种生命活动中起到重要调节作用[5]。既往研究尚未完全明确sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平对CHB的作用机制，本研究就此展开分析，旨在指导临床诊疗工作。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2018年4月至2020年7月西安市第八医院肝病科收治的93例CHB患者作为研究对象。纳入标准：（1）所有患者诊断均符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》[6]中的诊断标准；（2）患者及其家属知情本研究且签署了同意书。排除标准：（1）患有自身免疫性肝炎、脂肪肝、酒精性肝炎等肝病者；（2）其他病毒引起的肝炎患者；（3）妊娠或哺乳期妇女；（4）合并肿瘤疾病者；（5）合并心肺肾等重要脏器功能受损者。将患者分为HBV DNA阳性组（n=53，HBV DNA＞1.0×103copy/mL）和HBV DNA阴性组（n=40，HBV DNA≤1.0×103copy/mL）。HBV DNA阳性组中男性32例，女性21例；年龄35～68岁，平均（45.69±3.28）岁；体质量指数（BMI）21～28 kg/m2，平均（24.59±0.87）kg/m2。HBV DNA阴性组中男性27例，女性13例；年龄33～69岁，平均（45.28±2.96）岁；BMI为21～27 kg/m2，平均（24.36±0.72）kg/m2。另选取同期来我院体检的健康志愿者50例作为对照组。对照组受试者入组前两周未出现炎症性疾病，各项生命体征指标均为正常。对照组中男性35例，女性15例；年龄32～71岁，平均（46.29±3.37）岁；BMI为21～30 kg/m2，平均（24.26±0.79）kg/m2。三组受检者的性别、年龄和BMI比较差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究获得我院伦理学委员会批准后进行。

1.2 检测方法对照组受检者于体检当天，HBV DNA阳性组和HBV DNA阴性组患者于入院次日抽取清晨空腹静脉血5 mL，以离心半径12 cm、3 500 r/min的速率离心12 min，收集上清液置于冰箱中保存待测。血清sVAP-1、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、DNMT1、Tim-3、白介素-4（IL-4）水平采用酶联免疫吸附试验检测，试剂盒购自南京赛泓瑞生物科技有限公司。采用贝克曼DXC800全自动生化分析仪测定患者的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、白蛋白（Alb）、总胆红素（TBIL）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）及HBV DNA水平，检测中所用试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司。操作均严格遵循试剂盒说明书完成。

1.3 观察指标比较三组受检者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平及肝功能指标及炎症因子水平；分析患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平与肝功能指标及炎症因子的相关性。

1.4 统计学方法应用SPSS20.0软件行数据统计分析。计数资料比较采用χ2检验。计量资料符合正态分布，以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析及LSD-t检验。经Pearson线性相关性分析血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平与肝功能指标及炎症因子的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组受检者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平比较HBV DNA阳性组、HBV DNA阴性组患者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平明显高于对照组，且HBV DNA阳性组明显高于HBV DNA阴性组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 三组受检者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平比较（±s）

表1 三组受检者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平比较（±s）

注：与对照组比较，aP＜0.05；与HBV DNA阴性组比较，bP＜0.05。

组别对照组HBV DNA阴性组HBV DNA阳性组F值P值例数50 40 53 sVAP-1（ng/mL）184.64±54.19 493.13±93.11a 762.75±102.05ab 23.482 0.001 DNMT1（μg/L）25.66±3.18 38.59±4.24a 51.37±5.29ab 30.472 0.003 Tim-3（%）5.16±0.93 13.28±2.35a 24.58±4.39a 24.582 0.001b

2.2 三组受检者的肝功能指标及炎症因子比较HBV DNA阳性组、HBV DNA阴性组患者的TNF-α、IL-4、ALT、AST、TBIL较对照组高，且HBV DNA阳性组较HBV DNA阴性组高，Alb水平较对照组低，且HBV DNA阳性组明显低于HBV DNA阴性组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 三组受检者的肝功能指标及炎症因子比较（±s）

表2 三组受检者的肝功能指标及炎症因子比较（±s）

注：与对照组比较，aP＜0.05；与HBV DNA阴性组比较，bP＜0.05。

组别对照组HBV DNA阴性组HBV DNA阳性组F值P值例数50 40 53 TNF-α（pg/mL）15.18±2.77 23.24±2.68a 31.53±2.87ab 18.237 0.005 IL-4（ng/L）4.72±0.93 13.56±3.41a 21.29±4.43ab 16.485 0.007 ALT（U/L）18.38±3.09 38.25±5.26a 52.96±9.32ab 27.493 0.001 Alb（g/L）66.89±6.12 51.57±5.25a 39.43±4.05ab 28.462 0.001 AST（U/L）16.19±3.23 35.68±5.17a 49.31±6.06ab 25.753 0.001 TBIL（μmol/L）9.23±2.25 19.71±4.36a 37.29±3.25ab 21.374 0.002

2.3 患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平与肝功能指标及炎症因子的相关性经Pearson线性相关性分析结果显示，sVAP-1、DNMT1、Tim-3与AST、TNF-α、ALT、IL-4、TBIL呈正相关，而与Alb呈负相关（P＜0.05），见表3。

表3 患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平与肝功能指标及炎症因子的相关性

3 讨论

根据世界卫生组织报道，全球范围内有过HBV感染经历者约有20亿人，且目前世界范围的CHB患者约有3.5亿人[7]。而有关CHB的早期检测一直存在困难，因此，寻找能够早期发现及判断CHB病情的血清生物学标志物对改善CHB患者预后意义重大。CHB在失代偿期后会逐渐发展为肝硬化，而肝细胞的持续受损也可导致肝纤维化，从而导致患者肝功能下降，但是仅仅依据单纯的肝功能水平检测并无法彻底的判断CHB患者病情严重程度[8-9]。既往也有研究表明，炎症反应激活在CHB的病情进展中发挥重要作用[10]。HBV在反复感染肝细胞过程中，可引起巨噬细胞对其的清除和巨噬，同时巨噬细胞还会分泌炎症因子如TNF-α、IL-4等，从而介导肝细胞炎症反应及死亡[11]。VAP-1具有致炎效应，常以水解形式sVAP-1参与着炎性反应的发生机制[12]，但有关sVAP-1在CHB中的作用报道相对较少。DNMT1为催化DNA甲基化的重要调控分子，在肝癌中过表达，其中肝癌发病的主要原因与HBV感染有关，故DNMT1在CHB中的作用也被广泛关注[13]。Tim-3为近年来新发现的一类负性免疫调控因子，Tim-3水平增加可诱导Thl细胞凋亡，而Thl/Th2平衡与CHB患者病情程度的关联性具有重要意义[14]。

本研究结果显示，CHB患者中肝功能异常，TNF-α、IL-4存在异常升高情况。Alb是反映肝脏代谢功能的重要指标，ALT、AST、TBIL是反映肝脏炎性损伤的重要指标。CHB患者中炎性因子被激活，可产生大量氧自由基，而氧自由基的过度生成又可攻击肝细胞，促进肝脏炎症反应发生，影响肝细胞内信号传导及基因表达，加剧肝细胞炎性损伤，降低患者肝功能[15]。本次研究结果还显示，CHB患者中的sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平存在异常升高，可见上述三种指标均参与着CHB的疾病进展。有研究表明炎症可导致sVAP-1水平明显升高，血清sVAP-1水平可能是炎症性肝病疾病活动度的潜在标志物[16]。Tim-3是一种T淋巴细胞负性共刺激性因子，高西阳等学者的研究表明，CHB患者外周血单核细胞Tim-3表达上调，且Tim-3/galectin-9通路能够促进脂多糖诱导的单核细胞的炎症因子的分泌[17]。表观遗传是指在未改变基因序列的情况下改变基因表达，在细胞的增殖、生长中可以稳定传递给子代。DNA甲基化为表观遗传学研究最多的机制之一，而DNA甲基化可通过调节DNMT1影响疾病进展。以往的研究证实HBV感染可以上调DNMT1表达[18]。本研究Pearson相关性分析结果显示，sVAP-1、DNMT1、Tim-3与TNF-α、IL-4、ALT、AST、TBIL呈正相关，而与Alb呈负相关。肝脏的主要功能有物质代谢、排泄、分泌、生物转化等，肝细胞一旦受损，则影响肝脏功能，ALT、AST、TBIL、Alb可有效反映肝实质细胞的储备功能及肝细胞慢性损伤发生的严重程度。TNF-α、IL-4可有效反映CHB患者炎症严重程度，而sVAP-1、DNMT1、Tim-3与肝功能、炎症指标均存在相关性，可见sVAP-1、DNMT1、Tim-3均可能参与了肝脏炎性病理损伤过程，可考虑作为CHB诊断的血清学指标。

综上所述，CHB患者的sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平、肝功能指标及炎症因子指标存在异常升高，且sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平与肝功能指标及炎症因子指标具有相关性，三者有望成为监测CHB患者病情的有效指标。