厌食康颗粒薄层色谱鉴别方法改进研究

2021-12-27刘永逸符传武覃华亮覃子龙

亚太传统医药 2021年11期

刘永逸,杨婧,符传武,覃华亮,洪薇,覃子龙

(柳州市质量检验检测研究中心,广西柳州545006)

厌食康颗粒为常用甲类非处方中成药,具有健脾、开胃、消食等功效,用于治疗脾胃气虚所致的小儿厌食症[1]。厌食康颗粒由广山楂、小槐花、白术、茯苓、麦芽、陈皮6味中药组成,其中小槐花为主要处方药味之一。小槐花为豆科植物小槐花Desmodium caudatum(Thunb.)DC.的干燥全株,分布于长江以南各省,全年可采,全株入药,主要用于感冒发热、小儿疳积、脘腹疼痛、疹出不透等病症的治疗[2-4],其含有苦参碱、山柰酚、豆甾醇、柠檬酚、桦木醇、槐果碱等化学成分[5-8],其醇提物和水提取物具有镇痛、镇静催眠、抗氧化等方面的药理作用[9-10]。

厌食康颗粒现行质量标准[1]小槐花薄层色谱鉴别方法存在有样品前处理乳化现象严重,指标成分斑点不稳定,重现性差等问题。除此之外,其样品及对照药材前处理及展开剂中使用的三氯甲烷试剂,易分解而生成剧毒的光气(碳酰氯)[11],不仅对检测人员的身体健康构成较大威胁,也不符合当前绿色环保的检验理念。谢东等[12]在研究厌食康颗粒的质量控制所用的提取溶液及展开剂中同样也含有三氯甲烷。基于现行质量标准和文献方法的不足,作者进行深入研究,建立了可用于厌食康颗粒质量控制的新的薄层色谱鉴别方法。

1 仪器与试药

ATS4薄层自动点样仪(瑞士CAMAG公司);TLC Visualizer薄层色谱数码成像系统(瑞士CAMAG公司);SK8200HP超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司);AE200电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);双槽展开缸(上海信宜仪器厂)。

小槐花(饿蚂蝗)对照药材(购自中国食品药品检定研究院,批号为0954-200204);硅胶G板(青岛海洋化工有限公司,规格为20 cm×20 cm);水为纯化水;三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇、氨水等其他试剂均为国产分析纯。

厌食康颗粒(规格:每袋装7 g,批号:607003;608012;609002);缺小槐花阴性样品;小槐花(Desmodiumcaudatum(Thunb.)DC.)药材及其茎和叶,均由广西纯正堂制药厂提供,其中小槐花药材经柳州市食品药品检验所李玲主任中药师鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 现行标准方法

取本品内容物14 g,研细,加水30 m L使溶解,滤过,滤液用氨试液调p H至9,加三氯甲烷提取2次,每次15 m L,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇1 m L使溶解,作为供试品溶液。另取小槐花对照药材4g,分别加水煎煮30 min,滤过,滤液浓缩至30 m L,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(2010年版《中国药典》一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各10μL分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-丙酮-二乙胺(6∶4∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化秘钾试液。观察供品色谱,在与对照药材色谱相应的位置上,未显相同颜色的斑点,且对照药材色谱上的斑点颜色也较浅。薄层色谱如图1所示(本次实验同时取缺小槐花阴性样品14g,小槐花药材的叶4 g,小槐花药材的茎4g,小槐花药材4g,小槐花对照药材4g,同法分别制成相应的试验溶液,各吸取10μL分别点于上述同一硅胶G薄层板上;T:23℃;RH:59%;展距13 cm)。

图1 厌食康颗粒的薄层色谱(现行标准方法)

2.2 改进的方法

取本品内容物28 g,研细,置于装有二氯甲烷60 m L及2m L氨水的具塞三角瓶中,超声10 min,倾倒出提取液,滤过,向具塞三角瓶再次加入二氯甲烷60m L及2m L氨水,超声10 min,滤过,合并提取液,蒸干,残渣加甲醇1 m L使溶解,作为供试品溶液。另取小槐花对照药材2 g,分别加水煎煮30min,滤过,滤液蒸干,同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法(2015年版《中国药典》四部通则0502)试验,吸取上述两种溶液各20μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二氯甲烷-甲醇-氨水(20∶2∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化秘钾试液。观察供试品色谱,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且对照药材色谱上的斑点颜色也明显比标准方法深。薄层色谱如图2所示(本次实验同时取缺小槐花阴性样品28 g,小槐花药材的叶2 g,小槐花药材的茎2g,小槐花药材2 g,同法分别制成相应的试验溶液,各吸取20μL分别点于上述同一硅胶G薄层板上;T:23℃;RH:59%;展距10 cm)。

图2 气厌食康颗粒的薄层色谱(改进的方法)

3 讨论

3.1 现行质量标准的不足

本研究曾多次采用现行质量标准测定同一批样品,发现样品斑点不稳定,时有时无,重现性较差,为了保证检验结果的准确、可靠,厌食康颗粒现行质量标准项下小槐花的薄层色谱鉴别方法急需改进。

3.2 前处理方法的确立

本研究前处理方法采用超声提取法替换了现行质量标准中的萃取法,较好地解决了现行质量标准处理样品时发生乳化的现象,且从图1及图2中可见,采用超声提取法处理样品和对照药材时,在供品色谱与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且对照药材色谱上的斑点颜色也较深,而采用萃取法处理样品和对照药材时,在供品色谱与对照药材色谱相应的位置上,未显相同颜色的斑点,且对照药材色谱上的斑点颜色也较浅。可见,改进后的前处理方法明显优于现行质量标准中的方法。

3.3 温湿度对测定结果的影响

本研究分别考察了薄层板展开过程中温度和相对湿度对结果的影响。结果表明:温度对指标成分斑点几乎无影响;但当相对湿度大于90%时,会影响指标成分斑点的显现。

3.4 展开系统的选择

本研究考察了正丁醇-冰醋酸-水、三氯甲烷-丙酮-浓氨、三氯甲烷-丙酮-二乙氨、二氯甲烷-甲醇-浓氨4种展开剂系统。结果显示:正丁醇-冰醋酸-水的展开效果较差,且展开时间较长;三氯甲烷-丙酮-浓氨、三氯甲烷-丙酮-二乙氨、二氯甲烷-甲醇-浓氨经调整展开剂的配比,均能获得较好的展开效果,但考虑三氯甲烷性质不稳定,易分解生成剧毒的光气,对检验人员身体健康构成威胁,此外,还考虑到三氯甲烷和丙酮是易制毒试剂[13-14],购买及保管都有比较严格的规定,为了今后使用方便,改进方法选用甲烷-甲醇-浓氨展开剂系统。