六例由副溶血性弧菌引起的食物中毒的调查分析*

钟煌培，陈培阳，李曲文

1.泉州市鲤城区疾病预防控制中心，福建泉州 362000；

2.泉州市惠安县疾病预防控制中心，福建惠安 362100；

3.福建省疾病预防控制中心，福建福州 350001

副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus， VP）是一种嗜盐生长的革兰氏阴性弧菌，是常见的食源性疾病和感染性腹泻病原菌［1］。2018年9月6日下午15：30，泉州市鲤城区疾病预防控制中心接到泉州市中医院报告，该院急诊科收治6例呕吐、腹泻症状患者，结合临床表现、流行病学和实验室检测分析，确定为副溶血性弧菌引起的食物中毒事件。研究通过对6例由副溶血性弧菌引起的食物中毒进调查分析，为今后更好地防控食物中毒事件提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

来自于泉州市中医院收治6名呕吐、腹泻症状患者，其中男性4名，女性2名，年龄35～51岁，平均年龄3（9.6±6.7）岁。临床表现6例患者以腹痛、呕吐、腹泻等急性胃肠炎症状为主，目前病情稳定。大部分病例血常规检查提示：白细胞计数增高、中性粒细胞百分比增高。临床治疗包括：西药予兰索拉唑、铝镁混悬液、磷酸异帕米星、酪酸梭菌肠球菌及补液、维持水电解质平衡等治疗。就诊病例情况一览表，见表1。

表1 就诊病例情况一览表

1.2 主要仪器试剂

荧光PCR仪器为ABI7300 plus，核酸检测试剂来自深圳生科源。沙门氏菌显色培养基、志贺氏菌显色培养基、弧菌显色培养基和MYP蜡样芽孢杆菌培养基等检测试剂来源于广东环凯微生物试剂公司和科玛嘉。MALDI-TOF MSMicroflex TM LT型（德国Bruker公司）、MSP 96孔靶板和α-氰基-4-羟基肉桂酸基质（HCCA）购自德国Bruker公司，甲酸、乙腈和三氟乙酸购自美国Sigma公司。

1.3 方法

对6例患者进行流行病学调查，采集样本进行实验室检测依据GB-4789《食品安全国家标准食品微生物学检验》［2］进行沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱狐菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌，并利用利用实时荧光定量PCR进行常见致病菌的核酸检测，PCR检测参照试剂说明书进行常见致病菌核酸的检测。

2 结果

2.1 流行病学分析结果

（1）时间分布：6例患者发病时间为9月6日凌晨1：00至6：00，宴会进餐时间为9月5日中午12：00，发病时间集中在进餐后13～18 h（2）地点分布：患者集中分布于9月5日中午在该宴会就餐人员。（3）人员分布：男性4个，女性2个。（4）饮食史：患者均参加宴会，有共同进食相同食物。

2.2 实验检测结果

2.2.1 分离培养 6份肛拭子标本经分离培养鉴定，在弧菌科玛嘉显色培养基均长有紫红色菌落，提示为检出副溶血性弧菌，而沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱狐菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌均未检出。

2.2.2 质谱鉴定结果 6株菌株经质谱鉴定分析，均为副溶血弧菌，具体鉴定情况，见表2。

表2 4质谱鉴定结果

2.2.3 核酸检测样本经试剂盒提取细菌基因组DNA后，进行荧光PCR检测显示副溶血性弧菌核酸为阳性，而沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱狐菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌和致泻性大肠埃希氏菌核酸检测均为阴性。

2.2.4 毒力基因检测 6份副溶血性弧菌核酸阳性的标本中，均携带耐热直接溶血素（tdh）和不耐热溶血毒素基因（tlh）。

3 讨论

副溶血性弧菌是一种存在于鱼、虾、贝类等海产品中的革兰阴性菌，是最常见导致食源性疾病的病原菌，常由于摄入生的或未煮熟的海产品，引起发热、腹痛、腹泻、恶心、呕吐等急性胃肠炎症状，严重时甚至导致昏迷、休克和死亡［2-4］。此事件患者有共同就餐史，发病时间相对集中，临床症状相似，肛门拭子中均检出副溶血性弧菌，且潜伏期和临床症状都与之相符，患者之间无相互传染现象，根据流行病学调查、临床表现、实验室检测结果，判定此为一起副溶血性弧菌引起的食物中毒事件。

由于短期内出现多例疑似病例，本文也通过联合了常规分离培养、质谱鉴定及荧光PCR快速筛查检测，并及时得到了副溶血性弧菌核酸PCR阳性结果，对于疫情的处理和控制，取到了一定的辅助作用。同时后期对分离培养出来的6例菌株进行耐热直接溶血素基因（tdh）和不耐热溶血毒素基因（tlh）检测，发现6株菌株均携带tdh和tlh基因，tdh和tlh基因编码的耐热溶血素和不耐热溶血素是副溶血性弧菌的致病因子。tlh基因编码的不耐热溶血毒素能与卵磷脂结合能使绵羊红细胞溶血，tlh基因具有广泛种属特异性，tlh基因为副溶血性弧菌的特异性基因。而毒力基因tdh编码耐热直接溶血素（TDH），它能溶解人或者兔血红细胞，这一现象叫神奈川现象（Kanagawa phenomenon，KP），这也是常被用于区分致病性和非致病副溶血性弧菌菌的一个标志［5-9］。tdh基因阳性不一定是副溶血性弧菌，如非O1群霍乱弧菌、拟态弧菌、霍利斯弧菌中的tdh基因与副溶血性弧菌同源性达93%～96%［10-11］，这在今后的检测工作中应引起重视，应用多重PCR检测试剂并结合相应的生化反应、血清学鉴定等，以防止误诊。

从食物中毒事件来看，对于今后防范食物中毒应要加强食品从业人员的管理和培训，增强食品安全意识。食物要煮熟煮透，生熟要分开避免交叉污染，厨具、餐饮具应当消毒使用。荧光定量PCR检测技术在食物中毒的处理中具有快速、准确、特异性强的优点［12-14］，可辅助用于处理各种突发公共卫生事件为提供快速、准确的检测结果发挥重要作用。