黑色素瘤抑制性活性蛋白对非小细胞肺癌患者肿瘤临床分期、组织分化程度的影响

谢忠海 沈琦斌 李冬 顾勤花

非小细胞肺癌细胞生长分裂慢、扩展转移较晚，发病初期无明显症状，通常确诊时病情已进展至中晚期，5 年生存率较低，预后差，严重威胁患者生命健康安全[1]。黑色素瘤抑制性活性蛋白（melanoma inhibitory active，MIA）最早通过纯化处理，从HTZ-19 恶性黑色素瘤细胞清液中分离而成，其细胞分子结构包含107 个疏水肽氨基酸及11 个KDA 蛋白质，在肿瘤细胞的进展和转移中发挥重要作用[2]。MIA 蛋白表达和非小细胞肺癌的恶性增殖及侵袭、转移等生物学特性密切相关，能够有效抑制肺癌细胞的转移和分化，阻断肿瘤血管形成，进而促进肺癌细胞凋亡[3]。基于此，本研究旨在观察MIA 对非小细胞肺癌患者肿瘤临床分期、组织分化程度的影响，以期为临床治疗方案的制定提供依据，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2020 年5 月—2021 年5 月浙江省湖州市中心医院住院治疗的非小细胞肺癌患者86 例纳入本次研究，其中男51 例，女35 例，年龄52～87（69.75±17.29）岁；TNM 分期[4]：Ⅲ期23 例，Ⅳ期26 例，Ⅱ期17 例，Ⅰ期20 例；Karnofsky 评分[5]：63～88（73.22±6.27）分；癌细胞转移：淋巴转移35 例，血液转移28 例，骨转移12 例；组织分化：低分化42例，中分化31 例，高分化13 例。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关伦理学原则。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：（1）所有入选患者全部通过影像学、手术病理检查，符合中国临床肿瘤学会制定的《中国非小细胞肺癌免疫检查点抑制剂治疗专家共识（2020 年版）》相关诊断标准[6]；（2）患者预计生存期＞3 个月，Karnofsky 评分＞60 分；（3）所有患者与其家属对本研究全部知情，签署同意确认书。排除标准：（1）合并肺部创伤性疾病、肺动脉高压、肺结核等肺部器质性病变疾病；（2）合并肺血吸虫病、新型冠状病毒性肺炎等肺部传染性疾病；（3）恶性肿瘤术后复发、其他癌症转移及凝血功能障碍患者；（4）伴有严重精神分裂综合征、语言和意识等基础功能丧失及临床资料不完整的患者。

1.3 方法

1.3.1 资料采集 制定《非小细胞肺癌患者基础资料问卷调查表》采集患者的性别（男、女），年龄（＜60岁、≥60 岁），临床分期（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期），淋巴结转移（有、无）及组织分化程度（低分化、中分化、高分化）等资料。

1.3.2 MIA 检测 采集非小细胞肺癌患者手术肿瘤细胞病理组织，石蜡包埋后采用EnVision 免疫组织化学染色法测定非小细胞肺癌细胞及其癌旁组织MIA 表达，操作步骤全部严格参照说明书执行。MIA蛋白工作液浓度比为1∶150。

1.3.3 MIA 免疫组化染色结果判定标准 在显微镜下观察癌细胞及其癌旁组织MIA 染色结果。细胞组织结构完好，且细胞中出现清晰棕黄色颗粒判定为阳性。分别采用显色强度、显色细胞比例进行MIA 免疫组化染色结果判定，具体如下：（1）显色强度：浅黄色：1 分，棕黄色：2 分，棕褐色：3 分；（2）显色细胞比例：显色细胞百分比＜5%：0 分；5%～25%显色：1 分；＞25%～50%显色：2 分；＞50%～75%显色：3 分；显色细胞比例＞75%：4 分。总分=显色强度计分×显色细胞比例计分，总分判定标准：0 分：阴性（-）；1～4 分：弱阳性（+）；5～8 分：阳性（++）；9～12 分：强阳性（+++）[7]。根据MIA 免疫组化染色结果分组：MIA 低表达组：弱阳性，显色细胞总分1～4 分；MIA 高表达：阳性（++）或强阳性（+++），显色细胞总分5～12 分。

1.4 统计学方法 应用SPSS 21.0 软件行数据统计学处理，计量资料采用均数±标准差（）描述，行t检验；计数资料采用例（%）描述，采用χ2检验，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 非小细胞肺癌、癌旁细胞组织MIA 表达 非小细胞肺癌、癌旁细胞组织均有MIA 阳性表达，其中非小细胞肺癌细胞阳性染色部分显示为弥漫性分布，包膜胞浆内呈现棕黄和棕褐色团块，细胞核内无分布，癌旁细胞组织阳性染色部分显示浅黄色。见图1。

图1 非小细胞肺癌、癌旁组织MIA 免疫组化染色结果（×400）

2.2 MIA 表达与非小细胞肺癌临床指标的相关性非小细胞肺癌细胞组织MIA 表达与患者性别、年龄无相关性，差异无统计学意义（P＞0.05）；非小细胞肺癌细胞组织内MIA 表达和肿瘤临床分期、淋巴结转移、组织分化程度存在密切相关性，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 MIA 表达与非小细胞肺癌临床指标的相关性[例（%）]

2.3 不同肿瘤临床分期细胞组织MIA 表达的比较Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌、癌旁组织细胞MIA 表达均明显高于Ⅰ～Ⅱ期，且非小细胞肺癌MIA 表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同肿瘤临床分期细胞组织MIA 表达的比较（pg/mg，）

表2 不同肿瘤临床分期细胞组织MIA 表达的比较（pg/mg，）

注：MIA 为黑色素瘤抑制性活性蛋白；与同期癌旁组织比较，aP＜0.05

2.4 不同组织分化程度肿瘤细胞组织MIA 表达的比较 高分化非小细胞肺癌、癌旁组织细胞中MIA表达明显高于中分化、低分化，且非小细胞肺癌MIA表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 不同组织分化程度非小细胞肺癌及癌旁细胞组织MIA表达的比较（pg/mg，）

表3 不同组织分化程度非小细胞肺癌及癌旁细胞组织MIA表达的比较（pg/mg，）

注：MIA 为黑色素瘤抑制性活性蛋白；与低分化比较，aP＜0.05；与中分化比较，bP＜0.05

3 讨论

非小细胞肺癌是肺癌中最为常见的类型，发病率占所有肺癌的80%以上，具有致病机制复杂、致死率高、预后差等特点，严重威胁人们的生命健康安全[7]。MIA 作为一种新型的黑色素瘤抑制性活性蛋白，可对非小细胞肺癌细胞株的异常增殖和分化进行有效抑制，极大削弱非小细胞肺癌细胞的软琼脂集落形成能力，从根本上降低非小细胞肺癌细胞进一步迁移、分化、侵袭能力[8]。

本研究结果显示，非小细胞肺癌、癌旁细胞组织均有MIA 阳性表达，其中非小细胞肺癌细胞阳性染色部分显示为弥漫性分布，包膜胞浆内呈现棕黄和棕褐色团块，细胞核内无分布，癌旁细胞组织阳性染色部分显示浅黄色；说明非小细胞肺癌的MIA阳性表达明显高于癌旁细胞组织，可以作为非小细胞肺癌与癌旁细胞组织的诊断标志物，为临床相关诊疗方案的制定提供参考，同Nencetti 等[9]研究结果相类似。究其原因发现，非小细胞肿瘤组织在生长、增殖与分化的过程中，会大量分泌生成MIA，于正常细胞中对抗肿瘤形成，亦可帮助肿瘤细胞抵抗放化疗产生的有毒、有害物质堆积。抑制蛋白酶体活性，可抑制自身免疫疾病及癌症的发展。非小细胞肺癌细胞中的MIA 蛋白表达要高于癌旁细胞，抑制蛋白酶体的活性，进而阻断肿瘤细胞蛋白质降解，促使蛋白质堆积，进一步促进非小细胞肺癌细胞的凋亡[10]。

本研究结果显示，非小细胞肺癌细胞组织内MIA 表达和肿瘤临床分期、淋巴结转移、组织分化程度存在密切相关性（P＜0.05）；说明非小细胞肺癌患者的肿瘤临床分期、淋巴结转移、组织分化程度均可以直接影响患者体内MIA 表达；同时，本研究还分析了MIA 与非小细胞肺癌组织的生长、黏附具有关联性，在肿瘤细胞的转移、增殖、分化过程中，和人体免疫反应相互作用，共同促进肿瘤细胞的凋亡；MIA 通过特异性阻断肺癌组织细胞与纤连蛋白、层粘连蛋白结合，从根源上降低肿瘤细胞的活性，降低细胞组织分化能力。本研究结果显示，Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌、癌旁组织细胞MIA 表达均明显高于Ⅰ～Ⅱ期，高分化非小细胞肺癌、癌旁组织细胞中MIA 表达高于中分化与低分化，且非小细胞肺癌MIA 表达高于癌旁组织；说明可以通过增加MIA 表达，降低非小细胞肺癌患者肿瘤组织分期和分化能力，阻断肿瘤血管形成，促进肺癌细胞凋亡，进而有利提高临床治疗效果。

综上所述，MIA 能够有效抑制非小细胞肺癌细胞的转移和分化能力，且与非小细胞肺癌患者的肿瘤临床分期、淋巴结转移、肿瘤细胞组织分化密切相关。