食品微生物检测中快速测试片的应用研究

李明言

食品在生产、加工和运输的过程中都可能会受到微生物污染，如果将存在污染问题的食品售卖给消费者，就可能会造成十分严重的后果。因此，通过更加高效的方式对食品当中微生物进行检验和测定，是监督检验部门必须尽到的职责和义务。当前，大部分食品微生物的检验与测定方法都存在操作复杂、检验时间长、操作要求高等问题，尽管检测精度较高，但仍然急需一种更加快速的检验和测定方法。快速测试片是近年来产生的一种全新的检测工具，主要以Petrifilm作为载体，并且已经得到了十分广泛的应用。为了进一步提高快速测试片在食品微生物检测当中的适应性，本文开展了相关研究。

一、以滤纸为载体的测试片

1.检测试剂。为了对食品当中含有的微生物进行检测，首先需要在选定的食品检测对象当中对其培养基以及检测过程中所需的各类试剂进行配制。筛选白色、无毒、中速、密度均匀、吸附力合格的滤纸，将其裁剪成合适的尺寸，通常为40mm×50mm。将灭菌的TTC加入到无菌的培养基后，再将无菌滤纸浸入其中，根据需要控制滤纸的培养基吸附量，以适宜的温度干燥后，分装于已灭菌的聚丙烯塑料口袋内，密封备用。

在检测过程中，还需要使用的检测试剂是磷酸盐缓冲溶液。在对这一溶液进行配置时，需要将500mL的蒸馏水加入到磷酸二氢钾当中，并使其充分溶解。通常情况下，磷酸二氢钾溶液的含量应当在25-28g以内。利用1mol/L的氢氧化钠溶液对磷酸二氢钾进行溶解，并在溶解的过程中控制其pH值在7.2-7.4范围内。利用蒸馏水对上述制备的溶液进行稀释，并将其存储在冰箱当中，方便后续检测时使用。

最后，还需要对营养琼脂和无菌生理盐水进行配制。营养琼脂中的主要成分包括蛋白胨、琼脂、氯化钠、蒸馏水等，将上述除琼脂以外的材料添加到蒸馏水当中，并对其进行搅拌，充分混合后加入浓度为15%的氢氧化钠溶液，最后加入琼脂，并对其进行加热处理。当溶液沸腾后，确保琼脂全部溶解，再将其分装在量瓶当中，并分别对其进行15min的121℃高温、高压灭菌处理。

按照上述方法完成对检测试剂的制备后，能够保证检测药品当中不含有微生物干扰，确保后续对食品进行微生物检测时不会由于检测设备或检测试剂当中存在微生物而对检测结果造成影响，确保检测结果的精度符合要求。

2.快速测试片的微生物底物浓度显色。按照上述方法完成对食品样品培养基及检测试剂的配制后，针对食品当中的微生物进行测定。以食品当中常见的大肠杆菌微生物为例，针对其在食品当中的含量进行测定。在引入快速测试片后，测定的具体流程如图1所示。

按照图1所示的流程完成对食品当中大肠杆菌微生物的测定后，为了实现微生物底物浓度显色，还需要在上述配制的基础培养配方基础上增加酶显色底物。浸液配方为（100mL）：乳糖2.5g、蛋白胨1.5g、胆盐0.15g、TTC（40g/L）2mL、琼脂0.1g、氯化钠0.3g、磷酸氢二钾0.4g、溴甲酚紫2mg、乳化剂S（10g/L）2mL，pH为6.8-7.0，灭菌条件为115℃、15min，浸泡条件为60℃、1.0min，烘干温度为55℃。将待测液滴加到纸片上后，在37℃条件下培养16-18h，即可出结果。

通过单因素筛选出培养基当中的大肠杆菌，并将其pH值控制在最适宜的7.4浓度水平。同时，为了清晰地分辨不同菌落，在培养基当中引入两种显色的酶底物。酶底物的含量应当尽可能小，只需要在被检测的食品样品当中滴入几滴，以此实现对大肠杆菌与大肠菌群的区分和测定。在发育完全的菌落当中，大肠杆菌通常会以蓝色显示其菌落，而大肠菌群则会以蓝色和红色两种颜色显示其全部菌落。

除此之外，食品当中常见的微生物对应的酶底物显色与分布通常为：酵母菌以蓝色的棉花状菌落呈现，金黄色葡萄球菌以直径为1-2mm的蓝色或蓝绿色菌落呈现，其他葡萄球菌的显色通常为白色。快速测试片可以根据上述不同微生物的表现情况，实现其在食品当中更加直观的测定，从而进一步提高检测的效率。

二、讨论

为了验证上述提出的检测方法在实际应用中是否能够解决传统检测方法检测时间过长的问题，将快速测试片的检测方法作为实验组，将传统基于ELISA法的检测方法作为对照组。利用两种检测方法对相同食品中的微生物进行检测，并将两种检测方法的检测时间作为对比指标，以此验证两种检测方法的检测效率。选择以某食品加工厂生产的产品作为研究对象，在确保该产品中不存在任何其他微生物干扰的条件下，人为引入细菌、大肠杆菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌等微生物，并在产品正常保存的環境当中进行培养。记录实验组和对照组完成食品微生物检测的时间，结果如表1所示。

从表1可以看出，各类微生物在正常培养条件下进行培养，实验组检出的时间明显低于对照组检测的时间。因此，通过上述实验证明，本文提出的快速测试片的检测方法在实际应用中能够有效缩短检测时间，在确保检测结果准确度的条件下，实现对食品中微生物的高效检出。

将上述提出的检测方法设计思路作为基础，可以为多种微生物特异显色物质的开发提供更可靠的参考依据，并进一步扩大快速测试片的应用范围。未来，快速测试片还将结合更多新型的高分子聚合物，以弥补检测方法在实际应用中存在的不足，使其作用得到充分发挥，提高食品微生物的检测效率，以达到为食品安全提供保障的目的。同时，在今后的研究当中，还将针对如何降低食品微生物检测的复杂程度，减少不必要的成本支出等方面进行深入探究，从而为食品生产企业带来更加直接的效益，为食品安全监督提供更加准确、高效、便捷的技术支持。