“绿叶中色素的提取和分离”实验步骤2、3的改进

贺华丽

中图分类号：G622 文献标识码：B 文章编号：1002-7661（2016）08-090-01

本实验是新人教版高中生物必修一《分子与细胞》当中的一个必做实验。目的是让学生通过分组实验，进行绿叶中色素的提取和分离，探究绿叶中色素的种类和含量，感性地认识色素的相关生物学知识。

一、滤纸条的制备及滤液细线的绘制

原教材关于滤纸条的制备，是将干燥的定性滤纸条剪成略小于试管长与宽的滤纸条，一端减去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线；然后用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀地画出一条细线。待滤液干后，再画一两次。

二、制备滤纸条及绘制滤液细线的缺点

按照教材制作滤纸条，过程不仅复杂，而且在进行层析实验时，滤纸条容易贴试管壁，从而影响色素的分离，干扰实验结果；用毛细吸管画滤液细线时，学生不容易掌控毛细吸管，毛细吸管容易碎断，且画出来的滤液细线不够“细、直、齐”，导致分离的色素带不平行，呈波浪状，甚至色素重叠，难以辨认。

三、制备滤纸条及绘制滤液细线的改进一

潘亚平采用培养皿法不用滤纸条，也不画滤液细线，而取直径为11 cm的干燥圆形定性滤纸，用毛细吸管吸取色素滤液，在滤纸的中央点成圆形的色素斑，重复4??—5次，然后取一枚缝衣针，穿一条细棉线，在棉线末端打个结，将针穿过滤纸上的色素斑中心，在距线结约4cm处剪断棉线。取直径10cm的培养皿一套，向培养皿底中加入5ml层析液把上述圆形滤纸扣在培养皿底面上，无线结的一面朝下，棉线则浸没在层析液中。再将培养皿盖盖在滤纸片上。采用该方法，可以看到色素随层析液由线结处均匀地向周围扩散。

笔者按照上述方法重复多次，实验现象均不明显。分析原因，主要是一根缝衣服的棉线太细，引取层析液的量少，且层析液到达滤纸片的速度慢，时间长，层析液随之也逐渐挥发，导致效果不佳，色素无法充分分离（如图一）。

鉴于以上实验过程中所遇到的问题，笔者经过多次实验修改。同样采用圆形滤纸培养皿法，只不过在滤纸片中央用尖头镊子戳一个小洞，塞入4根较粗大的纯棉线，棉线的一头（不打结）稍露出滤纸片，一头剪为5cm长；用正常大小的笔帽盖蘸取少量事先提取的滤液，盖在穿有棉线的滤纸片中央，让滤液成圈印在纯棉线周围，待干后重复2-3次。培养皿底部加入10ml的四氯化碳，将印好滤液线圈的圆形滤纸片放在培养皿表面，使棉线浸润在层析液中，盖上培养皿盖。可以发现，层析液随着4根纯棉线引流，很快就可以到达圆形滤纸片，然后色素随着层析液在圆形滤纸片上扩散开来，明显分离成4个不同颜色的同心圆。从外到内依次为橙黄色、黄色、蓝绿色、黄绿色，依次对应的色素分别为胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a，叶绿素b.（如图二）；

四、制备滤纸条及绘制滤液细线的改进二

根据池春玉等人的研究，同样取圆形滤纸一张，将其紧紧卷成圆筒状，减去两端后成5cm；将纸芯插入滤纸中央，再用相同的方法画滤液色素圈，用四氯化碳层析，这种方法使得层析液引流的速度更快，色素分离效果更显著，结果如图三。

用以上改进的方法，学生免去制作复杂的滤纸条，也不用画滤液细线，实验操作更简单，现象更明显，色素分离带更美观，不会出现色素带不平行和呈波浪状相重叠的情况。大大提高实验的成功率，增加学生的实验兴趣，激发学习生物学的热情。