胎盘组织中AQP-9、HIF-1α表达水平与子痫前期患者病情程度的关联性分析

高艳丽

（汝州市人民医院 妇产科，河南 汝州 467599）

子痫前期是临床常见妇产科疾病，具有显著高血压、蛋白尿的特点，发病率约为2%～8%，在发展中国家成为威胁产妇与新生儿死亡的重要原因，也是导致母体继发糖尿病、心脑血管疾病的危险因素［1］。但目前子痫前期的具体发病机制尚不明确，唯一途径是通过分娩的胎盘组织进行病理检查，探究其发生发展机制［2］。胎盘含氧量会直接参与滋养细胞生理病理改变，水通道蛋白-9（AQP-9）是新发现跨膜蛋白质，能调控自由水被动跨生物膜转运作用，在细胞分化迁移过程中发挥重要作用，加速滋养细胞凋亡，导致胎盘组织缺血缺氧［3］；而缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）能在缺氧条件下通过调节靶基因血管内皮生长因子转录参与调节滋养细胞增殖浸润能力参与病理过程［4］。本研究选取汝州市人民医院子痫前期患者112 例，旨在探讨胎盘组织中AQP-9、HIF-1α 表达水平与病情程度相关性。现报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

回顾性采集2019 年12 月至2020 年12 月汝州市人民医院112 例子痫前期患者及90 例同期健康妊娠产妇的临床资料，其中子痫前期患者年龄25～38 岁，平均（29.58±2.18）岁；体质量指数（BMI）18.4～27.2 kg/m2，平均（23.16±1.89）kg/m2。健康妊娠产妇年龄24～39 岁，平均（30.02±2.21）岁；BMI18.5～27.0kg/m2，平均（22.96±1.91）kg/m2。两者基线资料（年龄、BMI）比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 选例标准

纳入标准：子痫前期患者妊娠20 周后收缩压（SBP）/舒张压（DBP）≥140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）；24 h 尿蛋白≥0.3 g 或随机尿蛋白测试为阳性；均伴有水肿、胸闷、头晕头痛、恶心呕吐、上腹部疼痛；均为单胎妊娠且胎儿健康无异常；同期健康妊娠产妇无任何妊娠期合并症；临床资料完整。排除标准：孕前合并严重心肺功能不全；伴有胎盘早剥、先兆流产、胎盘前置等妊娠并发症；胎儿染色体异常；宫内死胎；合并糖尿病、原发性高血压；合并免疫缺陷性疾病、肺结核、甲状腺功能亢进、慢性肾炎等重要脏器功能障碍。

1.3 方法

①胎盘组织采集：产妇娩出胎儿后，立即取半径5 cm 范围内胎盘母体面中央区域，大小为1 cm×1 cm×1 cm，并避免梗死、钙化、出血区域，采用4℃生理盐水冲洗血污，放置于无菌、无核酶EP管中，并立即采用液氮冷冻处理，然后将胎盘组织转移至温度为-80℃的冰箱中保存，择期测定AQP-9 信使核糖核酸（mRNA）、HIF-1α mRNA 表达水平。②胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平测定：将液氮中冷冻的胎盘组织加入1 mL Trizol，并研磨为粉末状，提取胎盘组织中总核糖核酸（RNA），然后检测RNA 含量与纯度；采用逆转录试剂盒逆转录处理得到互补脱氧核糖核酸（cDNA），并对引物序列进行设计，采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达量，反应体系为20 μL，反应程序为10 min 95℃预变形、15 s 90℃变性、10 s 60℃退火、15 s 95℃延伸，共计40 个循环；以β-actin 作为内参，各基因引物序列如下：AQP-9 上游引物为5'-CTCCTGATTATTGTC ATTGC-3'，下游引物为5'-ATCCACCAGAAGTrGTI T-3'；HIF-1α 上游引物为5'-CAGCTATTTGCGTGT GAGGA-3'，下游引物为5'-CCAAGCAGGTCATAGG TGGT-3'；内参β-actin 上游引物为5'-TGACGTGGA CATCCGCAAAG-3'，下游引物为5'-CTGGAAGGTG GACAGCGAGG-3'。最终采用2-ΔΔCt法计算相对基因表达量。③病情程度评估：妊娠20 周后SBP/DBP为（140/90～160/110）mmHg、24 h 尿蛋白为（0.3～2.0）g 或随机尿蛋白为阳性（+）、伴有上腹部不适、头痛、视力模糊等症状为轻度子痫前期；SBP/DBP>160/110 mmHg、24 h 尿蛋白为>2.0 g 或堆积尿蛋白为阳性（++）、血清肌酐>106 μmol/L、血小板<100×109/L、出现微血管溶血、血清谷丙转苷酶或谷草转氨酶>40 u/L、伴有持续性疼痛或其他脑神经、视觉障碍、持续性上腹部不适为重度子痫前期。

1.4 观察指标

①比较子痫前期患者、健康妊娠产妇胎盘组织 中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平。②比较不同临床特征子痫前期患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平。③采用Spearman 相关系数模型分析胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平与病情程度关联性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0 对数据进行分析，计数资料以百分率（%）表示，行χ2检验；计量资料以均数±标准差（）表示，行t检验；相关性采用Spearman相关系数模型，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胎盘组织中AQP-9、HIF-1α mRNA 表达水平比较

子痫前期患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平高于健康妊娠产妇，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平比较（）

表1 胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平比较（）

2.2 不同临床特征胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平比较

不同年龄、BMI、生产经历、孕周、子痫前期家族史患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；重度子痫前期患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平高于轻度子痫前期患者，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 不同临床特征胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平比较（）

表2 不同临床特征胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平比较（）

续表2 不同临床特征胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平比较（）

续表2 不同临床特征胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平比较（）

2.3 胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA表达水平与病情程度关联性

经Spearman 相关性分析，子痫前期患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平与病情程度呈正相关（r1=0.539,P1=0.028；r2=0.615,P2=0.033）。

3 讨论

子痫前期重要生理病理表现为滋养细胞侵袭能力降低，导致子宫内膜浸润缺乏，螺旋动脉重铸障碍，损伤全身血管内皮，但具体发生发展机制需进一步研究探讨［5］。

本研究采用PCR 法测定胎盘组织中AQP-9、HIF-1α 表达水平进行分析，结果显示子痫前期患者AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 水平高于健康妊娠产妇（P<0.05）。其中AQP-9 是水甘油通道亚族中成员，在女性生殖系统中的子宫、胎盘、胎膜、输卵管中均有表达［6］；且会参与滋养细胞凋亡进程，调控机体能量代谢与渗透压平衡，对卵泡发育、囊胚形成、分娩过程均具有一定影响，会导致胎盘缺氧［7］。而与正常妊娠产妇比较，子痫前期患者胎盘组织中滋养细胞、蜕膜细胞的凋亡明显增加［8］。据此笔者猜测AQP-9 与胎盘滋养细胞凋亡有关。而缺氧环境对于细胞滋养层侵入至母体蜕膜必不可少，而HIF-1α 在缺氧条件下会调控血管内皮生长因子基因的转录，抵抗血管生成，并诱导靶基因转录，作为低氧应答反应的调控中心［9］。在子痫前期患者中会发生明显全身性小血管痉挛，影响灌流供血，导致局部组织缺氧，增加胎盘组织中HIF-1α 表达，从而改善组织对缺氧耐受性［10］。本研究为进一步探究其检测价值，对二者与病情程度关系进行分析，结果显示重度子痫前期患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平高于轻度子痫前期患者，且AQP-9 mRNA、HIF-1α mRNA 表达水平与病情程度呈正相关（P<0.05）。对于重症子痫前期患者，胎盘会长期持续性处于缺氧状态下，滋养细胞中血红蛋白结构会进一步发生变化，显著增加氧化呼吸链中活性氧，促进AQP-9、HIF-1α 表达进一步增加，呈现明显关联性［11-12］。据本研究结果推测，AQP-9、HIF-1α 参与子痫前期的发生发展，其转录表达会对滋养细胞浸润产生一定影响，可推动临床病理学研究进步，有望为子痫前期治疗提供科学性指导，具有重要意义。

综上所述，子痫前期患者胎盘组织中AQP-9、HIF-1α 表达水平会明显异常升高，且与病情程度密切相关，为子痫前期的临床病理研究提供理论依据。