组织中蛋白激酶Cε表达对乳腺癌妇女临床病理特点的影响

石瑞芳

（新乡市第一人民医院 病理科，河南 新乡 453000）

乳腺癌是多发于女性的并呈逐年上升趋势的乳腺上皮组织部位的恶性癌症，据世界卫生组织（WHO）统计，乳腺癌在全球癌症发病率中排名第二，死亡率排名第五［1］。乳腺癌患者的细胞连接较健康细胞能力弱。脱落后的乳腺癌细胞会通过血液及淋巴转移到其他器官，形成新的癌症，对人体造成危害［2］。随着对乳腺知识的普及，越来越多的女性开始重视自己的乳腺健康问题，定期对乳腺进行检测。在现有医疗水平下，能够通过蛋白指标检测来确诊乳腺癌。蛋白激酶C（PKC）是检测乳腺是否健康的指标之一。PKC 是需要依赖膜脂甘油二酯（DAG）和Ca2+的多功能丝氨酸和苏氨酸，蛋白激酶Cε（PKCε）是一种新型PKC，PKCε 激活需要DAG、磷脂或佛酸酯［3］。本文通过免疫组化法检测组织中蛋白激酶Cε 表达对乳腺癌妇女临床病理特征的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集新乡市第一人民医院2016 年10 月至2018 年10 月的乳腺癌切除手术的标本113 例，包括非特殊型乳腺癌56 例，导管原位癌38 例，特殊型浸润性乳腺癌19 例。按乳腺癌患者手术时间进行排序。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①成年女性，首次发病；②病理资料完整，按乳腺癌分期进行针对性治疗；③在手术切除前未进行其他手段治疗。排除标准：①患有其他恶性疾病的患者；②术后短期内死亡患者；③患有心脑血管疾病者。

1.3 方法

免疫组化法进行检测兔抗人PKCε 多克隆抗体浓缩液（购自武汉Abbkine 公司）；DAB 显色液购自北京梅科万德公司。收集的新鲜乳腺癌组织，使用4% 福尔马林固定14 h，石蜡包埋，切成5 μm 的薄片。利用Xylenes 脱蜡，水化10 min。将组织切片放置在枸橼酸缓冲液高温高压作用15 min，冷却到25℃左右，利用磷酸盐缓冲液（PBS）和蒸馏水各清洗3 min/次，各两次。山羊血清封闭，降低非特异性染色的概率。将多余血清倒出，加入一抗PKCε（1∶85 稀释），冰箱4℃过夜，室温下放置20 min，缓冲液5 min/次，共3次。加入二抗，缓冲剂洗3 次（3 min/次）；显色3 min，流水冲洗10 min，复染，进行酒精梯度脱水，烤箱中烘烤3 min，封片。将乳腺癌阳性切片作为阳性对照，鼠免疫球蛋白G（IgG）及PBS 代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定

将乳腺癌组织切片在光强度和放大倍数（×400）一致的显微镜中，根据阳性细胞在全部组织细胞中所占比例以及阳性细胞染色强度判定实验结果标注阳性细胞数记分。免疫组化判断标准，见表1。

表1 免疫组化判断标准

1.5 随访方法

两组均以乳腺癌切除手术日期为零点时间，通过电话联络患者、记录患者复查数据等方式，连续追踪2 年，观察肿瘤复发转移及生存率的发生情况，计算6 个月、1 年和2 年生存率。

1.6 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计软件进行数据处理。计数资料以百分率（%）表示，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PKCε 在乳腺癌中的表达

PKCε 在56 例非特殊型乳腺癌中有51 例表达为阳性，阳性率达到91.07%，在38 例导管原位癌中有31 例为阳性表达，阳性率为81.58%，19 例特殊型浸润性乳腺癌中有16 例为阳性表达，阳性率为84.21%，见表2、图1。

图1 PKCε 在乳腺中的表达

表2 113 例乳腺癌患者PKCε 蛋白表达 ［n(%)］

2.2 PKCε 在乳腺癌中的临床病理特点

在72 例47～75 岁的患者中，有59 例的PKCε呈阳性表达，PKCε 蛋白在不同年龄段中表达差异有统计学意义（χ2=9.589,P=0.008）。在乳腺癌肿瘤直径中，直径>5 cm 的患者中有93.33% 的PKCε具有高表达。淋巴结转移的乳腺癌患者有69 例，其中PKCε 蛋白具有高表达的患者有64 例，阳性表达率为92.75%，而未产生淋巴结转移的患者有44 例，PKCε 蛋白的阳性表达率为75%，比较差异有统计学意义（χ2=6.967,P=0.030）。在TNM 分期中，Ⅲ～Ⅳ期患者34 例乳腺癌组织中，31 例PKCε具有高表达，阳性率达到91.18%，但与Ⅰ～Ⅱ期患者蛋白表达比较差异无统计学意义（χ2=1.139,P=0.286）。组织学分级为Ⅲ级的组织有31 例，其中22 例PKCε 具有高表达，阳性率达70.97%，三组组织学分析结果比较差异有统计学意义（χ2=7.818,P=0.020）。见表3。

表3 PCKε 与乳腺癌组织临床病理特点的关系 ［n(%)］

2.3 PKCε 对乳腺癌患者生存率的影响

113 例乳腺癌患者2 年生存率为84.07%（95/113），PKCε 表达为阳性的2 年 生存率为85.57%（83/97），PKCε 表达为阴性的2 年生存率为75.00%（12/16）。Log-Rank 分析显示，PKCε 表达为阳性的患者2 年生存率高于PKCε 表达为阴性的患者，差异有统计学意义（χ2=3.792,P=0.043），见图2。

图2 PKCε 对乳腺癌患者预后的影响

3 讨论

乳腺癌已成为全球女性人群中患者人数最多的疾病［4］。因受生活方式改变及国家生育政策等的影响，乳腺癌呈现每年2%的增速，使中国成为乳腺癌增长率最快的国家之一［5］。虽然乳腺癌的发病情况呈现上升的趋势，但其死亡率正呈现下降的趋势。随着乳腺癌早期检测方法的不断更新和对乳腺健康认识的增加，妇女能够更早的采取治疗措施。PCK 是将蛋白质磷酸化的酶，这会造成癌细胞的凋亡过程受到影响，使细胞生存时间增长，进而通过血管转移到其他健康组织。有实验表明［6］在乳腺癌细胞中PKC 表达水平明显高于健康乳腺细胞。内分泌紊乱和免疫能力下降是形成乳腺癌的因素，而PKCε 主要活跃在内分泌系统和免疫系统中。因此，本实验通过对乳腺癌妇女切除组织中PKCε 的表达，了解其与临床病理之间的关系。

PKCε 在56 例非特殊型乳腺癌中有51 例表达为阳性，阳性率达到91.07%。在38 例导管原位癌中有31 例为阳性表达，阳性率为81.58%。113 例乳腺癌患者的切除组织中，不同年龄段之间存在较大差异，大部分集中在47～75 的年龄范围内。证明PKCε 在乳腺癌增殖表达不明显。有研究说明，PKCε 能有效调节生理功能，能够激活免疫系统，调节炎性反应等［7］。有研究表明，PKCε 在前列腺细胞中的表达水平较高，在前列腺癌细胞中的表达降低，说明其具有原癌基因的作用［8］。PKCε 与临床病理特点之间具有联系，阳性表达较阴性表达高，说明能够成为乳腺健康检查的检测指标，为乳腺癌检测提供新的标志物。有研究指出，在结肠癌细胞中PKCε 触发能够改变细胞的增殖。如果抑制PKCε 的高表达，就能够抑制乳腺癌的发生。

综上所述，组织中蛋白激酶Cε 的表达升高与乳腺癌的患者的年龄、肿瘤直径、TNM 分期及淋巴结转移之间具有相关性，PKCε 的表达水平能够成为检测乳腺癌的重要标注。