气相色谱检测氯甲酸正戊酯中有关物质的方法研究

王志鹏，王焕霞，王宏侠，唐海，周微

（江苏天士力帝益药业有限公司，天津 300410）

氯甲酸正戊酯是合成卡培他滨等药物的重要工业原料[1-3]。它是以正戊醇与过量的氯甲酸三氯甲酯发生酰化反应得到的[4-6]。由于起始原料正戊醇中可能含有2-甲基丁醇和3-甲基丁醇两个同分异构体，它们可能引入副产物氯甲酸-2-甲基丁酯及氯甲酸-3-甲基丁酯。另外，可能存在副产物碳酸二戊酯以及未反应完的正戊醇。因此，在制定氯甲酸正戊酯的质量标准中，应对上述杂质进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890A 气相色谱仪（美国安捷伦公司）；chromeleon 7 色谱工作站（美国赛默飞公司）；Mettler XS105DU 电子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2 试药氯甲酸正戊酯样品

新沂市汇力精细化工有限公司，批号： 201711011；氯甲酸-2-甲基丁酯工作对照品：自制，批号20170501，含量99.7%；氯甲酸-3-甲基丁酯工作对照品：自制，批号20170501，含量99.1%。正戊醇：新沂市汇力精细化工有限公司，批号201702005，含量99.2%；碳酸二戊酯工作对照品：自制，批号20170501，纯度99.3%。

2 方法与结果

2.1 色谱条件以100%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱（安捷伦DB-1 30 m×0.53 mm， 3 μm 色谱柱适用）；进样口温度为150 ℃；检测器温度为250 ℃；起始温度为80 ℃，维持5 min，以每分钟20 ℃的速率升温至200 ℃，维持10 min；进样量1 μL，分流比为10∶1；载气流速为2 mL/min。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品储备液取氯甲酸-2-甲基丁酯、正戊醇、碳酸二戊酯、氯甲酸正戊酯适量，加二氯甲烷制成每1mL 分 别 约 含0.1 mg、0.12 mg、0.4 mg、0.1 mg 的单标储备液及同浓度的混合储备液。另制备每1 mL含氯甲酸-3-甲基丁酯0.1 mg 的单标储备液。

2.2.2 供试品溶液称取氯甲酸正戊酯样品约200 mg，精密称定，置10 mL 量瓶中，加二氯甲烷制成每1 mL 约含20 mg 的溶液，作为供试品溶液。

2.2.3 混合对照品溶液精密量取供试品溶液1 mL 置100 mL 量瓶中，加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL 置20 mL 量瓶中，精密加入2.2.1 项下的对照品混合储备液1 mL，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 系统适用性试验取上述“2.2”项下的对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液（二氯甲烷）。按照“2.1”项下的色谱条件分别进样，结果该色谱条件下，对照品溶液中各色谱峰的对称性良好，理论塔板数大于100 000，色谱峰间分离度大于6.7，符合2020年版《中国药典》的相关规定。见图1。

图1 GC 色谱图Fig.1 Gas chromatograms

2.3 专属性试验

采用强制降解试验考查色谱系统的专属性。取氯甲酸正戊酯对照品约200 mg，置20 mL 量瓶中，分别进行以下破坏性试验：强酸降解：①0.1 mol/L HCl 1 mL 85 ℃水浴破坏40 min，中和。②强碱降解：0.1 mol/L NaOH 1 mL 85 ℃水浴破坏40 min，中和。③高温破坏：85 ℃水浴加热40 min。④氧化破坏样品：3%双氧水1 mL，85 ℃水浴40 min。精密量取10 mL 二氯甲烷萃取上述溶液，各取有机层1 μL 注入气相色谱仪测定。结果表明，氯甲酸正戊酯遇水会水解产生少量正戊醇，碱性高温条件下水解速率稍快，与主峰分离良好。

2.4 线性关系试验

取“2.2.1”项下的对照品储备液3 mL，2 mL，1 mL，0.5 mL，0.2 mL，140 μL，40 μL 置10 mL 量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为线性关系1-7 号溶液。重复上述操作，单独配制氯甲酸-3-甲基丁酯溶液。分别进样，以质量浓度 C（μg/mL）为横坐标，峰面积 A 为纵坐标，进行线性回归，结果见表 1。

2.5 定量限与检测限

取混合对照品溶液，用二氯甲烷逐步稀释，按“2.1”项下色谱条件测定，分别以S/N=10、 S/N=3 求得各杂质的定量限（ LOQ）和检测限（ LOD），结果见表 1。

表1 氯甲酸正戊酯中5 种成分线性方程、LOD 及LOQTab.1 The LOD， LOQ and the linear equation of 5 ingredients in pentyl chloroformate

2.6 仪器精密度

按“2.2.3”项下方法制备混合对照品溶液，连续进样 6 次，测定峰面积，结果正戊醇、氯甲酸-2-甲基丁酯、氯甲酸正戊酯、碳酸二戊酯峰面积的 RSD 分别为 1.6%、 1.6% 、1.9%和1.2%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性样品

取氯甲酸正戊酯（批号：201711011）按照“2.2”项下制成6 份供试品溶液和对应的混合对照品溶液，分别进样，按外标法测定样品中氯甲酸-2-甲基丁酯、正戊醇、碳酸二戊酯含量，结果见表2。

表2 重复性试验数据Tab.2 Data of repeatability test

2.8 准确度试验

取氯甲酸正戊酯3 份，每份约200 mg，置10 mL 容量瓶中，分别加氯甲酸-2-甲基丁酯储备液2.2 mL，正戊醇储备液2.9 mL，碳酸二戊酯储备液2.0 mL，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为150%水平回收率样品溶液。

100%水平回收率样品溶液：取氯甲酸正戊酯6份，每份约200 mg，置10 mL 量瓶中，分别加氯甲酸-2-甲基丁酯储备液1.2 mL，正戊醇储备液1.9 mL，碳酸二戊酯储备液1.0 mL，加二氯甲烷制成100%水平回收率样品溶液。取氯甲酸-3-甲基丁酯制备回收率试验溶液，杂质添加量同氯甲酸-2-甲基丁酯。分别进样，测定杂质回收率，结果见表3。

表3 回收率试验Tab.3 Data of the recovery test

（续表3）

2.9 溶液稳定性

将对照品溶液和供试品溶液在室温下放置24 h，分别于0，6，12，18，24 h 进样，测定杂质峰面积。结果表明，对照品溶液在室温下24 h 内稳定，而供试品溶液中正戊醇有增加趋势，应临用现配。

2.10 耐用性试验

对方法耐用性进行试验，通过改变流速（2.0±0.1） mL/min、升温速率（20±1） ℃/min、进样口温度（150±2） ℃、检测器温度（250±2） ℃等试验条件，考察各色谱峰分离情况，结果各色谱峰之间分离良好。表明本试验方法的耐用性良好。

3 讨论

（1）氯甲酸-2-甲基丁酯和氯甲酸-3-甲基丁酯均为工艺杂质，为同分异构体，一般色谱条件无法将二者分离，本试验条件可以对二者总量按照单一杂质进行控制，标准更加严格。

（2）本试验条件可以有效对正戊醇、氯甲酸-2-甲基丁酯（氯甲酸-3-甲基丁酯）、碳酸二戊酯进行分离，峰形良好，能准确控制氯甲酸正戊酯中的有关物质。