广藿香加入陈皮后提取工艺及测定条件的优化研究*
2021-12-03齐乐辉龙丹丹许树军
齐乐辉，龙丹丹，田 园，许树军
（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040）
广藿香味辛，微温，尤其在治疗胃肠道系统疾病方面有很好的疗效。因为广藿香的挥发油性成分不易溶于水，非挥发性成分溶于水，且人们服用药物时基本是用水进行送服，因此，对于广藿香中的非挥发性成分即水溶性成分的研究有很重要的实际意义。根据现代药理学研究，广藿香具有抗氧化、抗癌、抗炎、抗病原微生物、胃肠系统保护、抗呼吸道感染[1-3]等作用。
陈皮对于改善心血管系统、消化系统、内分泌系统的功能[13,14]等方面具有很好的药效活性。中医临床上经常使用广藿香和陈皮两种药材，陈皮和广藿香都可用于治疗恶心呕吐，并且中医临床中二者的配伍应用广泛，对于加入陈皮后对广藿香中某种化学成分的提取效率的影响的研究是有据可循的。药物的药理效应基础在于其化学成分，尤其是有效活性成分[4,5]。可以结合运用“药对”的相关知识，探讨陈皮对广藿香中某些成分的提取效率是否有积极的影响，可对将来增强广藿香的有效药理活性或者降低广藿香的某些不良反应的相关研究提供切实可行的研究方法。
1 实验部分
1.1 仪器及材料
LT502型电子天平（常熟市天量仪器有限责任公司）；KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HR-20 1000g多功能粉碎机（上海哈瑞斯电器有限公司）；Ultimate 3000超快速液相色谱仪（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）。
广藿香药材产于广东肇庆；姜厚朴产于浙江；香草酸和原儿茶酸对照品购于上海源叶生物科技有限公司；甲醇（色谱纯天津星马克科技发展有限公司）；乙腈、H3PO4均为色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司；纯净水为娃哈哈集团生产。
1.2 药材的粉碎
使用LT502E电子天平分别称取广藿香药材500g，陈皮药材200g。使用HR-20多功能粉碎机粉碎广藿香和陈皮药材。粉碎结束后将药材粉末密封，置于常温干燥的地方保存。
1.3 提取方法的优化
1.3.1 提取正交试验设计 为了使本实验最终提取所得到的非挥发性成分（原儿茶酸、香草酸）含量较高，使HPLC测定得到的色谱图效果更佳，总结分析相关知识，最终讨论决定了可行性较高的正交实验方法。使用L4（23）正交作用表，用每次提取时间（min），广藿香-陈皮配料比和蒸馏水用量（mL）作为考察因素，用香草酸的峰面积（mAu·min）作为评价指标，进行试验得出提取效率最高的广藿香提取条件。
表1 因素水平Tab.1 Factor levels
1.3.2 提取方法的选择 电子天平称取粉碎过后的广藿香药材粉末2.5g，用250mL具塞锥形瓶或圆底烧瓶盛装。按表2中的实验过程进行提取，到时间后停止加热，减压抽滤，留滤渣，放入原仪器中。再按照原实验流程重复提取2次，合并3次滤液。
1.4 色谱条件的优化
为了在短时间内实现快速分离并得到最佳峰形，在正式试验开始之前，对流动相、检测波长和洗脱程序等色谱条件进行了优化，使最终经HPLC测定得到的色谱峰能够更好的分离开来。
对于流动相的选择，现用于HPLC检测广藿香水溶性成分的流动相乙腈-0.1%磷酸水对广藿香水提取液进行过检测。本实验分别使用了254nm作为检测波长对广藿香水提取物进行了测定。采用的色谱条件及洗脱程序见表2。
表2 洗脱程序Tab.2 Elution procedure
2 结果与讨论
2.1 提取方法的选择
图1为广藿香及广藿香－陈皮药对的HPLC色谱图。
图1 广藿香及广藿香-陈皮药对的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of Patchouli and Patchouli-Tangerine peel
由图1可知，S2中的色谱峰数目比S1中的多，S2中的色谱峰较高，峰型比较对称。因此，选用加热回流提取作为本实验的提取方法。流动相为乙腈-0.1%磷酸水时，广藿香提取液经HPLC测定，10min内色谱峰数目最多，色谱峰的峰形与其他的色谱图比较起来最好。并且H3PO4不仅可以作为色谱修饰剂，而且对某些化合物也有电离作用，因此，在流动相中加入0.1%的H3PO4溶液有助于使提取溶剂中的化学成分快速分离并显示出最佳峰形。
2.2 正交实验结果
从表3中可以发现，影响峰面积大小的因素主次顺序为B＞A＞C，广藿香提取效率最优的组合为A1B1C1。因此，可以确定A1B1C1为水加热回流提取的最佳工艺，即：每次提取时间为30min，广藿香-陈皮药材配料比为1∶1，蒸馏水每次用量为50mL。
表3 正交实验结果Tab.3 Orthogonal experiment results
3 结论
采用蒸馏水为提取溶剂，加热回流提取广藿香中的水溶性成分效果最佳。正交实验结果显示，影响香草酸的峰面积大小的因素主次顺序为B＞A＞C，即广藿香-陈皮配料比＞每次提取时间＞蒸馏水用量；广藿香提取效率最优的组合为A1B1C1。因此，可以确定A1B1C1为水加热回流提取的最佳工艺，即：每次提取时间为30min，广藿香-陈皮药材配料比为1∶1，蒸馏水每次用量为50mL。色谱条件优化结果显示，采用乙腈-0.1%磷酸为流动相，254nm为检测波长进行梯度洗脱效果最佳。
